液體法聯(lián)合固體法同步培養(yǎng)在生殖道支原體檢測(cè)中的臨床應(yīng)用

李翠霞，趙 凱，劉玉霞

（京東中美醫(yī)院，河北 廊坊 065201）

支原體常見于泌尿生殖道（主要是Uu和Mh），導(dǎo)致非特異性尿道炎（NGU）。致病性支原體對(duì)人上皮細(xì)胞有很強(qiáng)的親和力，支原體位于人體呼吸道和生殖道粘膜，可引起粘膜局部細(xì)胞損傷。目前，我國(guó)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)Uu和Mh的方法都是培養(yǎng)法[1]。培養(yǎng)法分為固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法，液體培養(yǎng)法是我國(guó)常用培養(yǎng)方法。液體培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)條件少，操作簡(jiǎn)單，是WHO診斷NGU的首選方法。傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)方法既費(fèi)錢又費(fèi)時(shí)，雖有新型固體培養(yǎng)基應(yīng)用，縮短了培養(yǎng)時(shí)間，但也存在真菌污染情況，影響形態(tài)學(xué)觀察[2]。本研究采用液體法聯(lián)合固體法同步培養(yǎng)，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

150份疑似泌尿生殖道支原體感染標(biāo)本均為2019年上半年本院疑似生殖道支原體感染者的泌尿生殖道分泌物，其中男76例，女74例；年齡18～73歲，平均（44.57±4.63）歲。經(jīng)過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)與患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 器材選擇

所選用的液體培養(yǎng)基為U u和M h選擇分離培養(yǎng)、鑒定、藥敏試劑盒，固體培養(yǎng)基Uu和Mh的選擇分離培養(yǎng)基，均購(gòu)自眾愛生河北生物科技有限公司。

1.2.2 試驗(yàn)方法

標(biāo)本應(yīng)在采集后2小時(shí)內(nèi)接種。固體培養(yǎng)：樣品拭子直接滾動(dòng)，在固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，加入一片二氧化碳發(fā)生片，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。液體培養(yǎng)：取未接種的培養(yǎng)基液100 ul加入陰性對(duì)照孔，然后在培養(yǎng)基液體中徹底清洗樣品拭子頭，將拭子擠壓到瓶壁上，然后各取100 u1滴加在除陰性對(duì)照孔的其余各孔中。滴加石蠟油覆蓋，編號(hào)并放置在35～37°C的培養(yǎng)箱中24～48小時(shí)。

1.2.3 結(jié)果判斷

液體培養(yǎng)結(jié)果判定：鑒定孔無(wú)顏色變化且無(wú)混濁則為陰性；鑒定孔由黃色變成紅色且無(wú)渾濁則判定為陽(yáng)性。

固體培養(yǎng)結(jié)果判定：培養(yǎng)24～48小時(shí)后在低倍鏡下觀察培養(yǎng)基上是否生長(zhǎng)支原體屬特征菌落，若觀察到較小且呈圓形棕褐色支原體菌落則為Uu陽(yáng)性；若無(wú)典型支原體屬特征菌落生長(zhǎng)則為陰性；若觀察到較大且為油煎蛋狀支原體菌落則為Mh陽(yáng)性；若兩者都有則為Uu+Mh陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Statistical Product and Service Solutions（SPSS）22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以%表示計(jì)數(shù)資料，組間比較行x2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05，以P值是否＜0.05為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

在泌尿生殖道支原體檢測(cè)結(jié)果上，液體培養(yǎng)（57.33%）顯著比固體培養(yǎng)（40.33%）高（P＜0.05），參考表1。

表1 固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)陽(yáng)性檢測(cè)率

3 討 論

泌尿生殖道支原體檢測(cè)常用的方法有液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法。采用液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法對(duì)150例疑似泌尿生殖道感染患者進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，液體培養(yǎng)法的陽(yáng)性率高于固體培養(yǎng)法[3]。

研究發(fā)現(xiàn)，造成液體培養(yǎng)法陽(yáng)性率較高的主要原因是液體培養(yǎng)法是一種特異性差的生化反應(yīng)。當(dāng)Uu或Mh在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，會(huì)分解尿素或精氨酸，產(chǎn)生氨氣導(dǎo)致培養(yǎng)基的酸堿度提高，令酚紅指示劑從黃色變?yōu)榧t色，從而確定有Uu或Mh生長(zhǎng)然而這種反應(yīng)不是支原體特有的。當(dāng)培養(yǎng)液中的其他細(xì)菌和真菌能分解尿素或精氨酸時(shí)，也會(huì)發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)。固體培養(yǎng)法具有很強(qiáng)的特異性。只有觀察到典型的uu或Mh菌落時(shí)才能判定為陽(yáng)性，這導(dǎo)致液體培養(yǎng)的陽(yáng)性率高于固體培養(yǎng)。由于固體培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，如果培養(yǎng)時(shí)間不夠，支原體可能不生長(zhǎng)或不明顯，固體培養(yǎng)陽(yáng)性率也較低[4]。

結(jié)合兩種培養(yǎng)方法可發(fā)現(xiàn)，液體培養(yǎng)法更容易操作，鑒定和藥敏試驗(yàn)可以反映支原體的感染程度和耐藥性，指導(dǎo)臨床合理用藥，但容易漏診和誤診，固體培養(yǎng)法具有特異性和實(shí)用性。能直觀觀察支原體典型菌落，污染率小，易不會(huì)漏診和誤診，是確診支原體感染的一種方法，但培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)。因此，這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，臨床上結(jié)合這兩種方法檢測(cè)支原體，從而有效、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)支原體的感染程度和感染程度。