氣相色譜法測定恩替卡韋中間體的有機溶劑殘留量

陳冬

（南京正科醫藥股份有限公司，江蘇 南京211100）

恩替卡韋是一種用于治療乙肝病毒感染的新一代鳥嘌呤核苷類似物口服藥，主要用于治療成人伴有病毒復制活躍和血清轉氨酶持續增高，或肝組織學為活動性病變的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最強、變異幾率最低的核苷類似物。[1]由于生產過程中使用了甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺等有機溶劑，故有可能會殘留在產品中，用本文建立了氣相色譜法檢測，結果表明本法分離度高、靈敏、準確且簡便。

1 儀器與試藥

Agilent7890A 氣相色譜儀，梅特勒AB135-S 電子分析天平，甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺均為分析純，二甲基亞砜為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱（30m×0.32mm×1.8μm），進樣口溫度220℃，檢測器溫度250℃，FID 檢測器；起始溫度為60℃，維持5min，以10℃/min 的速率升至100℃，再以20℃/min 的速率升至220℃，維持5min。載氣為氮氣，流速為4.0ml/min；分流比20:1。

2.2 專屬性試驗

空白溶劑：二甲基亞砜。

甲醇定位溶液：精密稱取甲醇150mg 置裝有少量二甲基亞砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

二氯甲烷定位溶液：精密稱取二氯甲烷30mg 置裝有少量二甲基亞砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

乙酸乙酯定位溶液：精密稱取乙酸乙酯250mg 置裝有少量二甲基亞砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

甲苯定位溶液：精密稱取甲苯44.5mg 置裝有少量二甲基亞砜的100ml 量瓶中，再用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

N，N- 二甲基甲酰胺定位溶液：精密稱取N，N- 二甲基甲酰胺44mg 置裝有少量二甲基亞砜溶液的100ml 量瓶中，再用二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

系統適用性溶液：精密移取上述各定位溶液10.00ml 于同一100ml 容量瓶中，用二甲基亞砜稀釋到刻度，搖勻。精密量取2ul，照上述色譜條件進行檢測。系統適用性溶液中的甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺各峰能完全分離，分離度均大于1.5，且各溶劑峰的理論塔板數均大于5000。（見表1）

表1 系統適用性試驗

2.3 檢測限與定量限

精密量取甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N,N- 二甲基甲酰胺定位溶液適量，分別用二甲基亞砜稀釋至適宜濃度，精密量取2μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以信噪比3:1 確定檢測限，以信噪比10:1 確定定量限；精密量取各溶劑適宜濃度溶液適量，置同一量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度制成各溶劑的混合定量限（LOQ）濃度溶液，連續進樣5 針，精密量取2?l，注入氣相色譜儀，照上述色譜條件進行檢測。（見表2，3）。

表2 濃度- 信噪比

表3 定量限精密度

2.4 重復性試驗

精密稱取樣品0.5g 置10ml 量瓶中，精密加入對照品溶液5ml，使溶解，并用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，使供試品溶液中各溶劑的濃度接近50%對照限度溶液，精密量取2ul 注入氣相色譜儀，連續進樣6 次。結果見表4，結果表明重復性良好。

表4 重復性試驗結果

3 討論

3.1 溶劑甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、N，N- 二甲基甲酰胺的理論塔板數均大于5000，且分離度大于1.5 符合《中國藥典》的相關規定。

3.2 溶劑的選擇：經試驗，恩替卡韋中間體不溶于水，且二甲基亞砜沸點不高，用其作溶劑有利于待測溶劑的汽化和縮短分析時間。[1]

3.3 重復性試驗中采用的是樣品加對照溶液，使各溶劑濃度接近50%限度溶液。