不同劑型養陰清肺丸微生物污染程度探討

王靜，張秀花，任仲麗，閆世生，盛春雷

(菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤)

0 引言

養陰清肺丸由地黃、麥冬、玄參、川貝母、白芍、牡丹皮、薄荷、甘草八種中藥組成。主要作用為補益劑，具有養陰潤燥，清肺利咽之功效，主治陰虛肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中帶血[2]。本品屬純中藥制劑，副作用小，價格便宜，市場需求量大，越來越受到病患的關注。作者在2019 年風險監測樣品檢驗過程中，通過全國四家藥品生產企業提供的微生物限度檢查方法適用性試驗資料發現，四家企業的方法適用性試驗均存在差異；在此基礎上，本實驗室參照其提供方法適用性試驗對30 批次樣品進行了檢驗，并對其檢驗結果進行統計，分析微生物污染程度。

1 試驗材料

1.1 樣品

1.1.1 北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠

大蜜丸14 批次：批號分別為18010482 兩批次、18010204、18010480、18010483、18010364、18010367、18010494、18010135、18010360、18010476、17016020、18010487、18010162。

水蜜丸11 批次：批號分別為17035535 三批次、17035131兩 批 次、17035536 兩 批 次、17035537、17035290、17035132、17035288。

1.1.2 山西華康藥業股份有限公司

水蜜丸3 批次，批號分別為20190202、20181202、20181201。

1.1.3 呼倫貝爾松鹿制藥有限公司

大蜜丸1 批次，批號為181213。

1.1.4 頸復康藥業集團赤峰丹龍藥業有限公司

大蜜丸1 批次，批號為1705052。

1.2 培養基與稀釋液

胰酪大豆胨瓊脂培養基(批號：190518)、沙氏葡萄糖瓊脂培養基(批號：190625)、胰酪大豆胨液體培養基(批號：190712)、PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液(批號：190520)麥康凱瓊脂培養基(批號：170925)、麥康凱液體培養基(批號：171205)腸道菌增菌液(批號：180222)、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基(批號：180627)木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基(批號：170804)等均由北京陸橋技術股份有限公司生產。

1.3 儀器

電子天平(HZT-A600，福州華志科學儀器有限公司)、高壓蒸汽滅菌器(MLS-3781L-PC，三洋工業株式會社)、生物安全柜(Class ⅡBSC，新加坡ESCD 公司)、細菌濁度分析儀(WGZ-2XJ，上海盺瑞儀器儀表有限公司)、電熱恒溫培養箱(DHP-420，北京市永光明醫療儀器廠)、生化培養箱(SPX-150B，上海博泰實驗設備有限公司)。

2 方法

2.1 供試液制備

取供試品10g，加pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL，勻 漿，制 成1：10 供 試 液；取 上 述 供 試 液1mL 加 至9mLpH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，制成1：100 的供試液，依法制成1：1000 的供試液。

2.2 需氧菌計數、霉菌及酵母菌計數

2.2.1 常規法

取1：10 供試液，依相應微生物計數法操作。

2.2.2 增加稀釋液法

取1：10 供試液2mL，加pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10mL，制成1：50 供試液，依相應微生物計數法操作。

2.3 控制菌檢查

2.3.1 耐膽鹽革蘭陰性菌

2.3.1.1 常規法

分別取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供試液各1mL 加入10mL腸道菌增菌液體培養基中，依相應控制菌檢查方法檢查。

2.3.1.2 增加培養基體積法

分別取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供試液各1mL 加入50mL腸道菌增菌液體培養基中，依相應控制菌檢查方法檢查。

2.3.2 大腸埃希菌

常規法 取2.1 中1：10 供試液10mL，接種至100mL 胰酪大豆胨液體培養基中，依相應控制菌檢查方法檢查。

2.3.3 沙門菌

2.3.3.1 常規法

取供試品10g，接種至100mL 胰酪大豆胨液體培養基中，勻漿，依相應控制菌檢查方法檢查。

2.3.3.2 增加培養基體積法

取供試品10g，接種至200mL 胰酪大豆胨液體培養基中，勻漿，依相應控制菌檢查方法檢查。

2.4 四家生產企業提供微生物限度檢查方法適用性試驗及結果。

2.5 30 批次樣品微生物限度檢驗結果。

3 討論

3.1 微生物限度檢查法

系檢查非規定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法[3]，其檢驗項目包括微生物計數及控制菌檢查。從表1、表2可看出，因原料產地、批次、輔料及生產工藝存在一定差異，不同企業的方法適用性試驗不同，不能固定沿用同一種微生物限度檢查法，而應該通過方法適用性試驗確定其可行性及可靠性[4]。

表1 四家生產企業提供的微生物限度檢查方法適用性試驗

表2 四家生產企業提供需氧菌、霉菌和酵母菌回收比值

表3 30 批次樣品微生物計數檢驗結果統計

表4 30 批次樣品致病菌檢驗結果統計

3.2 從表3 可以看出，大蜜丸需氧菌總數檢出率為37.5%，霉菌和酵母菌總數檢出率為31.2%；水蜜丸需氧菌總數檢出率為21.4%，霉菌和酵母菌總數檢出率為14.3%；從表4 可以看出，耐膽鹽革蘭陰性菌均小于10cfu/g，大腸埃希菌和沙門菌均未檢出。由此可以看出，同一品種大蜜丸較水蜜丸微生物污染程度高。

3.3 綜合分析

3.3.1 樣品中微生物生長所需營養成分

針對我院30 批次檢驗報告分析：大蜜丸平均水分11.9%，水蜜丸平均水分7.3%，大蜜丸比水蜜丸水分高4.6%；標準制法中大蜜丸加煉蜜量為70～90g，水蜜丸加入煉蜜量為20～40g[5]，大蜜丸煉蜜加入量是水蜜丸的2.5～3.5 倍，煉蜜中最主要的成分是糖類；水分和糖類是微生物生長中不可缺少的營養成分[6]，因此大蜜丸比水蜜丸更容易滋生微生物。

3.3.2 中藥材質量

中藥材中凡含糖類、粘液質、淀粉、蛋白質及油類藥材易發霉[7]，而樣品制備過程中所用麥冬、甘草、薄荷均屬于此類中藥材，為引起霉菌過高的重要因素，因此生產企業在選用此類中藥材時要嚴格把控質量，確保藥品安全可靠。