LncRNA HOTAIR在婦科常見惡性腫瘤的預后方面的Meta分析

1.深圳市南山區(qū)婦幼保健院婦科 （廣東 深圳 518000）

2.北京大學深圳醫(yī)院運動醫(yī)學科 （廣東 深圳 518000）

楊 蓓 王 霜2 溫琴琴2 林進強2 王祥珍1

宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤最常見的三大惡性腫瘤，大約占所有女性癌癥的14%[1]。在日本，每年大約有10000人死于上述三大惡性腫瘤[2]。盡管目前治療手段明顯增多，手術(shù)治療、術(shù)后的輔助性放化療以及靶向生物治療已被用于以上惡性腫瘤，但是由于發(fā)現(xiàn)較晚、易復發(fā)等特點，預后往往不佳。卵巢癌的中位生存率在2年左右，而子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌的中位生存率約為1年[3-5]。因此，尋找具有早期診斷價值的生物標志物，對于上述三大腫瘤的診斷、治療及預后顯得十分重要。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，LncRNA)是一類長度超過200個核苷酸，缺乏一個開放閱讀框的非編碼RNA[6]。現(xiàn)有研究表明，lncRNAs中在各類腫瘤的增殖，凋亡，侵襲和轉(zhuǎn)移能力中發(fā)揮了重要作用[7]。HOX轉(zhuǎn)錄反義基因RNA(HOX transcript antisense intergenic RNA，HOTAIR)是一個位于染色體12q13.13，總長度約為2337個核苷酸，在翻譯區(qū)起重要作用的非編碼RNA。深度測序和芯片技術(shù)的發(fā)展，研究表明HOTAIR表達在乳腺癌[8]、結(jié)腸癌[9]、肝癌[10]以及宮頸癌[11]的發(fā)生發(fā)展中起到了關(guān)鍵的作用。近年來，一些研究發(fā)現(xiàn)HOTAIR在宮頸癌[12]、子宮內(nèi)膜癌[13]以及卵巢癌[14]的預后也起著重要作用。因此本研究的目的是探究lncRNA HOTAIR是否能作為婦科常見惡性腫瘤的新生物標志物。我們采用Meta分析來描述HOTAIR表達量與婦科三大腫瘤預后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索 從PubMed、Cochran Library、Embase、Web of Science等英文數(shù)據(jù)庫檢索相關(guān)文獻。檢索文獻時間為各個數(shù)據(jù)庫建庫至2017-08-31。英文檢索詞則以“l(fā)ncRNA HOTAIR，cervical cancer，endometrial cancer，ovarian cancer， prognosis”為關(guān)鍵詞或主題詞。對檢索到相關(guān)文獻的摘要進行詳細了解，以進一步查找可能符合納入標準的文獻。

1.2 納入標準與排除標準 納入標準：(1)英文文獻；(2)明確宮頸癌診斷(術(shù)后病理證實)；(3)涉及l(fā)ncRNA HOTAIR與宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌的。

排除標準：(1)讀者來信、會議等非正式文獻；(2)缺乏關(guān)鍵數(shù)據(jù)或生存曲線信息不全；(3)病例來源不明確的；(4)病理診斷標準不明確；(5)重復報告；(6)合并其他癌癥的。

1.3 文獻篩選及數(shù)據(jù)提取 由2位研究人員按照表1獨立提取重要資料，包括作者、出版年份、國家、腫瘤類型、樣本類型、腫瘤分期、標本數(shù)、檢測方法、cut-off值以及Newcastle-Ottawa Scale(NOS)。對于文獻中只提供生存曲線而未提供HR以及95%CI的，使用Engauge Digitizer軟件提取對應(yīng)數(shù)據(jù)后，經(jīng)轉(zhuǎn)換后納入研究。

1.4 文獻質(zhì)量評估 本研究采用NOS量表對納入的相關(guān)文獻進行文獻質(zhì)量評估。

1.5 統(tǒng)計學方法 每篇文獻中l(wèi)ncRNA與宮頸癌患者預后的相關(guān)性都采用HR和95%CI進行評估。HR的異質(zhì)性是由Cochran Q檢驗和Hihhin's的I2統(tǒng)計評估。當P＜0.05或I2＞50%時，異質(zhì)性被認為具有統(tǒng)計學意義。為了評估預測lncRNA HOTAIR的表達與生存率之間的關(guān)系，固定效應(yīng)或隨機效應(yīng)模型將被用于計算HR。固定效應(yīng)模型(Mantel-Haenszel檢驗)被應(yīng)用在沒有研究間的異質(zhì)性的(P≥0.05或I2≤50%)，而隨機效應(yīng)模型(Der Simonian和Laird法)被應(yīng)用于能觀察到顯著的異質(zhì)性的(P＜0.05或采用I2＞50%)。本研究使用Stata 14.0對從相關(guān)文獻中提取的數(shù)據(jù)進行相關(guān)分析以及用于構(gòu)建森林圖。納入的相關(guān)文獻之間存在潛在的發(fā)表偏倚用Begg's漏斗圖和Egger偏倚評估指標測試。P＜0.05被認為有統(tǒng)計學上的顯著差異。

2 結(jié) 果

2.1 文獻篩選結(jié)果 初次通過電子圖書館檢索獲得相關(guān)文獻153篇，排除重復發(fā)表文獻48篇，以及排除不符合納入排除標準的96篇，最終納入9篇研 究[12-20]，其中宮頸癌文獻5篇，子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌的各2篇，見圖1。

2.2 納入文獻的基本信息及文獻質(zhì)量評估 為了探究三大婦科腫瘤總體生存率(o v e r a l l survival，OS)與lncRNA HOTAIR表達量的關(guān)系，本研究共納入9篇相關(guān)文獻，樣本量共計1094例，其中病例組636例，對照組458例。納入的研究中8篇采用qRT-PCR進行l(wèi)ncRNA HOTAIR表達量的檢測，1篇采用原位雜交(In Situ Hybridization, ISH)進行檢測。對所有納入的文獻進行NOS評分，結(jié)果顯示，9個研究均為高質(zhì)量文獻(評分≥10)，納入文獻的基本特征詳見表1。

表1 文獻基本信息特征與質(zhì)量評估

圖1 文獻篩選流程

2.3 異質(zhì)性檢驗 如圖1所示，納入本研究的9個研究總體異質(zhì)性不高(I2=1.1%，P=42.5%)，因此本研究采用固定模型分析風險比(hazard ratio，HR)和95%的置信區(qū)間(confidence interval，CI)。在亞組分析中，宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌以及卵巢癌等研究的異質(zhì)性均不高，分別為(I2=41%，P=14.8%)，(I2=0.0%，P=95.1%)，(I2=0.0%，P=97.5%)，因此全部采用固定模型分析HR和95%CI。

2.4 M e t a 結(jié)果分析 如圖2所示，最終的M e t a 結(jié)果顯示合成風險比為H R=2.1 0，9 5%C I：1.51～2.93(P=0.000)，上述結(jié)果提示lncRNA HOTAIR高表達的腫瘤患者總體OS較低。同時在亞組分析中，我們發(fā)現(xiàn)lncRNA HOTAIR的高表達與婦科三大腫瘤較差的OS均有明顯的統(tǒng)計學意義。其中宮頸癌的風險比為HR=2.12，95%CI：1.32～3.39(P=0.002)，子宮內(nèi)膜癌的風險比為H R=4.3 4，95%CI：1.14～16.48(P=0.031)，宮頸癌的風險比為HR=1.89，95%CI：1.15～3.11(P=0.012)。此外，樣本類型的亞組分析結(jié)果(圖3)顯示，血液和組織標本測的HOTAIR表達量與腫瘤患者OS之間有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。但相比較而言，組織標本測的HOTAIR表達量(HR=2.13，95%CI：1.46～3.12，P=0.000)略優(yōu)于血液標本測得表達量(HR=2.01，95%CI：1.02～3.97，P=0.045)。

2.5 發(fā)表偏倚 本研究采用Begg's漏斗圖和Egger偏倚評估指標測試檢驗納入文獻潛在的發(fā)表偏倚。由圖4可知，納入文獻基本對稱，Egger's檢驗P=0.542，不存在發(fā)表偏倚。但由于本研究納入的文獻低于10篇，發(fā)表偏倚的效能降低。

圖4 納入文獻的漏斗圖和egger's圖

3 討 論

近年來，越來越多的lncRNA被證明在腫瘤基因表達，染色體重塑以及代謝過程中起著十分重要的作用，這或許暗示這些分子可能為提高臨床診斷和治療腫瘤提供精確而有價值的信息[21]。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，一些lncRNAs已被證明能夠在患者體液中被檢測到，從而來達到腫瘤的診斷、治療及預后，包括PCA3，HOTAIR，HULC，MALAT1、H19、LINC00152，UCA1等等[22]。其中，PCA3更是因其在前列腺癌診斷上具有比前列腺特異性抗原(PSA)更好的敏感性和特異性，已被美國FDA正式批準用于前列腺癌的診斷[23]。

HOTAIR是目前研究較為熱門且研究相對較為透徹的一個lncRNA。它于2007年首次被霍華德報道，是由位于染色體12q13.13上的HOXC基因簇轉(zhuǎn)錄而來[24]。現(xiàn)有研究表明，HOTAIR的異常表達可以影響多種癌癥的發(fā)生發(fā)展。在乳腺癌中，HOTAIR的高表達與較差的預后相關(guān)。此外，高表達的HOTAIR可以通過誘導PRC2重新靶向結(jié)合和影響H3 K27的甲基化，從而增加癌癥侵襲和遠處轉(zhuǎn)移的能力[25]。在胃癌上，endo等人發(fā)現(xiàn)，HOTAIR在胃癌上呈高表達，且與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移以及預后相關(guān)[26]。

作為婦科常見的三大惡性腫瘤，宮頸癌仍是目前婦科最常見的惡性腫瘤，而卵巢癌則是目前最致命的婦科惡性腫瘤。盡管目前關(guān)于三大腫瘤的治療手段較多，但由于發(fā)現(xiàn)晚，預后差的特點，預后往往較差。因此，尋找一種能夠早期診斷且能夠用于判斷預后的生物標志物是十分重要的。HOTAIR作為在三大腫瘤中研究相對較多的lncRNA，其作為潛在的預后生物標志物可能較大。目前發(fā)表的文獻結(jié)果參差不齊，有一定的差距，有的甚至無明顯的統(tǒng)計學意義，因此本研究采用Meta分析，重點研究HOTAIR與三大腫瘤OS之間的聯(lián)系。最終的Meta結(jié)果發(fā)現(xiàn)HOTAIR的高表達往往提示較差的總體生存率，且在三大腫瘤均具有統(tǒng)計學意義。此外，在樣本類型的亞組分析中，血液和組織標本測的HOTAIR表達量與腫瘤患者OS之間有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。盡管結(jié)果提示組織標本略優(yōu)于血液標本，但考慮操作的可行性，簡便性，通過采集血液標本來預測腫瘤患者的預后，似乎更為簡單可行。

本研究雖然嚴格按照納入標準和排除標準納入研究文獻，并且沒有出現(xiàn)發(fā)表偏倚，但仍然存在一下問題：1)部分HR不能直接從研究中獲取，只能通過生存曲線提取數(shù)據(jù)得到HR；2)不同研究的文獻質(zhì)量存在差異，這可能導致偏倚；3)不同研究的術(shù)后治療可能不同，影響不同的OS；4)本研究僅僅納入了英文文獻，這可能存在發(fā)表偏倚。

綜上所述，在婦科常見惡性腫瘤中，子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌分列第一、第二位[27-28]，lncRNA HOTAIR高表達與腫瘤患者的低OS存在一定的相關(guān)性，有望成為判斷婦科常見惡性腫瘤預后的潛在生物標志物。