石龜沙門氏桿菌病原分離鑒定及耐藥分析

潘懿，玉耀賢，許光明，農忠仁*

（1.百色市畜禽品種改良技術推廣站廣西百色 533000；2.靖西市畜牧獸醫技術推廣總站廣西百色 533800）

沙門氏菌屬（Salmonella）是由不同血清型感染各種動物而引起多種疾病的沙門氏菌的總稱。由沙門氏菌感染引起的疫病叫沙門氏菌?。ǜ眰?，主要包括家禽、家畜沙門氏菌病，水生生物攜帶沙門氏桿菌現象比較常見，但感染沙門氏桿菌病例少見。多重耐藥菌（MDR）是指對3 類以上抗菌藥物產生耐藥的細菌，被多重耐藥菌株感染病例不僅加大抗生素的使用量，增加機體的不良反應風險，且易發生交叉感染，醫治成本提高，難度加大，處理不當影響到人類用藥安全，防止菌株出現多重耐藥，保護人類、動物用藥安全具有重大意義。

1 主述

2018 年11 月2 日廣西百色市市區農某家里養殖的54 只1月齡石龜部分行動遲緩、少食，嚴重者停食并出現死亡現象。經臨床觀察病龜眼部發炎、眼結膜充血、腫大，分泌出白色絮狀物，嚴重的分泌物掩蓋眼睛無法睜開，12%石龜在發病初期還出現浮于水面，鼻孔吹大量泡泡。為查明原因于2018 年11 月4 日帶1 只石龜到本中心求診。

2 實驗方法

組織樣品經涂片鏡檢、選擇性細菌培養分離選擇單個可疑菌S1，將菌株進行生化、血清學、菌屬的鑒定及藥敏試驗[1,2,3]。藥敏試驗質控菌株：傷寒沙門氏菌，編號：CMCC(B)50071，生產廠家：廣東環凱微生物科技有限公司。

3 檢測結果

3.1 通過壓片鏡檢、菌落形態、生化特征

菌株生化實驗結果見表1，分離出的菌株S1 各種特性與沙門氏桿菌特征相符，表明本次引起小石龜發病的病原體為沙門氏桿菌。經血清學菌屬診斷鑒定血清型為O4Hi[4,5]，結合生化鑒定結果認定為鼠副傷寒沙門氏桿菌（s.typhimurium），菌株S1 血清學菌屬鑒定結果見表2。

3.2 藥敏試驗

藥敏試驗結果見表3。

表1 菌株生化試驗結果

表2 菌株S1血清學菌屬鑒定結果

表3 藥敏試驗結果

4 結論與討論

4.1 本病例的發生與水體衛生條件不佳有密切關系

鼠副傷寒沙門氏桿菌（S.typhimurium）屬自然疫源菌株。鼠副傷寒沙門氏桿菌廣泛存在于自然環境中，家禽、家畜、鳥及冷血動物均可為自然宿主，常隨污染的水源或食物鏈感染機體引起發病。本次病例發生與水體衛生條件不佳有密切關系。飼養者為了使小石龜能安全過冬，采取以下措施：①使用加熱棒加熱水，溫度保持在25℃左右；②減少換水頻率；③在飼養水中投放喂料。三方面共同作用致飼養水體衛生條件不良，病原微生物得以大量繁殖最終導致石龜感染沙門氏菌。

4.2 致病菌株S1 具有多重耐藥（MDR）

使用9 類抗生素共24 種藥物開展體外藥敏試驗。結果S1 菌株對9 類抗生素中的23 種藥物產生高度耐藥（95.8%），對頭孢曲松鈉（CRO）中度敏感，無高度敏感藥品。根據相關文獻報道，沙門氏桿菌對氨基糖苷類及頭孢類藥物第一、二代頭孢類已經產生高度耐藥，臨床上不宜再使用，本次藥敏試驗結果與報導一致。

4.3 出現多重耐藥（MDR）菌株可能與飼養者用藥不當致菌株產生主動外排膜泵和胞膜主動轉運改變相關

經實地調查發現飼養者為石龜盈造良好的過冬環境，給水體加熱，減少換水數次，為控制微生物孳生而周期性向水體投放預防性用藥，同時還發現石龜所用顆粒料中添加有金霉素，長期使用低濃度藥物致菌株外排膜泵基因突變，主動外排膜泵增強增多，外膜滲透性改變，最終獲得性多重耐藥。

4.4 菌株產生多重耐現象越來越嚴重，應引起社會高度重視

潘志明[6]等于1962—1998 年對325 株沙門氏菌藥敏試驗，上世紀60 年代還沒有發現多重耐藥菌株，80 年、90 年后才陸續發現多重耐藥菌株，數量明顯增多。2012 年林居純等[7]從動物源分離的沙門氏菌出現多重耐藥菌株占比高達95.5%。2018 年鐘舒紅等[8]從廣西畜禽產品中分離的沙門氏菌耐藥性檢測78.7%菌株出現10～16 重耐藥。本次分離出沙門氏菌S1 為23 耐，表明了菌株產生耐藥現象越來越嚴重，應引起全社會高度重視，采取有效措施，降低菌株產生耐藥幾率。

4.5 規范獸用抗菌藥的使用，強化菌株耐藥性預警預報，減少菌株獲得性耐藥幾率

遵守獸用抗菌藥相關法律法規規定，嚴格執行人藥不能獸用的原則?？茖W選擇藥物使用，注意用藥劑量、時間，利用藥物相互作用推廣聯合用藥，縮小耐藥性菌株產生的窗口；加強對多重耐藥菌監控，將本區域分離常見細菌菌株及耐藥性、敏感性公開，做好菌株耐藥性預警預報，減少菌株獲得性耐藥幾率，保護人類和動物用藥安全。

4.6 強化獸用抗菌素監管力度，合理使用藥物

嚴管獸用抗菌素作為飼料添加劑的審批，嚴格獸用抗菌素作為飼料添加劑使用的種類和添加濃度。全面落實獸用抗菌藥物分級管理，實行獸醫處方審核制度，特別是加強村級防疫員用藥的監管，指導臨床合理使用藥物。

4.7 加大推廣生態養殖，建立生物安全屏障，減少獸藥使用數量，降低菌株獲得耐藥產生機會

加大對生態動物養殖場的政策、資金和技術扶持，利用微生態制劑建立友好型微生態動物飼養場。建立以有效生物安全屏障為主，動物免疫為骨，診斷治療為輔的生態養殖，減少獸藥使用數量，降低菌株獲得耐藥產生機會。

4.8 加大抗菌素替代品研發，減少獸藥品種和數量的使用

加大抗菌素替代品研發：一方面是充分利用我國傳統的中草藥制劑優勢，研發抗菌素替代品；另一方面加大細菌病毒噬菌體研發力度，做好噬菌體分類，建立噬菌體庫，推廣噬菌體在實際臨床中的應用，減少獸藥品種和數量的使用，降低超級菌株的形成風險。