子宮肌瘤組織中PCNA、EGFR的表達特點及與患者病理學特征的關系

陶偉華，孫紅娜，歐陽璐璐

（濮陽市油田總醫院，河南 濮陽 457001）

流行病學研究證實, 子宮肌瘤的發病率可達294~509/1 萬女性左右[1]。臨床上子宮肌瘤的發生，能夠導致患者月經紊亂癥狀的出現,并能夠增加直腸膀胱壓迫癥狀的發生風險[2,3]。在探討子宮肌瘤發病機制的過程中,可以發現生物學蛋白或者細胞因子的改變,能夠通過影響到平滑肌細胞的增殖和凋亡,進而促進平滑肌細胞的纖維化和間質的增生過程。增殖細胞核抗原（PCNA）的表達上升，能夠通過提高癌細胞核DNA 的增殖速度，進而提高癌細胞擴增水平，促進平滑肌間質細胞的成熟[4]；表皮生長因子受體（EGFR）的表達上升，能夠通過提高局部平滑肌組織的血流灌注水平,進而提高子宮平滑肌異常病變組織的血氧含量,進而促進了平滑肌細胞的增生[5]。部分研究者探討了EGFR 或者PCN A 在生殖系統惡性腫瘤患者中的表達情況，認為EGFR 或者PCNA 的表達上升與惡性腫瘤的發生密切相關[6]，但缺乏對于EGFR 或者PCNA 的表達與子宮肌瘤的關系研究。為了揭示EGFR 或者PCNA 的表達子宮肌瘤的關系，從而為臨床上子宮肌瘤的病情評估或者診療提供理論基礎,本次研究選取我院2017 年1 月至2017 年12 月收集的120例子宮肌瘤婦女, 探討了病灶組織中EGFR 或者PCNA 的表達情況及其與患者臨床病理特征的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2017 年 1 月至2017 年12 月收集的120 例子宮肌瘤婦女作為病例組、120例健康婦女作為健康組。

病例組，年齡 30~52 歲，平均為 42.6±8.6 歲，體質量指數(BMI)21.8±2.3kg/m2,發增生期 63 例、分泌期57 例；其中肌瘤多發65 例、單發55 例；肌瘤最大徑≥5cm 63 例、<5cm 57 例。健康組，年齡 30~53 歲,平均為 41.6±9.3 歲,BMI 22.1±2.4kg/m2,發增生期 67 例、分泌期 53 例。兩組婦女的年齡、BMI、增生期、分泌期構成情況差異無統計學意義（P>0.0 5）。

納入標準：⑴子宮肌瘤患者的診斷標準參考《婦產科學》第八版中的標準；⑵年齡30~52 歲；⑶子宮肌瘤經腹部超聲檢查證實;⑷對照組為健康婦女；⑸本研究獲得醫學倫理委員會的批準,研究對象知情同意。

排除標準：⑴伴有其他類型的婦科惡性腫瘤；⑵長期使用糖皮質激素類藥物；⑶長期使用免疫抑制劑；⑷伴有全身感染性疾病；⑸類風濕、結締組織疾病。

1.2 免疫組化染色方法 采用石蠟進行連續性切片,脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次,每日3~5min，8%的蛋白粉封閉液（商品名：BSA 購自南京博奧生物科技公司），封閉2h,倒去封閉液后加入一抗(兔來源 濃度1：1000~1500)，4℃冰箱過夜,磷酸鹽緩沖液沖洗 3 次，每日3~5min，加入二抗（鼠來源 1：400~500），室溫孵育20~30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3~5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標記物, 室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3~5min，滴加顯色劑（DAB 購自南京博奧生物科技公司），復染，脫水，封片。

1.3 結果判斷標準 免疫組化結果判定：增殖細胞核抗原（PCNA）、表皮生長因子受體（EGFR）的陽性著色表達于平滑肌細胞核中，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細胞數51%～75%為3 分、陽性細胞數所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3 分為陽性。

2 結果

2.1 兩組患者標本中的 PCNA、EGFR 表達比較病例組肌瘤組中的PCNA、EGFR 表達陽性率分別為80.00%、62.50%，健康婦女子宮肌層組織中的PCNA、EGFR 表達陽性率為 45.00%、15.83%，兩組比較差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組患者標本中的PCNA、EGFR 表達比較[n（%）]

2.2 不同肌瘤數目、大小的肌瘤組織中的PCNA 表達比較 在不單發與多發、肌瘤最大徑≥5cm 或<5cm 的肌瘤組織中的PCNA 陽性表達率差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

表2 不同肌瘤數目、大小的肌瘤組織中的PCNA 表達比較

2.3 不同肌瘤數目、大小的肌瘤組織中的EGFR 表達比較 多發肌瘤、肌瘤最大徑≥5cm 肌瘤組織中的EGFR 陽性表達率高于肌瘤單發、肌瘤最大徑<5cm 的肌瘤組織，差異具有統計學意義（P<0.05），見表3。

表3 不同肌瘤數目、大小的肌瘤組織中的EGFR 表達比較

2.4 子宮肌瘤組織中的EGFR、PCNA 表達的相關性 子宮肌瘤組織中的EGFR 陽性表達與PCNA陽性表達呈顯著的正相關系 （Spearman 秩相關系數=0.387，P=0.000<0.05），見表4。

表4 子宮肌瘤組織中的EGFR、PCNA 表達的相關性

3 討論

臨床上性激素受體的敏感性改變或者性激素水平的波動，均能夠促進子宮肌瘤的發生，特別是在年齡大于45 歲的育齡期女性人群中，子宮肌瘤的發病率可進一步的上升[7]。臨床上子宮平滑肌瘤的發生，能夠導致月經量增多、繼發性貧血或者尿頻尿急等臨床癥狀的出現,導致患者生活質量的顯著下降，并增加了遠期子宮肌瘤變性的風險[8,9]。現階段臨床上子宮肌瘤治療后,患者的復發率仍然較高,而本次研究對于子宮肌瘤患者病灶組織中EGF R 或者PCNA 的表達分析研究，具有下列幾個方面的現實意義：⑴能夠為臨床上子宮肌瘤的發病病因的研究提供參考,從而為高危人群的篩查和隨訪提供依據；⑵能夠為揭示子宮肌瘤的復發機制提供參考，從而降低子宮肌瘤治療后的復發風險。

EGFR 是生長因子家族成員，其能夠通過結合血管內皮細胞受體,提高新生血管內皮細胞的遷移和移行能力，促進新生血管的形成。EGFR 的表達上升能夠提高平滑肌細胞的血流灌注水平,提高平滑肌細胞DNA 的擴增速度，進而導致平滑肌細胞持續性的自我增殖。基礎方面的研究還認為，EGFR 的表達上升能夠導致平滑肌細胞細胞周期的紊亂,導致其快速跨越G0 期能力的顯著提高[10]；PCNA 是細胞核增殖相關因子，其不僅能夠反應細胞的增殖狀態,同時還能夠評估細胞的成熟程度和分裂的風險。PCNA 的上升能夠導致平滑肌細胞間質成分增生的發生,導致間質成分纖維化和成熟能力的增強[11]。部分研究者探討了EGFR 的表達與子宮肌瘤的關系,認為EGFR 的表達與子宮肌瘤的關系密切相關[12]，但缺乏對于PCNA 的表達與子宮肌瘤的關系研究。

本次研究發現, 在子宮肌瘤病灶組織中,PCNA、EGFR 蛋白的表達陽性率均明顯的上升，高于對照組，差異較為明顯，表明PCNA、EGFR 的表達與子宮肌瘤的發生密切相關，PCNA、EGFR 的高表達可能參與到了子宮肌瘤的病情進展過程中。通過匯集不同的相關文獻,筆者認為這主要由于PCNA、EGFR 的下列幾個方面的作用有關[13,14]：⑴PCNA 的表達上升能夠提高細胞核轉錄基因的活性，提高平滑肌細胞的增殖速度；⑵EGFR 的表達上升，不僅能夠提高新生血管的形成速度，增加平滑肌組織的血流灌注,同時還能夠提高平滑肌細胞間質成分的增生水平。曹麗娟等[15]研究者也認為，在子宮肌瘤患者中，EGFR 的表達陽性率可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的月經量改變或者多發性子宮肌瘤患者中，EGFR 的表達陽性率的上升更為明顯。在探討PCNA、EGFR 的表達與子宮肌瘤臨床病理特征關系的過程中可以發現PCNA的表達與子宮肌瘤的臨床病理特征并無明顯的關系,提示PCNA 的表達并不能影響到子宮肌瘤的數量或者直徑大小，但部分研究者認為，在多發性子宮肌瘤患者中，PCNA 的表達濃度上升較為明顯，本次研究并無發現PCNA 的表達與子宮肌瘤數量的關系，存在不同的臨床結論，主要由于PCNA 蛋白的檢測陽性率或者檢測時機的不同有關;在探討EGFR 的表達與子宮肌瘤臨床病理關系的過程中，可以發現在多發性肌瘤或者肌瘤直徑較大的患者中，EGFR 的表達明顯的上升, 高于單發組或者直徑較小組患者，差異較為明顯，提示了臨床上可以通過隨訪EGFR 的表達, 進而評估子宮肌瘤的病情。最后，本次研究發現，PCNA、EGFR 的表達具有一定的相關系,提示PCNA、EGFR 在影響到子宮肌瘤的病情進展過程中可能發揮了一定的協同作用，但其具體的機制仍然需要深入探討。

綜上所述, 在子宮肌瘤患者中，PCNA、EGFR的表達陽性率均明顯的上升，EGFR 的表達與子宮肌瘤的數量或者肌瘤的大小密切相關, 同時PCNA、EGFR 的表達同樣具有一定的關系。后續臨床相關研究可以探討PCNA、EGFR 的表達與子宮肌瘤復發的關系。