血清HNL、CD64和PCT檢測對細菌感染性疾病的臨床診療

郭連峰 牟娜 劉兆瑋 崔少勇 張長庚 董士民

(1衡水市人民醫院檢驗科，河北 衡水 053000；2河北醫科大學第三醫院)

感染性疾病是臨床最常見的一類疾病，也是臨床上最容易誤診的一類疾病。能引發感染性疾病的病原體種類繁多，同時又缺乏可靠的實驗室檢測手段。隨著我國人口老齡化發展、腫瘤患者的日趨增多、艾滋病的流行，醫療技術的進步，有創診療不斷增加，感染率也在不斷上升。在感染性疾病的診療中，關鍵在于能否在感染早期鑒別感染類型，從而使患者得到及時有效的治療。這對于防止抗生素的濫用也是極為重要的〔1〕。在臨床病例中，細菌感染是多見的，因此本研究在感染性疾病的病程的早、中、后期動態監測中性粒細胞載脂蛋白(HNL)、中性粒細胞 CD64、降鈣素原(PCT)、白細胞計數(WBC)和C-反應蛋白(CRP)等在細菌感染患者治療前后的表達水平，探討HNL、CD64和PCT對細菌感染性疾病的診斷及抗生素治療的指導作用。

1 對象與方法

1.1一般資料 隨機選取2017年2月至2018年12月衡水市人民醫院收治的210例感染性疾病病例，其中男118 例，女92 例，年齡18～91歲。根據就診者的臨床表現、影像學檢查資料，實驗室檢測結果等，把這些患者歸入細菌感染亞組 105 例和病毒感染亞組105 例。對照組選取同期健康體檢者 80 例，其中男 46 例，女 34 例，年齡 24～87 歲。各組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。排除腫瘤性發熱、結締組織病及自身免疫性疾病等。受試者采血前均未使用抗生素、激素及維生素類藥物。

1.2試劑與方法 研究對象均于治療前進行血清 HNL、PCT、全血 CD64、WBC 和 CRP 水平測定,細菌 感染亞組于應用抗菌藥物治療 72 h、7 d 后再次測 定血清 PCT、HNL、全血 CD64、WBC 和 CRP 水平。 血清中 PCT 水平通過上轉發光免疫分析儀測定,由 北京熱景生物技術有限公司提供配套試劑。 PCT 操 作步驟:取出檢測卡編號,平衡室溫;取一次性試管 編號,用微量加樣器準確加入 100 μl 血清和 150 μl 樣本稀釋液,混合均勻;取混合后的 100 μl 液體加 入加樣孔;室溫放置 20 min 后上機測量。 HNL 測定 試劑由長春博德生物技術有限責任公司提供,測定 方法為酶聯免疫法,操作過程嚴格按照試劑盒操作 規程進行。 CD64 指數通過 BD FACS calibur 流式細 胞儀測定,抗體均為 BD 公司提供,全血40 μl+20 μl CD64PE / CD45Percp 抗體混勻,避光放置 1. 5 h,在 混合物中用加樣器加入 2 ml 熒光活化細胞分類計 (FACS)溶血劑,繼續避光放置 20 min 上機檢測。 WBC 水平采用日本希森美康公司生產的 sysmex XE-3000 測定。 全血 CRP 采用散射比濁法測定,由 深圳市國賽生物技術有限公司提供。

1.3統計學分析 采用SPSS13.0軟件和MedCalc軟件進行t檢驗。繪制受試者工作特征(ROC)曲線，計算PCT、BG和CD64聯合診斷細菌感染性疾病的靈敏度和特異性。

2 結 果

2.1各組治療前HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP檢測結果比較 細菌感染亞組治療前HNL、CD64、PCT、WBC和CRP水平分別與病毒感染亞組和對照組比較，差異均有統計學意義(均P<0.05)。病毒感染亞組與對照組無明顯差異(P>0.05)，見表1。

2.2細菌感染組治療前后HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP檢測結果比較 細菌感染亞組治療后HNL、CD64、PCT和WBC水平與治療前比較均有不同程度下降，差異有統計學意義(均P<0.05)，治療72 h后CRP水平較治療前明顯升高(P<0.05)，治療7 d后CRP水平較治療前明顯下降(P<0.05)。見表2。

2.3HNL、CD64和PCT各指標及聯合檢測的ROC曲線 見表3，圖1，2。

表1 治療前HNL、CD64、PCT、WBC和CRP檢測結果的比較

與細菌感染亞組比較：1)P<0.05

表2 細菌組在治療前、后HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP檢測結果的比較

與治療前比較：1)P<0.05

表3 幾種指標診斷細菌感染的ROC曲線

圖1 HNL、CD64和PCT檢測的ROC曲線

圖2 HNL、CD64和PCT聯合檢測的ROC曲線

3 討 論

診斷感染性疾病主要依靠病原學檢測，但培養周期長，還存在一定的假陽性和假陰性〔2〕，大多數就診患者在病原學檢測前均已經接受過抗生素治療，大大影響了病原體的檢出率。傳統的WBC及分類、CRP作用也是有限的，容易受多種非感染因素的影響，其特異性、靈敏度和準確性都較低。在全身嚴重感染時，骨髓增殖受到抑制，WBC無法反映感染的真實情況。CRP在感染初期水平可能仍維持正常。

HNL是活化中性粒細胞的釋放產物，在血清中的半衰期為10～20 min。HNL 感染后 6～8 h即開始升高，24～48 h達到峰值，可以實現床旁檢測，檢測方便快捷。HNL水平升高可以用來鑒別診斷細菌感染和病毒感染，且有較高的敏感性、特異性〔3〕。HNL與傳統方法相比有很大優勢，可以及時指導臨床用藥，調整用藥方案，治療后患者細菌感染已消除，HNL水平降低，這時可以提示臨床醫師解除患者的抗生素治療〔4〕。郭靚等〔5〕研究證明在急性細菌感染中HNL升高最明顯，具有較強的特異性和較高的準確率。

CD64在正常情況下，主要分布于巨噬細胞、單核細胞和樹突狀細胞等抗原遞呈細胞(APC)表面。中性粒細胞表面CD64幾乎不表達，且其表達無性別差異〔6〕。當人體受到細菌感染時，中性粒細胞表面分子 CD64 表達水平會在4～6 h內顯著升高，激活中性粒細胞的功能。所以CD64表達增加可以認為是中性粒細胞活化的標志，可以當作是感染性疾病良好的診斷指標〔7〕。當病原體被消除時，CD64 可快速恢復正常。CD64 的穩定性較好，影響因素少，表達水平與感染程度成正比。病毒感染和非細菌感染所引起的炎性反應，均不會造成中性粒細胞 CD64 表達水平的增高。有研究表明 CD64 可指導臨床抗生素的使用，有可疑感染的病人如果在24 h內CD64的表達水平不上調，則可停止抗生素的使用，不必依賴微生物學檢測結果〔8〕。

PCT是沒有激素活性的降鈣素前肽物質，在健康個體中濃度非常低。健康人血清中PCT的半衰期為25～30 h，PCT 在嚴重感染后 6～12 h 內迅速升高，在感染控制后迅速下降。微生物感染時PCT 升高，其并不是由甲狀腺分泌，而是由機體所有組織和不同類型的細胞(巨噬細胞、單核細胞)持續合成和釋放〔9〕。

本研究可能是由于CRP 在炎癥消退后 1～2 d內仍會維持較高水平。可見動態監測血清HNL和PCT、外周血CD64 表達，在感染早期可以鑒別細菌感染、判斷機體感染的嚴重程度，在治療中可及時評價治療效果，指導用藥〔10～12〕。本研究結果可見HNL、CD64和PCT 聯合檢測對細菌性感染和病毒性感染具有重要的鑒別診斷意義。由于HNL、CD64 和 PCT三個檢測指標在感染發生時出現的時間略有不同，在患者體內持續時間長短也不同，而患者感染后到醫院進行檢測的時間點也不同，所以三項指標聯合檢測可以提高診斷效能，幾種指標的聯合診斷可以結合不同診斷指標的優點，彌補單獨診斷時靈敏度特異度不高的缺點，對細菌感染的早期鑒別診斷、病情的評估及治療過程中的療效觀察具有重要的意義。

目前，HNL、PCT兩者均可以實現床旁檢測，尤其 PCT在實驗室的檢測和臨床的應用比較廣泛，其操作方便、周期短且具有一定的特異度、靈敏度和診斷正確率，對細菌感染疾病的診斷效能比較高。所以將HNL、CD64與PCT聯合檢測能更加有效的診斷細菌感染性疾病，適合在臨床診斷中推廣應用。