氯氮平片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

戴 琴，陳宇波，陳 凱

(常州制藥廠有限公司，江蘇 常州 213016)

氯氮平片為抗精神病藥，該藥用于精神陽(yáng)性和陰性癥狀，適用于急性與慢性精神分裂癥的各個(gè)亞型，也可減輕與精神分裂癥狀有關(guān)的情感癥狀。本文建立了UPLC法測(cè)定該品的有關(guān)物質(zhì)[1]，方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確。

1 儀器與試劑

Waters超高液相色譜儀。氯氮平片，本公司自制：批號(hào)：YZ18051911，規(guī)格25mg。對(duì)照品：氯氮平對(duì)照品（100323-201703），由中國(guó)藥品食品檢驗(yàn)所提供；雜質(zhì)C，雜質(zhì)D，本公司自制。試劑：三氟乙酸、甲醇和乙腈為色譜純，水為超純水。

2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以水-三氟乙酸（體積比，1000∶1，下同）為流動(dòng)相A，以乙腈-三氟乙酸（1000∶1） 為流動(dòng)相B，按表1梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm，柱溫為40℃，流速為0.5mL/min。

取雜質(zhì)C和雜質(zhì)D對(duì)照品適量，先加量瓶體積的80%的甲醇超聲溶解，再用水稀釋至刻度，制成每1mL約35μg的溶液作為各雜質(zhì)貯備液，再稱取氯氮平對(duì)照品約17.5mg，置于50mL量瓶中，加40mL甲醇超聲溶解后，加入上述雜質(zhì)C貯備液1.5mL和雜質(zhì)B貯備液1mL后用水稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL約含氯氮平0.35mg、雜質(zhì)C約1.05μg和雜質(zhì)D約0.7mg的混合溶液作為系統(tǒng)適用性溶液[2]。取系統(tǒng)適用性溶液2μL，注入超高液相色譜儀，記錄色譜圖。系統(tǒng)適用性溶液出峰順序?yàn)殡s質(zhì)C、氯氮平和雜質(zhì)D，各組分分離度應(yīng)不小于1.5。

表1 AB流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)計(jì)

3 靈敏度

取氯氮平對(duì)照品和雜質(zhì)D對(duì)照品適量，用甲醇-水（80∶20） 逐步稀釋進(jìn)樣，以S/N=10計(jì)算定量限，結(jié)果：氯氮平為0.021μg/mL，相當(dāng)于供試品溶液的0.006%水平，雜質(zhì)D為0.063μg/mL，相當(dāng)于供試品溶液的0.018%水平。

4 線性范圍

取氯氮平對(duì)照品和雜質(zhì)D對(duì)照品適量，先用甲醇-水（80∶20） 超聲溶解，再稀釋至刻度，制成每1mL約7μg氯氮平和7μg雜質(zhì)D的溶液作為線性貯備液。

按表2精密量取線性貯備液。分別置于相應(yīng)量瓶中，用甲醇-水（80∶20） 稀釋至刻度，搖勻，即得線性溶液。

表2 線性溶液配制方法

取上述溶液各2μL，注入超高液相色譜儀，并記錄色譜圖。得氯氮平線性回歸方程為y=15409.06x+109.54，相關(guān)系數(shù)R=0.9999，雜質(zhì)D線性回歸方程為y=4949.45x+36.91，相關(guān)系數(shù)R=0.9999。結(jié)果表明：氯氮平在0.17～2.09μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，雜質(zhì)D在0.18～2.11μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。氯氮平的校正因子為1.0，雜質(zhì)D的校正因子為3.1。

5 回收率

精密稱取雜質(zhì)D對(duì)照品適量，用甲醇-水（80∶20） 溶解并稀釋制成每1mL約含雜質(zhì)D約28μg的溶液作為貯備液。取氯氮平片細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氯氮平35mg），置一100mL量瓶中，按表3加入雜質(zhì)D貯備液，加甲醇約80mL，超聲是氯氮平溶解，再用水稀釋至刻度。搖勻，離心，取上清液作為回收率溶液。每個(gè)水平平行配制3份。

取氯氮平片細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氯氮平35mg），置一100mL量瓶中，加甲醇約80mL，超聲是氯氮平溶解，再用水稀釋至刻度。搖勻，離心，取上清液作為本底供試品溶液。

表3 回收率溶液配制方法

分別量取上述回收率溶液和本底供試品溶液適量，用甲醇-水（80∶20） 各稀釋制成每1mL含0.7μg氯氮平的溶液作為其對(duì)照溶液。

精密量取上述溶液2μL，注入超高液相色譜儀，并記錄色譜圖。按自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算雜質(zhì)D的回收率。80%水平的回收率為102.7%，RSD為0.6%；100%水平的回收率為101.4%，RSD為0.5%；120%水平的回收率為100.4%，RSD為0.5%。結(jié)果表明：該方法的回收率符合要求。

6 雜質(zhì)干擾試驗(yàn)

取空白輔料適量，置100mL量瓶中，加甲醇-水 （80：20） 適量超聲，再用甲醇-水 （80∶20）稀釋至刻度。搖勻，離心，取上清液作為空白輔料溶液。取上述系統(tǒng)適用性溶液、本底供試品溶液、空白和空白輔料溶液各2μL，注入超高液相色譜儀，并記錄色譜圖。空白溶劑和空白輔料不干擾檢測(cè)。

7 降解試驗(yàn)

取氯氮平片細(xì)粉三份（約相當(dāng)于氯氮平35mg/份），各置100mL量瓶中，第一份加5mL 1mol/L鹽酸溶液，第二份加5mL 1mol/L氫氧化鈉溶液，第三份加5mL 10%雙氧水溶液。各放置4h后，第一份和第二份分別用1mol/L氫氧化鈉溶液和1mol/L鹽酸溶液中和至中性。三份樣品加甲醇約80mL，超聲是氯氮平溶解，再用水稀釋至刻度。搖勻，離心，取上清液2μL，注入超高液相色譜儀，并記錄色譜圖[3]。從色譜圖看，降解雜質(zhì)不干擾主峰檢測(cè)。

8 結(jié)論

由上述實(shí)驗(yàn)可以看出：方法專屬性好，線性良好，相關(guān)系數(shù)R大于0.999，準(zhǔn)確度好，適用于有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。