環介導等溫擴增與金胺0 熒光兩種痰結核桿菌檢驗方法比較分析

馮美鳳

（崇左市第二人民醫院 廣西 崇左 532800）

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種慢性傳染病,是全球最具威脅的傳染病之一.據世界衛生組織統計,我國患結核病人數居世界第2 位,是全世界22 個結核病流行嚴重的國家之一[1]。患有結核病不僅增加了患者的痛苦，給患者及其家庭帶來了巨大的經濟壓力，還威脅他人安全，成為社會公共衛生問題。盡早明確診斷，及時規范治療多數患者可以治愈。當前，我國在結核病控制方面所面臨的問題是結核病的早期診斷，尤其是痰菌陰性肺結核的診斷[2]。目前，實驗室結核桿菌檢測方法眾多，尋找檢測特異性強，操作簡單、快捷的檢測方法是臨床關注的重點[3]。痰涂片熒光染色查找法、環介導等溫擴增（LAMP）法是臨床常用檢測方法。現將這兩種檢驗方法進行比較分析，為臨床檢測方法的選擇提供參考。現報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年7 月—2018 年8 月，到崇左市第二人民醫院就診的98 例疑似肺結核患者，其中男性72 例，女性26 例，年齡18 ～78 歲，主要臨床表現為咳嗽、氣短、咯痰、胸痛、乏力、納差、發熱、盜汗以及消瘦等[5]非特異性結核感染癥狀。

1.2 檢驗方法

所有患者均收集其晨起痰液標本，即晨起深呼吸后，咳痰，由專門容器收集；若患者無法咯出痰液，則收集其咽試子標本，即肺部分泌物[6]。所有標本采集完畢后送檢實驗室進行檢驗，檢驗方法包括金胺O 熒光法、環介導等溫擴增法（LAMP）。

1.2.1 檢驗儀器及試劑金胺O 熒光染色法（試劑：珠海貝索抗酸染色試劑盒，廠家：珠海貝索生物技術有限公司 批號：416051；儀器：生物顯微鏡EX30 廠家：寧波舜宇儀器有限公司）

1.2.2 金胺O 熒光法 用竹簽挑取適量的痰液，制成20*15mm 的厚膜涂片，自然干燥，火焰固定后，滴加金胺O 染色液避光染色，水洗，用鹽酸酒精液脫色，直至涂片無黃色為止，水洗，用復染色液染色，水洗，吸干水分，自然干燥，熒光顯微鏡下低倍鏡檢，抗酸桿菌為亮黃色。結果判定：觀察50 個視野發現1-9 條抗酸桿菌，表示結核桿菌陽性。

1.2.3 環介導等溫擴增（LAMP） 取痰標本與4 倍體積的氫氧化鈉（4%）液化30min,取1ml 液化后的痰液離心棄上清液，沉淀用1ml 生理鹽水（0.9%）懸浮，12000rpm 離心5min,棄去上清液，留沉淀物，100 恒溫處理10 分鐘，12000rpm 離心2 分鐘，上清液做模版備用，加入反應液，3000rpm 離心30 秒，打開恒溫擴增熒光檢測儀，將反應管放入儀器內，開始反應，根據儀器給出的擴增曲線和出峰時間判定結果。

1.3 統計學方法

數據采用SPSS19.0統計學軟件分析處理，計數資料采用率（%）表示，行χ2檢驗，計量資料用均數±標準差（±s）表示，行t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2.結果

98 例疑似肺結核患者，涂片后經金胺O 熒光法鏡檢，檢出痰結核桿菌陽性者24 例，陽性率24.49%；經環介導等溫擴增（LAMP）檢查，痰結核桿菌陽性56 例，陽性率57.14%。環介導等溫擴增（LAMP）檢查結果陽性率顯著高于金胺O 熒光法檢查，差異顯著，χ2=21.628，P ＜0.05,差異具有統計學意義。見表。

表 兩種方法檢驗結果比較

3.討論

此次研究結果顯示，金胺O 熒光染色涂片法檢出結核桿菌陽性例數為24 例，陽性率24.50%；王成勇[7]在2004 年報道僅有40%～50%的活動性肺結核患者痰涂片呈陽性，涂片檢出陽性率在19.9%～35%，本組實驗患者涂片陽性率占24.49%，與文獻資料報道相吻合。等溫擴增檢出結核桿菌陽性56 例,陽性率 57.14%，等溫擴增檢出結核桿菌陽性的陽性率高于熒光染色鏡檢陽性率，顯著高于常規實驗室診斷，在陽性檢出率與金胺O 熒光染色涂片法相比明顯列高，兩組數據差異有統計學意義（P ＜0.05）。

綜上，環介導等溫擴增（LAMP）檢查效果良好，能提高陽性檢出率，全面評估患者病情進展程度，為治療方案提供強有力的保障。

結核菌檢查是確診肺結核最具有特異性的方法，痰中找到結核菌是確診肺結核的主要依據[8]。近年來，醫療事業不斷發展，人們越來越重視結核病，在臨床上也取得很大的成果，然而結核病患者還是在逐年增加。結核病在發展早期癥狀不明顯，很難被發現，很難得到確診，這樣就會導致病情的延誤，大大的延誤治愈時間，而患者的身體機能也會出現下降的情況，導致疾病發生轉移，甚至會出現進一步惡化，給患者的治療帶來很大的困難[9]。所以在臨床診療過程中，選擇合適的檢驗方法對患者做出診斷，從而制定行之有效的治療方案至關重要。此次研究表明，涂片鏡檢金胺O 熒光染色法檢驗迅速，操作簡單，實驗設備要求不高，適用大量標本快速檢查[9]。等溫擴增（LAMP）利用基因片段擴增技術，技術操作簡便，診斷快速、靈敏度高、費用低廉等，是一種準確率和檢出率較高的檢查方法，值得臨床應用。