一種高靈敏及高選擇性熒光“關-開”分析測定谷胱甘肽的方法研究

覃小寧， 秦 蒙， 凌芊芊， 梁淑彩*， 鄢國平

(1.武漢大學藥學院，湖北武漢 430072;2.武漢工程大學材料科學與工程學院，湖北武漢 430074)

谷胱甘肽(GSH)是一種重要的低分子量巰基化合物，它在細胞內發揮著不可替代的作用，如保持細胞免疫系統的正常功能，維持細胞內的氧化還原平衡和解毒等[1]。此外，GSH在延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤等功能性食品或藥品中也較多應用[2，3]。因此，對于生物樣品、食品、藥品等樣品中GSH的檢測有重要意義。已有的巰基化合物測定方法有光譜分析法[4 - 6]、液相色譜分析法[7],高效毛細管電泳法[8]，電化學分析法[9，10]等。其中熒光分析法具有簡便、成本低、靈敏度高的優點而受到關注[4 - 6,11]。然而，盡管已有很多巰基熒光探針的報道，但它們大多數用于熒光分析測定樣品中巰基的總量，在進行GSH測定時，易受到其結構類似物半胱氨酸(Cys)及高半胱氨酸(HCy)的干擾。近年來，對于具有GSH選擇性的熒光探針研究開始受到關注[12，13]，如已有基于GSH與金屬離子的選擇性相互作用而開發的GSH探針[14]。

萘酰亞胺類化合物是一類重要的熒光染料，已較多用于熒光探針的研究[15]。4-硝基-N-丁基-1,8-萘酰亞胺(BNNA)是一個簡單的萘酰亞胺衍生物，廣泛用于萘酰亞胺類化合物的合成[16，17]。由于具有受體-π-受體電子結構，其中的-NO2易發生親核取代反應，有望用于巰基化合物的測定。本文研究了BNNA與GSH、Cys和HCy等巰基化合物以及其他非巰基氨基酸反應前后的熒光光譜，發現BNNA無熒光，GSH能使其熒光顯著增強，而Cys、HCy和其他非巰基氨基酸對BNNA的熒光沒有或僅有弱的影響。……