廣西百色壯族原發性高血壓與β2腎上腺素能受體基因多態性的相關性

袁 敏，黃桂忠，韋必曉，吳杏起，劉華勇，廖馳林，梁 東，陳秀林，梁林慧

(1.右江民族醫學院研究生院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫學院附屬西南醫院 心內科，廣西 百色 533000)

高血壓成為我國當前患病率較高的疾病之一，且呈現逐年上升的趨勢，估計當前約有2.7億患者，而且民眾對疾病還缺乏深層次的認識，在治療和預防方面都有待提高。該病的發病機制相對來說較為繁雜[1-3]。其具體發病機制仍有待進一步深入研究，截至目前為止，交感神經系統活性亢進導致兒茶酚胺分泌增加，血管收縮導致血壓升高被認可為主要機制，其他還包括腎素-血管緊張素系統(RAS)激活、腎臟機制等。交感神經中的β2-AR是使血管舒張的主要受體，它主要分布于血管平滑肌細胞和腎臟細胞內，通過調節血管的緊張性、腎臟排泄和腎素釋放起而到調節血壓的作用。因此，當β2-AR出現變異時，β2-AR擴張血管的作用可能會減弱，從而導致血壓升高[4]。有研究表明，β2-AR基因有多態性，且有原發性高血壓相關的易感基因，因此可以通過在分子生物探尋原發性高血壓的發病機制，從而增加醫務人員對高血壓的治療方法，并提高對該疾病的防治措施和認識[5]。

1 資料與方法

1.1采用隨機的抽樣方式，百色市及各區縣人民醫院2019年9月15日-2019年10月25日在以上醫院高血壓門診就醫的98例當地壯族原發性高血壓患者為病例組，男64例，女34例，年齡25～80歲，平均(56.89±12.26)歲。患者至少有2年高血壓病史和服用降壓藥控制于正常水平的患者并且3代之內沒有異族通婚史的當地壯族居民。對照組選取2019年9月15日-2019年10月25日于百色市及各區縣人民醫院體檢中心的109例當地壯族健康正常人。男45例，女64例，年齡25～80歲，平均(55.91±14.11)歲。所有受試者均知曉該項研究的項目和內容，均同意并自愿參與此項研究，受試者本人簽署了同意書。同時受試者們填寫了有關信息的調查表。

1.2方法 (1)納入標準：根據1999年WHO/ISH高血壓治療指南，選取收縮壓≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，舒張壓≥90 mmHg的患者。(2)排除標準：心血管病變(如主動脈關閉不全、主動脈縮窄)、腎臟疾病(如腎動脈狹窄、腎小球疾病)、內分泌系統疾病(如皮質醇增多癥、原發性醛固酮增多癥、甲狀腺功能亢進癥、甲狀腺功能減退癥、糖尿病)、顱腦疾病(如腦外傷、腦干感染)、妊娠以及不能耐受檢查的人員。

1.3問卷調查 將所需要的數據和信息設計為表格和問卷并填寫，如家族史、肌酐、尿酸等。

1.4一般健康指標檢測 按照間接測量法，測量非同日血壓，血壓測量不得少于3次，取平均值。

1.5提取受試者的全血DNA 取出核酸提取試劑盒(磁珠法)(重慶中元生物技術有限公司)中的各組分平衡至室溫，進行下一步操作，需將可能黏附在96孔鋁膜及孔壁的液體甩至孔底部，靜置3～5 min備用。在96孔深孔板a1到h1，a7到h7孔位依次加入20 μl的蛋白酶K。在96孔深孔板a1到h1，a7到h7孔位依次加入200 μl的受試者的全血，打開核酸提取儀進入程序頁面(ZY-WB-DNA)，進行程序設定，程序編輯好后，點擊“開始”運行，程序完成提取過程約需要20 min。程序設定見表1。

表1 運行程序的設定

1.6檢測基因多態性 引物的合成與設計：由南寧國拓生物科技有限公司根據所需檢測位點設計β2-AR基因的rs6879202、rs2053044位點的 PCR 擴增引物。引物序列如下(5’-3’)：Rs6879202-F：ACTGCTGTGTGAAGACCTCCC；Rs6879202-R：CTTCAGATACAAATTACCAGCAGC；Rs2053044-F：AACAGATAATGAGTGAGTGATGCC；Rs2053044-R：ACTCCGAACTTGCCTCACC。

1.7SNP的檢測 將所有標本的DNA送至南寧國

拓生物科技有限公司進行檢驗，(1)目的片段PCR擴增；(2)酶切PCR擴增產物；(3)PCR 產物電泳檢測；(4)PCR產物純化，檢測結果通過SoftGenetics GeneMarker VI.91軟件分型并輸出結果。

2 結 果

2.1相關因素 患者飲酒率、吸煙率、是否有家族高血壓史、性別以及職業與原發性高血壓呈現一定的相關性(P<0.05)，相反學歷與原發性高血壓并沒有一定的相關性(P>0.05)。見表2。

表2 兩組相關因素比較[例(%)]

2.2生化指標 病例組與對照組之間比較，年齡、總膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇之間差異無統計學意義(P>0.05)。病例組與對照組之間的尿素氮、肌酐、甘油三酯、尿酸、低密度脂蛋白膽固醇和空腹血糖與原發性高血壓均呈現一定的相關(P<0.05)。見表3。

2.3基因直接測序結果 見圖1～3。

2.4遺傳平衡檢驗 病例組中β2-AR基因rs6879202位點和rs2053044位點多態性分布皆與HWE定律(P>0.05)相符；百色地區壯族對照組β2-AR基因rs6879202位點和rs2053044位點多態性也符合HWE定律(P>0.05)，體現病例組和對照組的兩個位點選取樣本具群體代表性。見表4。

表3 兩組生化指標比較

表4 兩組遺傳平衡檢驗

2.5β2-AR基因型與等位基因頻率分布 β2-AR基因位點rs6879202基因型頻率分布，在病例組與對照組差異有統計學意義(P<0.05)，然而其等位基因頻率分布，兩組差異無統計學意義(P>0.05)；β2-AR基因位點rs2053044基因型頻率分布，兩組差異無統計學意義(P>0.05)，而且其等位基因頻率分布，兩組差異亦無統計學意義(P>0.05)。由此可得，百色地區壯族患者β2-AR基因rs6879202位點多態性與原發性高血壓有相關性，而β2-AR基因rs2053044位點多態性與百色壯族的原發性高血壓沒有相關性。見表5。

表5 兩組β2-AR基因型與等位基因頻率分布[例(%)]

2.6原發性高血壓患者β2-ARrs6879202易感基因型的logistic分析 采用logistic回歸來探討各個基因對誘導患者高血壓的危險性的大小。對統計學差異的基因位點，自變量X為各個基因頻率，因變量為是否產生高血壓。對rs6879202位點而言，可以看出CG基因頻率較其他兩個基因頻率更容易誘導原發性高血壓。見表6。

表6 原發性高血壓患者rs6879202易感基因型的logistic回歸結果

3 討 論

復雜的環境因素與遺傳因素是導致高血壓的主要原因，參與血壓調節的任何一個候選基因的變異都有可能導致高血壓，而β2-AR就是調節血壓的一個重要的候選基因。

β2-AR的全核苷酸序列位于染色體5q31-q32，該基因沒有內含子，只有一個外顯子，長約1 239個堿基，總共編碼413氨基酸，其相對分子質量為64 000，由3個細胞外環，3個細胞內環，細胞外氨基末端及細胞內的羧基末端7次跨膜段組成，β2-AR總共還有3個功能區：胞外區域、跨膜區域和胞內區域，β2-AR中在編碼區總共有11個多態位點，在調控區，有10個多態位點，即該基因含有21個多態位點[6-8]。當交感神經興奮時釋放的兒茶酚胺作用于β2-AR上，并通過受體-G蛋白-AC-cAMP-PKA通路對平滑肌產生抑制性效應使得血管擴張和血壓下降[9-11]。因此，當β2-AR存在基因多態性時，可能導致β2-AR對血壓的調節部分或者全部喪失，從而導致血壓升高。早期Reihsaus等[9]研究就發現β2-AR有3個多態位點+46、+79、+491可能與高血壓有關，+46位點的A突變為G使得β2-AR16位的氨基酸由精氨酸突變為甘氨酸；+79位點的C突變為G使得β2-AR27位的氨基酸由谷氨酰胺突變為谷氨酸；+491位點的C突變為T使得β2-AR164位的氨基酸由蘇氨酸突變為異亮氨酸。近幾年來，研究較多的位點主要是Glyl6和Gln27Glu[12]，有多項研究表明β2-AR 基因多態性與原發性高血壓有關，雖然國內外就高血壓有關基因的研究成果多，但大家的結論卻并不一致。而且有國外研究表明β2-AR基因多態性與人群的民族特征具有一定的相關性。例如Kotanko等[13]在加勒比海地區，對本地非洲人后裔進行調查研究，通過研究當地人β2-AR 基因 Glyl6 等位基因，發現該地區患高血壓與Glyl6基因有關。栗程等[14]在對西北地區漢族的182例高血壓患者與104例血壓正常者的β2-AR基因Gln27Glu基因多態性的研究中發現：Gln27Glu基因與該地區原發性高血壓沒有相關性。李南方等通過對新疆哈薩克族人群β2-AR的G252A和C523T的多態性研究發現：當地人群患高血壓與這兩個位點的基因型、等位基因、基因聯合型無關[15]。吳弘等[16]通過對166例高血壓患者和98例健康者的研究中發現：在β2-AR的5’-調控區有兩個基因多態位點(654位和1023位)，在對這兩位點進行多態性研究中發現，1023位的等位基因型(AA)與重度高血壓相關。吳杏起等通過對36例患有高血壓的壯族人群和36例該民族的健康人群研究中發現：β2-AR的rs6879202和rs2053044位點與原發性高血壓無關[17]。Alghasham等[18]對沙特人群的β2-AR基因G46A多態性中，發現原發性高血壓與G46A沒有顯著性差異。

為進一步探索β2-AR基因多態性與原發性高血壓以及民族特征的關系。本文選取百色地區壯族3代內沒有異族通婚史的人群作為研究對象，得出，β2-AR基因rs6879202位點與百色地區壯族人群的原發性高血壓有相關。同時發現β2-AR基因rs2053044位點多態性與該地區的該民族原發性高血壓不存在相關系。通過Logistic回歸分析對β2-AR基因rs6879202位點進行危險因素分析，發現CG人群患高血壓的頻率較高，這可能為我們提供一些關于如何保護高?；蝾l率患者的建議，他們在平常的生活中更易發病，應給予更多的關注。對于β2-AR基因rs6879202位點為CG的人群，在職業方面，可以建議這些人從事工作壓力較小的行業，比如教師、保安、文員、公務員等，盡量不去從事警察、管理員、醫生、工人等負荷較重行業[19]。在生活習慣方面，可以建議這類人群少抽煙、適當的進行體育鍛煉、減少鈉的攝入、多吃膳食以及提高飲食依從性等[20]。

綜上，β2-AR基因rs6879202位點與百色地區壯族人群的原發性高血壓有關聯，尤以CG型基因的攜帶者最為顯著，其更容易誘發高血壓。但本研究樣本含量有限，更深入的研究需要去證實此結論，從而找出原發性高血壓的發病機制。并由此為我國心血管部門的醫務人員提供相關的研究成果，增加醫務人員對高血壓的治療方法和提高對該疾病的防治措施和認識。