酶聯免疫法在農產品質量安全檢測中的應用研究進展

林光強

本文介紹酶聯免疫法在農產品質量安全檢測中的應用研究情況。對酶聯免疫法的原理，以及在獸藥殘留、農藥殘留、生物毒素檢測中的應用作了具體的介紹。并闡述了酶聯免疫法在農產品質量安全檢測中的應用前景。

農產品質量安全的保障，一方面靠農業生產者的自律，另一方面更需要檢測技術發展的支撐。目前農產品質量安全檢測技術主要有快速檢測和定量檢測。快速檢測技術更適宜于基層監管機構、檢測機構和農產品生產者使用，它具有相對簡單的操作流程和技術要求。

一、酶聯免疫法的原理

酶聯免疫法簡稱酶標法（英文簡稱ELISA），是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術，自70年代初問世以來，迅速發展，現在已廣泛用于生物學和醫學科學等多個方面。酶聯免疫法的原理是：抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記，加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，利用產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，從而進行定性或者定量分析。酶聯免疫法常用的檢測儀器是酶標儀，主要有兩種常見類型手動型和全自動型。手動型靠手動移動微孔板來進行檢測，一般為單通道型，儀器小巧，結構簡單。全自動型酶標儀，一般采用多通道，是在手動單通道的基礎上發展而來，運用微機處理系統，檢測精度高、重復性好、速度快。

二、酶聯免疫法在獸藥殘留檢測中的應用

隨著規模化養殖的逐漸擴大，養殖生產中獸藥的使用會越來越多。不規范使用獸藥和違規使用獸藥的現象日益突出。特別是一些違禁獸藥的使用會對人體造成極大的傷害，輕者出現過敏、惡心、嘔吐，重者甚至出現中毒，引發生命危險。常規實驗中畜禽水產品中檢測獸藥殘留的方法一般是采用液相色譜法、液相色譜串聯質譜法，這兩類方法都需要昂貴的儀器設備，相對復雜的前處理過程，需要較多的時間，較高的實驗技術水平。而酶聯免疫法與其相比具有儀器設備簡單、前處理過程少、時間短，適合基層人員在日常工作開展中應用。

畜禽產品檢測中酶聯免疫法的應用情況。李亞楠等采用酶聯免疫法對動物組織中呋喃妥因代謝物殘留進行檢測，豬肉、雞肉回收率在82.6%～104.7%，檢出限為0.115、0.113μg/kg，該方法適合豬肉、雞肉樣品的檢測。楊燕燕采用酶聯免疫法對豬尿、豬肉和豬肝中鹽酸克倫特羅進行了檢測，發現在豬尿中鹽酸克倫特羅的方法比較成熟，回收率可滿足需要，豬肉中鹽酸克倫特羅方法回收率偏低，基本可以滿足需要，但是在豬肝中鹽酸克倫特羅方法存在一定的差異，需要進一步改進。蜂蜜中采用酶聯免疫法可檢測四環素族抗生素、泰樂菌素、氯霉素殘留，并有相關國家標準可以參考。

水產品檢測中酶聯免疫法的應用情況。張勝幫等采用酶聯免疫分析法對水產品中氯霉素殘留量進行了檢測，樣品回收率為92.5%～102.0%，檢出限為0.009ng/ml，變異系數為3.0%，相對偏差為3.4%～7.1%，該方法適合水產品中氯霉素殘留的檢測。鄭百芹等采用酶聯免疫法開發了一種快速檢測魚肉中喹諾酮類藥物的試劑盒，并檢測了魚肉樣品中氧氟沙星、環丙沙星、氨氟沙星3種喹諾酮類藥物，樣品檢測限為1μg/kg，批內、批間相對偏差均小于10%，該方法可適合魚肉樣品的檢測。

三、酶聯免疫法在農藥殘留檢測中的應用

農藥殘留超標中毒事件，在我國時有發生，而在出口貿易中存在農藥殘留超標引發貿易受阻的問題也屢見不鮮。農藥殘留對我國蔬菜產品的質量安全和人民的健康安全具有重要的影響。果蔬中農藥殘留快速檢測方法常用酶抑制率法和酶聯免疫法。酶抑制率法方法比較成熟，但是只能用于定性判定，而且由于樣品取樣和操作的影響，檢測結果相對誤差比較大，重復性差。農殘檢測常用的定量檢測方法一般是氣相色譜法、氣相色譜串聯質譜法，準確度高，前處理過程復雜，儀器設備昂貴，檢測時間長。酶聯免疫法檢測過程簡單，可以大量快速篩查，目前許多國際權威分析檢測農藥都首選這種方法，并且很多農藥類別都建立了酶聯免疫法。

曾俊源等采用酶聯免疫法測定了桃中氰戊菊酯，回收率在81%～106%，相對偏差5.1%～7.7%，檢出限為0.014mg/kg，該方法可用于桃中氰戊菊酯快速的定量測定。華修德采用酶聯免疫法對卷心菜、蘋果、青菜樣品中的甲基對硫磷、對硫磷、殺螟硫磷單個農藥進行了測定，回收率在78.9%～118.1%之間，并用氣相色譜法的測定結果進行了比較驗證，兩種分析方法的測定結果接近，表明該方法可以用于檢測不同樣品中有機磷農藥的殘留檢測。

四、酶聯免疫法在生物毒素檢測中的應用

生物毒素是由于微生物新陳代謝過程中產生的具有危害身體健康的物質。其中的一些種類對人類危害較大，是食品污染最重要污染因素之一，而毒性最大、致癌能力強當屬黃曲霉毒素，它在小麥、玉米、稻米、茶葉等農作物產品中最易感染，且不易察覺。黃曲霉毒素是一種具有雙呋喃環和氧雜萘鄰酮的復雜結構，已發現有B1、B2、G1、G2、M1、P1等17種多結構亞型化合物，其中以B1結構的黃曲霉毒素毒性最強，理化性質穩定，因此目前世界上都將黃曲霉毒素B1檢出量作為食品黃曲霉污染和評價安全的重要指標。黃曲霉毒素常用的定量測定方法是高效液相色譜串聯質譜法，測量準確度高，但是儀器設備價格昂貴，實驗技術水平要求高，時間長。而酶聯免疫法相比具有儀器設備便宜，操作簡便，時間短的優勢。

Stachowiak等采用酶聯免疫法建立了檢測黃曲霉毒素B1直接競爭法，通過對單克隆抗體準確度的實驗確定了兩種單克隆抗體，半抑制濃度分別是0.037ng/ml和0.031ng/ml，該方法可以用于黃曲霉毒素B1的快速刷查。謝琿等采用酶聯免疫法建立了黃曲霉毒素B1間接競爭法，回收率在85%～120%內，檢測限為1.04μg/l，可用于實際樣品的快速檢測。

農產品質量安全隨著我國社會和經濟的快速發展會越來越重要，覆蓋各個層次的監管機構、檢測體系也會更加完善，基層監管、檢測機構和農產品生產主體在實際工作中對于快速準確的檢測方法需求會更加明顯。酶聯免疫法具有靈敏度高、特異性強、成本低，設備簡單，不需要專業的人員操作，就可以快速檢測，該方法必將在基層得到大量廣泛的使用，為我國農產品質量安全生產貢獻重要力量。

（作者單位：638400四川省廣安市武勝縣農產品質量安全監督檢驗檢測站）