血清EPO、TGF-β1、細胞間黏附分子-1與Ⅱ度燒傷患者創(chuàng)面愈合及瘢痕程度的關系分析

劉霞 李凱琳

[摘要]目的：探究血清促紅細胞生成素（EPO）、轉化生長因子-β1（TGF-β1）、細胞間黏附分子-1（ICAM-1）與Ⅱ度燒傷患者創(chuàng)面愈合及瘢痕程度的關系。方法：選取筆者醫(yī)院2017年5月-2019年5月收治的Ⅱ度燒傷患者84例作為研究對象，對比不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面愈合率及溫哥華瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）評分，Pearson相關性分析血清各指標與創(chuàng)面愈合時間、VSS評分關聯(lián)性。結果：血清TGF-β1、EPO高表達者創(chuàng)面愈合時間短于低表達者，創(chuàng)面愈合率高于低表達者;ICAM-1高表達者創(chuàng)面愈合時間長于低表達者，創(chuàng)面愈合率低于低表達者，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。血清EPO、TGF-β1與創(chuàng)面愈合時間呈負相關，與創(chuàng)面愈合率呈正相關，ICAM-1與創(chuàng)面愈合時間呈正相關，與創(chuàng)面愈合率呈負相關（P<0.05）。血清EPO高表達者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分低于低表達者，TGF-β1高表達者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分高于低表達者（P<0.05）;血清EPO與瘢痕色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分呈負相關，TGF-β1與瘢痕色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分呈正相關（P<0.05）。不同血清ICAM-1水平患者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分無比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：血清EPO、TGF-β1、ICAM-1與Ⅱ度燒傷患者創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面愈合率顯著相關，且血清EPO、TGF-β1與創(chuàng)面瘢痕形成密切相關，調控三者表達可能為燒傷患者創(chuàng)面高質量愈合提供了一個潛在干預思路。

[關鍵詞]促紅細胞生成素;轉化生長因子-β1;細胞間黏附分子-1;Ⅱ度燒傷;創(chuàng)面愈合;瘢痕

Abstract： Objective? To investigate the relationship between serum erythropoietin （EPO）， transforming growth factor-β1 （TGF-β1）， intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） and wound healing and degree of scarring in patients with second degree burns. Methods? A total of 84 patients with second degree burns treated in our hospital from May 2017 to May 2019 were selected as the research objects.Compare the wound healing time， wound area healing rate and the Vancouver scar scale （VSS） score of patients with different serum EPO， TGF-β1， and ICAM-1 levels.Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation of serum indexes with wound healing time and VSS score. Results? The serum TGF-β1 and EPO high expression patients had shorter wound healing time than those with low expression.The wound healing time of ICAM-1 high expression was longer than that of low expression， and the wound healing rate was lower than that of low expression （P<0.05）. Serum EPO and TGF-β1 were negatively correlated with wound healing time and positively correlated with wound area healing rate， ICAM-1 was positively correlated with wound healing time and negatively correlated with wound area healing rate （P<0.05）. Those with high serum EPO expression had lower color， thickness， blood vessel distribution， and softness scores than those with low expression， and those with high expression of TGF-β1 had higher color， thickness， blood vessel distribution， and softness scores than those with low expression （P<0.05）. Serum EPO was negatively correlated with scar color， thickness， blood vessel distribution， and softness score， and TGF-β1 was positively correlated with scar color， thickness， blood vessel distribution， and softness score （P<0.05）. There was no significant difference in color， thickness， vascular distribution and softness scores among patients with different serum ICAM-1 levels （P>0.05）. Conclusion? Serum EPO， TGF-β1， ICAM-1 are significantly correlated with wound healing time and wound area healing rate in patients with second degree burns.In addition， serum EPO and TGF-β1 are closely related to wound scar formation. Regulation of the three expressions may provide a potential intervention for high-quality wound healing in burn patients.

Key words： erythropoietin（EPO）; transforming growth factor β1（TGF-β1）; intercellular adhesion molecule-1（ICAM-1）; second degree burn; wound healing; scar

Ⅱ度燒傷皮膚仍保留部分再生活力，故常采用非手術治療，通過機體自身再生能力，進行自身一系列修復，從而實現(xiàn)自行愈合，但易形成瘢痕，如何加速創(chuàng)面愈合、提高愈合質量成為臨床研究的重點。促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO）可刺激紅細胞生成，減輕燒傷動物模型運動神經(jīng)元凋亡和神經(jīng)炎癥反應，改善神經(jīng)肌肉功能障礙[1]。轉化生長因子-β1（Transforming growth factor β1，TGF-β1）可調節(jié)細胞生長、分化、凋亡，根據(jù)Oryan A等[2]研究，體外誘導成纖維細胞遷移并調節(jié)TGF-β1基因的表達，可加速燒傷愈合。細胞間黏附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）可介導黏附反應，參與組織纖維化[3]。但目前關于血清EPO、TGF-β1、ICAM-1與Ⅱ度燒傷患者創(chuàng)面愈合及瘢痕程度關系的報道較少，本研究對此進行探討，報道如下。

1? 資料和方法

1.1 臨床資料：選取筆者醫(yī)院2017年5月-2019年5月收治的Ⅱ度燒傷患者84例作為研究對象，其中男43例，女41例;淺Ⅱ度燒傷44例，深Ⅱ度燒傷40例。納入標準：①均在筆者醫(yī)院接受診治的Ⅱ度燒傷患者，判定方法依據(jù)三度四分法、中國九分法，治療方法為保守治療;②燒傷面積2%～15%;③無局部及全身感染;④無糖尿病、高血壓;⑤對本研究知情，自愿簽署知情同意書;⑥年齡≥18歲;⑦無急性心腦血管疾病;⑧無血液系統(tǒng)疾病。排除標準：①放射性燒傷者;②合并凝血功能障礙者;③檢測配合度較差者;④精神、認知異常者;⑤合并骨折者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：采用生理鹽水清潔創(chuàng)周皮膚，0.1%苯扎溴銨溶液（上海運佳黃浦制藥有限公司，國藥準字H31021811）沖洗燒傷創(chuàng)面，去除污染嚴重、皺縮、卷曲腐皮，剪破水皰引流，未脫落腐皮剪孔。重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠（桂林華諾威基因藥業(yè)有限公司，國藥準字S20020112）薄層外涂創(chuàng)面，創(chuàng)面覆蓋涂有磺胺嘧啶鋅軟膏（河南全宇制藥股份有限公司，國藥準字H41022525）的凡士林油砂，無菌紗布適當加壓包扎，隔日進行1次換藥，深Ⅱ度燒傷患者配合負壓封閉引流，75%乙醇清洗創(chuàng)緣5cm內皮膚，修剪聚乙烯醇醫(yī)用海綿（江蘇科宇醫(yī)療器械有限公司）敷料，匹配創(chuàng)面面積與形狀，覆蓋創(chuàng)面，透明透氣粘膠貼膜密封，引流管系膜法封閉，啟動山東創(chuàng)康生物科技有限公司ZN100型智能創(chuàng)傷負壓綜合治療儀，負壓值為-16.6kPa，連續(xù)治療7d，注入20ml/200m2生理鹽水，沖洗引流管道、敷料，1次/d，防止敷料變硬。

1.2.2 標本采集、檢測：于治療前采集患者肘部5ml靜脈血，3 000r/min離心15min，依次通過上海西唐生物科技有限公司、南京森貝伽生物科技有限公司、上海語純生物科技有限公司酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平。參照檢測結果，按血清EPO、TGF-β1、ICAM-1含量的中位數(shù)倍數(shù)（MOM）把患者分為<0.5MOM（低表達）、≥0.5MOM（高表達）。

1.3 觀察指標：①比較不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面愈合率：創(chuàng)面愈合時間即創(chuàng)面完全上皮化所需的時間;治療14d后測量創(chuàng)面愈合率，創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積）/原始創(chuàng)面面積×100%;②分析血清EPO、TGF-β1、ICAM-1與創(chuàng)面愈合的關系;③比較不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者溫哥華瘢痕量表（Vancouver scar scale，VSS）評分：包括色澤（0～3分）、血管分布（0～3分）、柔軟程度（0～5分）、厚度（0～4分），0分為正常，分值越高，對應的項目異常程度越高;④分析血清EPO、TGF-β1與瘢痕程度的關系。

1.4 統(tǒng)計學分析：采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以（x?±s）表示、t檢驗，計數(shù)資料用例（%）表示、χ2檢驗，采用Pearson進行相關性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結果

2.1 患者一般資料：不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者性別、年齡、燒傷病情、燒傷總面積比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者創(chuàng)面愈合情況：血清TGF-β1、EPO高表達者創(chuàng)面愈合時間短于低表達者，14d創(chuàng)面愈合率高于低表達者;ICAM-1高表達者創(chuàng)面愈合時間長于低表達者，14d創(chuàng)面愈合率低于低表達者，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 血清EPO、TGF-β1、ICAM-1與創(chuàng)面愈合的關系：Pearson相關性分析，血清EPO、TGF-β1與創(chuàng)面愈合時間呈負相關，與創(chuàng)面愈合率呈正相關，ICAM-1與創(chuàng)面愈合時間呈正相關，與創(chuàng)面愈合率呈負相關（P<0.05）。見表3，圖1～3。

2.4 不同血清EPO、TGF-β1、ICAM-1水平患者瘢痕VSS評分比較：血清EPO高表達者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分低于低表達者，TGF-β1高表達者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分高于低表達者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;不同血清ICAM-1水平患者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分無比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表4。

2.5 血清EPO、TGF-β1與瘢痕程度的關系：Pearson相關性分析，血清EPO與瘢痕色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分呈負相關，TGF-β1與瘢痕色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分呈正相關（P<0.05），見表5，圖4～5。

3? 討論

炎癥和滲出是燒傷皮膚修復過程中經(jīng)歷的首個階段。ICAM-1是一種炎癥因子，可刺激創(chuàng)面炎癥細胞浸潤，損傷瘢痕新生細胞，影響傷口恢復速度[4]。汪漣等[5]報道顯示，與正常皮膚比較，燒傷創(chuàng)面ICAM-1的mRNA表達水平明顯升高。本研究發(fā)現(xiàn)，ICAM-1高表達者創(chuàng)面愈合時間長于低表達者，14d創(chuàng)面愈合率低于低表達者，與創(chuàng)面愈合時間呈正相關，與創(chuàng)面面積愈合率呈負相關，提示ICAM-1可影響創(chuàng)面的愈合，抑制其表達可能有助于燒傷患者皮膚創(chuàng)面的愈合，其機制可能是，低表達的ICAM-1對新生肉芽組織的損傷、創(chuàng)面血液循環(huán)影響較小。Wang Y等[6]研究顯示，ICAM-1在雄性比格犬燒傷模型中呈高表達，采用丙泊酚持續(xù)鎮(zhèn)靜抑制ICAM-1表達，可改善燒傷皮膚的炎癥反應與免疫功能，論證了本研究觀點。本研究后續(xù)的相關性分析發(fā)現(xiàn)，不同血清ICAM-1水平患者色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分相似，表明ICAM-1與瘢痕的形成無明顯關系。

新生血管的生成、創(chuàng)面的血管化是新生組織產(chǎn)生的基礎條件。EPO可促進紅細胞分化、增殖，維持外周血中紅細胞數(shù)量，并能抑制缺氧條件下細胞的凋亡，保護組織免受缺氧缺血損傷[7]。Fatemi MJ等[8]報道發(fā)現(xiàn)，EPO可刺激大鼠全層皮膚移植物血運重建，有利于傷口的愈合。Rocha J等[9]報道指出，EPO可減輕燒傷引起的中性粒細胞趨化性/浸潤，具有抗炎、抗凋亡作用，是細胞保護性因子。提示EPO具有促進血管形成等多種作用。本研究發(fā)現(xiàn)，血清EPO高表達者創(chuàng)面愈合時間短于低表達者，14d創(chuàng)面愈合率高于低表達者，與創(chuàng)面愈合時間、VSS各評分呈負相關，與創(chuàng)面愈合率呈正相關，表明EPO高表達可促進創(chuàng)面愈合。在實驗誘導的糖尿病豬皮膚燒傷模型中，皮膚上局部應用EPO，可刺激血管生成、再上皮化、膠原蛋白沉積及抑制炎癥反應和凋亡，加速創(chuàng)面的愈合，從側面論證了本研究結論[10]。EPO促進燒傷創(chuàng)面愈合的機制可能有：①能改善創(chuàng)傷組織細胞的流動，增加角質細胞、成纖維細胞的遷移，從而有利于創(chuàng)面的愈合;②具有抗炎作用，可抑制創(chuàng)面的炎癥反應，促進肉芽組織進行再吸收;③可介導新生血管形成，改善創(chuàng)傷面血流微循環(huán)，為組織提供豐富的氧和營養(yǎng)物質，故能加快創(chuàng)傷的恢復[11]。此外根據(jù)Lyu DL等[12]研究，EPO可通過促進TGF-β1信號傳導通路表達，加快大鼠急性傷口愈合。

TGF-β1可刺激間質細胞增殖產(chǎn)生細胞外基質，介導多種組織纖維化反應。本研究發(fā)現(xiàn)，血清TGF-β1高表達者創(chuàng)面愈合時間短于低表達者，14d創(chuàng)面愈合率高于低表達者，與創(chuàng)面愈合時間呈負相關，與創(chuàng)面愈合率呈正相關，提示TGF-β1高表達可促進燒傷創(chuàng)面的愈合。在皮膚創(chuàng)傷修復實驗中，在皮膚受創(chuàng)后1h就能夠觀察到TGF-β1被激活并表達，進而促進成纖維細胞的增殖和細胞外基質的沉積，加速創(chuàng)面愈合，與本研究結論相似[13]。但本研究隨后的相關性分析顯示，TGF-β1與瘢痕色澤、厚度、血管分布、柔軟度評分呈正相關，說明TGF-β1高表達可加重瘢痕的形成。體外研究表明，上調TGF-β1表達，可引起瘢痕增生[14]。Fang X等[15]報道顯示，采用Smad相互作用蛋白1抑制TGF-β1信號通路，發(fā)現(xiàn)肥厚性瘢痕兔模型總體瘢痕形成得到改善。均佐證了本研究結果。分析原因發(fā)現(xiàn)，在創(chuàng)傷早期，TGF-β1能作用于皮膚損傷處的成纖維細胞，介導Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、整合素、彈性蛋白、纖維連接蛋白等多種細胞外基質成分大量合成，并抑制細胞外基質降解酶的產(chǎn)生，加強基質與細胞的結合，促進皮膚傷口張力增加和創(chuàng)面局部纖維化，從而促進燒傷皮膚創(chuàng)傷愈合[16]。但在創(chuàng)面修復后期，TGF-β1的過度表達可刺激下游效應因子結締組織生長因子的大量合成，而結締組織生長因子已被證實可導致增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，因此修復期過表達的TGF-β1可導致瘢痕形成[17]。本研究不足之處在于，納入樣本量較小，有待后續(xù)擴大樣本量進行驗證、完善。

綜上所述，血清EPO、TGF-β1、ICAM-1與Ⅱ度燒傷患者創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面愈合率顯著相關，且血清EPO、TGF-β1與創(chuàng)面瘢痕形成密切相關，調控三者表達可能為燒傷患者創(chuàng)面高質量愈合提供了一個潛在干預思路。

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