MEK通路抑制劑對人胰腺癌細胞生長及細胞周期相關抑癌基因表達

吳小紅

【摘要】目的 探討細胞外信號調節激酶信號通路（MEK）通路抑制劑對人胰腺癌細胞生長及細胞周期相關抑癌基因表達的影響。方法 通過培養人胰腺癌PANC1、CFPAC1細胞系，用MEK通路抑制劑PD98059處理作為A組，用DMSO處理作為B組，比較兩組用藥后PANC1、CFPAC1細胞系的細胞數、用藥后24 h胰腺癌細胞周期分布，統計A組干預后24h后抑癌基因表達變化。結果 用藥3 d、6 d后A組PANC1、CFPAC1細胞系的細胞數低于B組，A組PANC1、CFPAC1細胞系的G0/G1期細胞比例高于B組，S期細胞數比例低于B組（P<0.05）;A組經PD98059干預后，PANC1、CFPAC1細胞p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表達上升。結論 MEK通路抑制劑PD98059可能通過上調細胞周期相關抑癌基因表達水平，抑制胰腺癌細胞增殖、細胞周期進展。

【關鍵詞】MEK通路抑制劑;胰腺癌;抑癌基因

【中圖分類號】R73 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.12..02

胰腺癌是臨床常見惡性腫瘤病癥，近年來隨著國民生活方式的轉變和生活節奏的加快，國內胰腺癌發病率呈不斷升高趨勢[1]。胰腺癌患者病情隱匿，缺乏典型癥狀，大多數病例在發病時病情已發展成晚期，生存率較低[2]。本文就細胞外信號調節激酶信號通路（MEK）抑制劑對人胰腺癌細胞生長及細胞周期相關抑癌基因表達的影響，旨在為胰腺癌的臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

中科院上海細胞生物學研究所提供的人胰腺癌PANC1、CFPAC1細胞系;美國Sigma公司提供的MEK通路抑制劑PD98059、DMSO;BIOBASE酶標儀;賽默飛Attune NxT流式細胞儀;BiO-Rad公司提供的無血清RPMI1640培養基;BIO-RAD TC20自動細胞計數器。

1.2 方法

通過培養人胰腺癌PANC1、CFPAC1細胞系，用MEK通路抑制劑PD98059處理（加入濃度50 ?mol/LPD98059）作為A組，用DMSO處理（加入濃度50 ?mol/LDMSO）作為B組。培養后1/3/6 d隨機取三孔，使用細胞計數器完成細胞數檢測。取對數生長期細胞，使用培養基培養24 h以同步化，比較兩組干預24 h后的細胞周期，收集兩組細胞，制作為單細胞懸液，取2 ml懸液，固定處理后去乙醇后孵育，染色后使用流式細胞儀檢測細胞周期，重復3次。取干預24 h的兩組細胞，使用Trizol法完成細胞總RNA提取，逆轉錄為cDNA，使用實時熒光定量PCR測定p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表達。

1.3 統計學方法

將數據錄至SPSS 23.0，以x2檢驗定性資料（%、n），以t檢驗定量資料x±s，P小于0.05，提示有差異。

2 結 果

2.1 人胰腺癌細胞的生長抑制情況

根據檢測結果可知兩組使用的藥物對人胰腺癌細胞的生長抑制效果，不同細胞系的細胞數如下，PANC1：1 d：A組為（17.37±3.83）×105/ml，B組為（16.42±3.17）×105/ml，t=1.351，P=0.090;3 d：A組為（18.47±2.38）×105/ml，B組為（25.53±2.29）×105/ml，t=15.115，P=0.000;6 d：A組為（19.36±2.29）×105/ml，B組為（63.16±6.13）×105/ml，t=47.329，P=0.000。CFPAC1：1 d：A組為（18.50±3.22）×105/ml，B組為（20.02±2.23）×105/ml，t=2.744，P=0.004;3 d：A組為（25.52±3.24）×105/ml，B組為（42.53±3.15）×105/ml，t=26.617，P=0.000;6 d：A組為（41.53±3.72）×105/ml，B組為（120.54±8.69）×105/ml，t=59.103，P=0.000。

2.2 胰腺癌細胞周期分布對比

不同細胞系的細胞周期分布如下：PANC1：G0/G1期：A組為（72.49±1.57）%，B組為（56.53±1.69）%，t=48.924，P=0.000;S期：A組為（5.14±1.10）%，B組為（14.32±1.31）%，t=37.947，P=0.000;G2/M期：A組為（24.83±3.38）%，B組為（25.16±1.42）%，t=0.636，P=0.263。CFPAC1：G0/G1期：A組為（80.25±1.63）%，B組為（68.22±1.74）%，t=35.678，P=0.000;S期：A組為（6.93±1.16）%，B組為（13.47±1.32）%，t=26.316，P=0.000;G2/M期：A組為（13.26±3.24）%，B組為（14.01±1.34）%，t=1.513，P=0.067。

2.3 A組經MEK通路抑制劑干預后抑癌基因mRNA表達變化

根據檢測結果可知A組不同細胞系經MEK通路抑制劑干預后抑癌基因mRNA表達：PANC1：p16INK4amRNA表達為（5.32±0.43），P21WAFlmRNA表達為（3.12±0.34），P27K1PlmRNA表達為（4.21±0.29）;CFPAC1：p16INK4amRNA表達為（5.52±0.48），P21WAFlmRNA表達為（4.51±0.32），P27K1PlmRNA表達為（3.42±0.23）。

3 討 論

胰腺癌中的RAS基因突變率較高，約為70～90%，可導致MEK轉導異常，激活癌基因，造成抑癌基因失活。隨著醫學技術的不斷發展，抑制MEK信號通路成為了抗腫瘤的靶點之一[3]。本次研究結果顯示，用藥1 d后，兩組PANC1、CFPAC1細胞系的細胞數比較無明顯差異，用藥3 d、6 d后，A組上述細胞系的細胞數低于B組，說明A組采用的MEK通路抑制劑PD98059能夠有效抑制人胰腺癌細胞生長、增殖。且A組PANC1、CFPAC1細胞系的G0/G1期細胞比例高于B組，S期細胞數比例低于B組，兩組G2/M期細胞比例比較無明顯差異，表明經過MEK通路抑制劑干預后，PANC1、CFPAC1細胞系的G0/G1期細胞比例明顯上升，S其細胞數比例下降，可抑制細胞周期進展。分析后可知，PD98059作為一種MEK抑制劑，對人體ATP并無明顯影響，抗腫瘤效果確切，可通過抑制人胰腺癌細胞系CFPAC1、PANC1生長，阻礙癌細胞由低分化期向高分化期轉化，達到抑制胰腺癌細胞生長、增殖、控制病情進展的干預目標。結合本次研究結果發現，A組經PD98059干預后，CFPAC1、PANC1細胞P21WAFl、P27K1Pl、p16INK4amRNA表達水平顯著上升，提示MEK通路抑制劑PD98059可能通過上調細胞周期相關抑癌基因表達水平，影響胰腺癌細胞生長、周期進展。

綜上所述，與MEK通路抑制劑DMSO相比較，PD98059可能通過上調細胞周期相關抑癌基因表達水平，阻礙病情進展。

參考文獻

[1] 中華醫學會外科學分會胰腺外科學組.胰腺癌診治指南（2014版）[J].中華消化外科雜志，2014，13（11）：831-837.

[2] 李映璇，高綏之，蘇 松，等.Hippo-YAP信號通路活化參與二甲雙胍抑制胰腺癌細胞生長的作用[J].中華胰腺病雜志，2016，16（2）：82-86.

[3] 喬銀標，楊 波.HGF/c-MET信號通路抑制劑在抗胰腺癌中的研究進展[J].國際腫瘤學雜志，2017，44（4）：304-306.