206 例非典型地中海貧血HBB 基因測序發現多種非熱點突變

陳一君，韋麗麗，唐蘭艷

（廣西壯族自治區生殖醫院，廣西 欽州 530021）

0 引言

地中海貧血又稱珠蛋白生成障礙性貧血，非典型地中海貧血則是指患者病情表現與地中海貧血相似、但病理變化存在差異且缺乏普遍性的疾病癥狀。非典型地中海貧血對患者生活存在明顯影響，亦可惡化引發其他疾病，臨床主張給予對癥治療，這對疾病的診療技術提出了較高要求[1]。此前學者分析指出，常規基于熱點突變進行分析研究，難以完全滿足所有患者的治療需要，針對基因進行的非熱點突變評估，能夠彌補常規診療技術的不足，提升工作效果，其典型方式之一為HBB 基因測序[2]。為獲取可行的工作方法，了解非典型地中海貧血HBB 基因測序作用以及非熱點突變的基本態勢，選取我院收治的206 例非典型地中海貧血患者，進行研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。于我院2012 年1 月至2019 年1 月收治的非典型地中海貧血患者中，選取206 例作為對象，包括男104例，女102 例；年齡11-63 歲，平均（40.3±8.6）歲。研究經倫理委員會批準，患者和家屬知情同意，簽署知情同意書。納入標準：患者臨床符合《地中海貧血診療指南》（2012）中的疾病描述標準（紅細胞體積不大于79 fl、紅細胞蛋白濃度不小于300 g/L、紅細胞血紅蛋白含量不大于28 pg）。排除標準：患者合并其他血液系統疾??；患者合并出血性疾病；患者合并血液再生類疾病。

1.2 方法。取EDTA-K2 抗凝靜脈血2 mL，借助PCR-反向斑點雜交法進行分析。去除特異性較高的患者，將檢測結果中，HbA2 分布處于2.5%-3.5%之間的患者篩出，進行二次分析。取探針，點觸硝酸纖維素膜，對所有探針進行編號，對待測血液樣本進行PCR 特意性擴增，對生物素進行標記。使完成編號的探針與待測血液樣本進行雜交。獲取具有同源序列特點的樣本，進行編號和記錄。對未完成結合的血液樣本進行洗滌處理，同步對上述所有樣本進行液相顯色分析，統計非熱點突變的發生率和類別、占比[3]。

1.3 觀察指標。借助PCR-反向斑點雜交法進行血紅蛋白基因突變率統計，了解常見突變類型、占比情況。

2 結果

2.1 非熱點突變患者數。HbA2 分布處于2.5%-3.5%之間的患者共92 例，占比44.66%（92/206）。HBB 基因測序見非熱點突變27 例，占比29.35%（27/92），詳見表1。

表1 非熱點突變患者數[n（%）]

2.2 非熱點突變類別和占比。非熱點突變類別包括多個類型，占比也有所不同，見表2。

表2 非熱點突變類別和占比[n（%）]

3 討論

非典型地中海貧血一般納入地中海貧血的分析范疇，患者病情相對特殊，因此治療又需要強調針對性，對診斷和疾病分析能力提出了較高要求。此前學者研究發現，非典型地中海貧血基因熱點突變總數相對較多，達到70%左右，非熱點突變的發生率在30%左右[4]。我院研究結果與此相似，共27 例非典型地中海貧血患者符合非熱點突變標準，占比29.35%。非熱點突變類別方面，

我院研究中，因選例較少，共發現7 大類突變，第七類中又包括三個小類，均為1 例。其他非熱點突變中，c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）占比較大，分別為25.93%、18.52%、18.52%。進一步對相關信息進行評估，可發現上述各類患者接受HBB 基因測序時，均可見不同程度的血糖蛋白異常，從病理變化的角度上看，非典型地中海貧血患者的基因是否出現突變，直接影響其珠蛋白鏈的分子結構，換言之，所有非典型地中海貧血患者均可見血紅蛋白的異常[4]。

在HBB 基因測序中，可發現非典型地中海貧血患者自雙目雙方繼承的α 珠蛋白基因均為2 個，其排列特點為αα/αα；β 珠蛋白基因均為1 個，其排列特點為β/β，上述任何珠蛋白基因出現突變，均可影響數目龐大的機體細胞連鎖反應，導致部分蛋白鏈缺失問題，其中較為多見的為單方α 珠蛋白基因缺陷，其次為雙方α 珠蛋白基因缺陷，單方β 珠蛋白基因缺陷、雙方β 珠蛋白基因缺陷以及其他珠蛋白基因出現缺陷的可能性較低，具體表現為α 型、β 型、δβ 型和δ 型等等。接受HBB 基因測序的過程中，液相顯色、氣相顯色均強調對基因排列缺陷的捕捉，每一類缺陷在基因層面均有不同呈現[5]。

因β 型珠蛋白基因缺陷導致的非典型地中海貧血患者，在HBB 基因測序中，可見c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）等非熱點突變，提示在基因遺傳過程中，父母雙方或單方基因出現了較常規地中海貧血更復雜的變化，也可能與胎兒發育過程中母體因素的異常相關。上述病變往往可見分子層面的多樣變化，且病理變化過程復雜多樣，可能出現的不同突變態勢超過100種，少數患者亦可因此出現基因完全缺失情況。部分患者見c.22G＞A（p.Glu8Lys）、c.75C＞G、c.50G＞A（p.Gly17Asp）和其他非熱點突變，一般認為與α 珠蛋白生成障礙存在關聯，大部分患者可見α 珠蛋白基因的缺陷，極少數患者可見α珠蛋白基因缺失，提示患者可能存在基因點突變情況[6]。

綜上所述，非典型地中海貧血HBB 基因測序可發現非熱點突變信息，類別較多且多與血紅蛋白變異存在直接關聯。后續工作中，可針對血紅蛋白變異情況進行非典型地中海貧血病情分析，結合分析結果給予對癥干預。