P53蛋白、Rictor蛋白表達水平與子宮內膜癌病理特征的關系

王麗娟，賀全勤，趙盼

（駐馬店中心醫院婦科，河南 駐馬店463000）

流行病學研究發現,子宮內膜癌的發病率可接近在586~687/1 萬人左右[1]，在合并有相關高危因素的人群中, 子宮內膜癌的發病率可持續性的上調。臨床上子宮內膜癌的發生，能夠導致患者遠期生存時間的縮短,增加患者的腫瘤惡病質的發生風險[2]。P53 蛋白能夠通過提高癌細胞核DNA 的分裂速度，促進癌細胞的異常轉錄和分化，進而導致子宮內膜腺體細胞惡性病變的發生[3]；Rictor 蛋白是mTOR 信號通路上的效應分子，其能夠通過提高癌細胞的G1/S 期細胞比例,影響到P53 蛋白的水平，進而促進早期惡性腫瘤細胞的發生和轉移[4]。部分研究者探討了P53 蛋白的表達與子宮內膜癌的關系，認為P53 蛋白的表達上升與子宮內膜癌的發生密切相關[5],但缺乏對于Rictor 蛋白的表達分析研究。為了揭示P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達與子宮內膜癌的病情關系, 本次研究選取我院2016 年3 月至2017 年2 月收集的90 例子宮內膜癌組織，探討了P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達及其與患者的病情關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院 2016 年3 月-2017 年2月收集的90 例子宮內膜癌組織（內膜癌組）、正常子宮內膜組織90 例（對照組）。

內膜癌組，年齡 39~64 歲，平均 53.5±8.2 歲，FIGO 分期：Ⅰ期 20 例、Ⅱ期 38 例、Ⅲ期 26 例、Ⅳ期6 例；組織學分化：高分化29 例、中分化38 例、低分化23 例；淋巴結轉移陽性39 例；血管浸潤15例。對照組，年齡 41~65 歲，平均 54.0±8.8 歲。兩組研究對象的年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

納入標準：⑴子宮內膜癌患者的診斷標準參考中華醫學會制定的標準[6]；⑵患者年齡≤65 歲；⑶所有子宮內膜癌患者的診斷均經過手術后病理學檢查證實；⑷正常子宮內膜組織標本來源于卵巢或子宮肌瘤手術獲取的正常子宮內膜標本；⑸本研究經醫學倫理委員會的批準。

排除標準：⑴伴有其他部位惡性腫瘤、放化療病史；⑵伴有其他感染性疾病；⑶免疫性疾?。虎冉肽昃哂屑に叵嚓P藥物治療史。

1.2 免疫組化檢測方法 石蠟包埋，連續性切片厚度3μm，60℃烤片 60min，常規脫水后，采用 EDTA進行抗原修復，加入10μl 蒸餾水，加入10%過氧化氫 5μl，室溫下孵育 30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌 3 次(每次 3min),加入P53 蛋白、Rictor 蛋白的單克隆抗體(1：1000 購自羅氏檢測公司),37℃孵育60min，PBS 洗滌 3 次(每次 3min),分別加入 HRP 標記的P53 蛋白、Rictor 蛋白二抗 （1：2000 購自羅氏公司），37℃孵育 20min,PBS 洗滌3 次 (每次 3min),加入DAB 后,PBS 沖洗和復染, 脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 免疫組化結果判斷標準 免疫組化染色讀片判斷標準：Rictor 蛋白的陽性染色為黃色、棕黃色甚至更深的顏色且定位在子宮內膜上皮細胞的細胞質，P53 蛋白的陽性染色為黃色、棕黃色甚至更深的顏色且定位在子宮內膜上皮細胞的細胞核內；⑴依據染色深淺：無色（0 分）、淡黃色（1 分）、染色為棕黃色（2 分）、如果染色為褐色或者黑色（3分）；⑵依據陽性細胞占比進行評分：占比范圍≤10%（1 分）、占比范圍 11%～50%（2 分）、占比范圍51%～75%（3 分）、占比范圍>75%（4 分），染色深淺評分與陽性細胞占比評分之乘積總分<3 分為陰性、≧3 分為陽性。

2 結果

2.1 兩組標本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽性表達率比較 子宮內膜癌組織中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽性表達率分別為48.89%、52.22%均顯著的高于對照組的8.89%、12.22%, 差異具有統計學意義（P<0.05），見表1、圖1、圖2。

表1 兩組標本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽性表達率比較（）

表1 兩組標本中的P53 蛋白、Rictor 蛋白陽性表達率比較（）

組別 n P53 蛋白陽性 陰性Rictor 蛋白陽性 陰性子宮內膜癌組對照組χ2 值P 值90 90 44(48.89)8(8.89)35.048 0.000 46(51.11)82(91.11)47(52.22)11(12.22)32.968 0.000 43(47.78)79(87.78)

圖1 P53 蛋白免疫組化結果，A 為正常子宮內膜組織、B 為子宮內膜癌組織，可見子宮內膜癌細胞細胞質中的棕色顆粒表達明顯增多較正常子宮內膜細胞（×400）

圖2 Rictor 蛋白免疫組化結果，A 為正常子宮內膜組織、B 為子宮內膜癌組織，可見子宮內膜癌細胞細胞核中的棕色顆粒表達明顯增多較正常子宮內膜細胞（×400）

2.2 不同病理學特征的子宮內膜癌組織中的P53蛋白、Rictor 蛋白陽性表達率比較 不同FIGO 分期、不同組織學分化程度、是否發生脈管浸潤的子宮內膜癌組織中的P53 蛋白陽性表達率差異均具有統計學意義（P<0.05）；不同FIGO 分期、不同組織學分化程度、是否發生脈管浸潤、是否發生淋巴結轉移子宮內膜癌患者的Rictor 蛋白陽性表達率比較，差異具有統計學意義(P<0.05)；見表2、表3。

表2 不同病理學特征的子宮內膜癌組織中的P53 蛋白陽性表達率比較

3 討論

子宮內膜腺體細胞的異常增殖或者分裂，能夠顯著促進子宮內膜癌的發生，特別是在肥胖、吸煙或者合并有雌激素受體敏感性改變的人群中，子宮內膜癌的發病率可進一步的上升[7]。臨床上的觀察發現, 子宮內膜癌患者的5 年生存率不足45%，其治療后的遠期無瘤生存時間或者無進展生存期也無明顯的改善[8,9]?，F階段缺乏對子宮內膜癌病情評估的分子指標, 雖然P53 等腫瘤標志物，能夠在子宮內膜癌的診療過程中發揮作用，但單獨P53 評估子宮內膜癌的局限性較為明顯。本次研究通過對于子宮內膜癌患者病灶組織中P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達分析研究, 能夠為臨床上子宮內膜癌的聯合評估提供參考,同時能夠降低單獨P53評估的假陽性率。

表3 不同病理學特征的子宮內膜癌組織中的Rictor 蛋白陽性表達率比較

P53 蛋白主要存在于子宮內細胞核內部，結構上含有脯氨酸及多重絲氨酸結構,其能夠通過結合下游糖蛋白配體,進而促進多種惡性腫瘤信號通路的激活,促進癌細胞的持續性浸潤和轉移過程。P53蛋白能夠影響到轉錄上游啟動子的激活程度，進而促進癌細胞的異常轉錄和翻譯,加劇癌細胞核基因的突變風險[10]。相關研究還認為，P53 蛋白對于癌細胞內MAPK 信號通路的上調作用，能夠影響到腫瘤細胞的早期發生[11]；Rictor 蛋白主要存在于子宮內膜細胞質內, 是mTOR 信號通路效應分子，能夠通過提高腫瘤細胞間質成分的分解,提高金屬蛋白酶的激活程度,進而為腫瘤細胞的轉移提供基礎。Rictor 蛋白對于癌細胞周期的調控作用，能夠影響到癌細胞跨越G0 期的速度，進而干預到腫瘤的中晚期病情進展[12]。部分研究者探討了P53 蛋白的表達與子宮內膜癌的關系[13]，但缺乏對于P53 的表達與子宮內膜癌的臨床病理特征的分析，同時缺乏對于Rictor 蛋白的探討。

本次研究可以發現, 在子宮內膜癌病灶組織中,P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達陽性率水平均明顯的上升，高于正常對照組病灶組織，統計學差異較為顯著，提示了P53 蛋白、Rictor 蛋白的高表達，均能夠影響到子宮內膜癌的發生發展過程。試圖探討P53 蛋白、Rictor 蛋白的高表達對于腫瘤發生的影響, 分析可能由于下列病理性因素有關[14,15]：⑴P53 蛋白的表達上升, 能夠促進癌細胞內NF-KB或者MAPK 信號通路的激活,導致癌細胞的基因錯配修復能力的下降；⑵Rictor 蛋白的表達上升，能夠干預到上皮-間質轉換過程，提高細胞的變形能力，進而促進癌細胞的粘附和浸潤過程。沈運等[11]研究者也發現, 在子宮內膜癌病灶組織中，P53 蛋白的表達陽性率可平均上升35%～55%以上，在合并有明顯的盆腔內轉移或者腹水的患者中，P53 蛋白的表達陽性率可進一步的上升。在探討P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系過程中,可以發現P53 蛋白的高表達與患者臨床分期、組織學分級或者脈管浸潤密切相關，提示了P53 蛋白的表達與子宮內膜癌的綜合性病情的關系，這主要由于P53 蛋白的表達上升，能夠提高癌相比的浸潤深度,促進其對于盆腔內淋巴結組織的粘附，進而加劇了相關臨床病理特征的進展。而在FIGO 分期較晚、組織學分化程度較差、發生脈管浸潤、發生淋巴結轉移的患者中，Rictor 蛋白的表達同樣明顯的上升，提示了Rictor 的表達與子宮內膜癌的病情關系，這主要由于Rictor 蛋白的表達上升，能夠導致癌細胞的生物學特征的惡化，進而促進相關臨床病理的進展。單獨P53 蛋白、Rictor 蛋白在診斷子宮內膜癌的過程中具有一定的局限性，而通過聯合P53 蛋白、Rictor 蛋白，能夠避免單一指標靈敏度低導致子宮內膜癌病情評估不足的缺陷。

綜上所述, 在子宮內膜癌病灶組織中，P53 蛋白、Rictor 蛋白的表達陽性率均明顯上升, 同時P 53 蛋白、Rictor 蛋白的表達與子宮內膜癌的臨床病理特征密切相關。