氣相色譜法測定初元復合肽營養飲品中氯丙醇含量

劉賢良 李文貴 沈震亞 李嵐

（江中藥業股份有限公司 江西南昌330096）

氯丙醇是氯原子取代丙三醇結構上羥基而成的一類化合物，主要有3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD）、2-氯-1,3-丙二醇（2-MCPD）、1,3-二氯-2-丙醇（1,3-DCP）及2,3-二氯-1-丙醇（2,3-DCP）。研究表明，氯丙醇存在腎臟毒性、生殖毒性、神經毒性、免疫毒性、致突變性等，且國際癌癥研究機構認為它是一種非遺傳性的可能致癌物[1]。自世界衛生組織（WHO）1993 年警告氯丙醇類物質存在嚴重毒性以來，食品中的氯丙醇污染正式成為國際食品安全問題之一，其相關食品安全研究隨即也成為科研工作者廣泛關注的熱點。食品中的氯丙醇污染產生于酸水解植物蛋白（HVP）的生產過程，為提高氨基酸得率而加入過量的鹽酸會使原料中存在的三酰甘油酯水解成丙三醇，并進一步反應生成氯丙醇。我國保健食品和嬰幼兒食品不少采用酸水解蛋白為原料，隨著酸水解植物蛋白常作為風味增強劑加入，其所含的3-MCPD 也相應增加，因此需按照GBT 5009.191-2006 測定方法（氣相質譜法）對其進行氯丙醇監控，對于不具備質譜儀的企業來說，也可直接采用氣相色譜法進行測定。因此本文采用較為廣泛使用的氣相法測定初元復合肽營養飲品中氯丙醇的含量，以提高對氯丙醇的質量監控能力。現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890 氣相色譜儀；N-1100 旋轉蒸發儀；H1650 離心機；SK-1 混勻器；梅特勒AG 245 電子天平。

1.2 試藥 1,3-二氯-2-丙醇對照品（批號：C12481600，純度97.5%），2,3-二氯-1-丙醇對照品（批號：CA12482000，純度98.0%），均購于美國Dr-Ehrentorfer 公司；正己烷為重蒸試劑；乙酸乙酯、乙醚、無水硫酸鈉（105 ℃烘烤3 h 后使用）、氯化鈉、七氟丁酰基咪唑（西格瑪公司），均為分析純；水為超純水。初元復合肽營養飲品為江中藥業有限公司產品（批號：20170104、20180206、20180307、20180404、20180502、20180604）。

2 測定方法[2]

2.1 標準溶液的配制

2.1.1 標準品單標儲備液的配制 取1,3-DCP 和2,3-DCP 對照品各約25 mg 分別置于25 ml 容量瓶中，精密稱定，加入乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，得到濃度均為1 000 μg/ml 的2 種氯丙醇單標儲備液，并于4 ℃的冰箱中儲存備用。

2.1.2 標準品工作溶液的配制 分別精密吸取以上2 種氯丙醇單標儲備液各1 ml，置2 支10 ml 容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，分別得到濃度均為100 μg/ml 的2 種氯丙醇單標工作溶液。從2 種氯丙醇的單標工作溶液精密吸取適量，置于同一25 ml容量瓶，加正己烷稀釋至刻度，得到混合標準品工作溶液，2 種氯丙醇的濃度均為2 μg/ml。

2.2 樣品溶液的制備 精密吸取樣品溶液10 ml，加飽和氯化鈉溶液（5 mol/L）6 g，超聲處理15 min，用乙醚萃取3 次，每次15 ml，合并乙醚液并加無水硫酸鈉3 g，靜置10 min 后過濾，濾液于35 ℃下旋蒸至約2 ml，定量轉移至5 ml 具塞試管中，加乙醚稀釋至4 ml，加少量無水硫酸鈉，振搖，靜置15 min以上。

2.3 衍生化 精密量取試樣溶液1 ml 于5 ml 具塞試管中，并于室溫揮至近干，立即加入正己烷1 ml，用氣密針加入七氟丁酰基咪唑50 μl，立即塞緊，渦旋混合后，70 ℃保溫20 min。放冷至室溫，加飽和氯化鈉溶液3 ml，渦旋混合30 s，使兩相分離，取有機相加無水硫酸鈉約0.3 g 脫水，取溶液進行GC 測定。

2.4 空白試樣制備 稱取飽和氯化鈉溶液6 g，同2.2 法凈化、2.3 法衍生。

2.5 色譜條件[3～5]氣相色譜儀（電子捕獲檢測器ECD）色譜條件：色譜柱，HP-5 二苯基甲基硅氧烷（25 m×0.32 mm×0.52 μm）；載氣為氮氣（純度＞99.99%）；流量為2.8 ml/min；色譜柱程序升溫，50～100 ℃（3 ℃/min），100 ℃保持1 min，100～285 ℃（4 ℃/min），285 ℃保持3 min；進樣口溫度，280 ℃；檢測器溫度，300 ℃；進樣體積，1 μl；進樣方式，不分流進樣，尾吹氣，30 ml/min。在該色譜條件下，對標準品峰的系統適應性參數進行考察，標準品峰理論塔板數均＞4 000，分離度與對稱因子符合中國藥典要求[6]。供試品、對照品及疊加色譜圖見圖1～圖3。

圖1 1,3-二氯-2-丙醇與2,3-二氯-1-丙醇標準品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 供試品與標準品色譜疊加圖

2.6 方法學考察

2.6.1 線性范圍與檢測限 在5 支具塞試管中先分別加入0.5 ml 正己烷，再分別加入1 μl、3 μl、8 μl、15 μl、25 μl 標準使用溶液，加正己烷至1 ml，用氣密針加入七氟丁酰基咪唑50 μl，立即塞緊，渦旋混合后，70 ℃保溫20 min。放冷至室溫，加飽和氯化鈉溶液3 ml，渦旋混合30 s，使兩相分離，取有機相加無水硫酸鈉約為0.3 g 脫水，取溶液進行GC 測定。本方法檢出限為0.01 mg/kg。線性關系見表1～表2。

表1 1,3-二氯-2-丙醇衍生化線性關系

表2 2,3-二氯-1-丙醇衍生化線性關系

2.6.2 精密度試驗結果 精密量取混合標準溶液200 μl，同2.3 法衍生后，進樣6 針，精密度良好。見表3。

表3 精密度試驗結果

2.7 回收率試驗結果 精密取樣品5 ml 中加入適量氯丙醇，同2.2 法凈化和2.3 法衍生，進行回收試驗，結果1,3-DCP 的加樣回收率可達93.24%～96.41%，2,3-DCP 的加樣回收率可達93.91%～96.51%。見表4。

表4 回收率試驗結果

2.8 6 批樣品含量測定 取本公司初元復合肽營養飲品6 批，依照對樣品中氯丙醇進行含量測定。見表5。

表5 6 批樣品含量測定（ng）

3 討論

通過多次重復性試驗，發現樣品經七氟丁酰基咪唑衍生化后得到的衍生物在非極性柱或弱極性柱的HP-5 毛細管柱進行分離，具有峰形好、出峰快的優勢。試驗中采用程序升溫方式，在保證雜質峰與主峰能夠高效分離的同時，也適當控制了各峰的保留時間。

當前隨著人們物質生活水平的提高，食品安全問題受到社會越來越多的關注，對于有毒物質建立有效監控的檢測方法成為食品安全生產中的重要一環。本試驗結果顯示，1,3-二氯-2-丙醇精密度為0.34%，回收率為95.29%，進樣量為0.011 25～0.168 72 ng 時，峰面積與濃度呈良好線性關系（相關系數γ=0.999 9）；2,3-二氯-1-丙醇精密度為1.16%，回收率為93.36%，進樣量為0.010 90～0.163 44 ng 時，峰面積與濃度呈良好線性關系（相關系數γ=0.999 9）。方法學驗證試驗結果良好，所建立的方法操作簡單、快捷，靈敏度高，試驗結果準確可靠，適用于氣相色譜法測定初元口服液產品的氯丙醇含量，也適用于生產企業進行質量控制。