MDC1與YAP1在卵巢癌中的表達(dá)及與臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

陳晗，艾比布汗·阿布來孜，熱孜萬古力·熱西提，劉文婷#

新疆醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院）1婦二科，2生殖醫(yī)學(xué)中心，烏魯木齊830054

卵巢癌是臨床常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來，由于人們生活習(xí)慣的改變及社會壓力的增加，卵巢癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，對女性的身體健康及生命安全均造成了嚴(yán)重的影響[1-2]。由于卵巢癌發(fā)病早期沒有特異性的臨床癥狀，多數(shù)患者在確診時已發(fā)展為中晚期，錯過了最佳手術(shù)時機(jī)，致使治療效果較差，卵巢癌患者的5年生存率小于30%，因此應(yīng)該積極尋找有助于卵巢癌早期篩查的特異性生物分子及新的治療靶點以改善患者預(yù)后[3-4]。近年來關(guān)于腫瘤標(biāo)志物檢測輔助診斷惡性腫瘤的研究較多，但是關(guān)于Yes相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 1（Yes1 associated transcriptional regulator，YAP1）、DNA損傷介質(zhì)檢查點1（mediator of DNA damage checkpoint 1，MDC1）在卵巢癌中表達(dá)的研究較少，本研究對卵巢癌患者卵巢組織中YAP1、MDC1的表達(dá)情況進(jìn)行探討，并分析其與卵巢癌患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床診斷與治療提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年6月至2019年6月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院病理科保存的118例卵巢癌組織標(biāo)本為卵巢癌組，選取同期保存的56例卵巢正常組織標(biāo)本為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①具有完整的臨床資料及隨訪資料；②卵巢癌患者經(jīng)術(shù)后病理診斷確診，正常卵巢組織來源于接受手術(shù)治療的生殖系統(tǒng)良性疾病患者；③對本研究知情同意，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他惡性腫瘤；②未接受隨訪；③術(shù)前接受放化療。卵巢癌組患者年齡35～62歲，平均年齡（49.72±7.69）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期39例，Ⅲ～Ⅳ期79例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移73例。對照組研究對象年齡32～65歲，平均年齡（51.29±8.12）歲。兩組研究對象的基線特征比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

采用免疫組化法檢測卵巢癌組織及正常卵巢組織中的YAP1、MDC1表達(dá)水平，兔抗人YAP1多克隆抗體購自英國Abcam公司，兔抗人MDC1多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。將卵巢癌組織與正常卵巢組織應(yīng)用4%甲醛固定，石蠟常規(guī)包埋，應(yīng)用切片機(jī)將標(biāo)本切成厚度為5 μm的切片，進(jìn)行YAP1、MDC1的免疫組化染色，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，以卵巢癌陽性組織切片為陽性對照，磷酸鹽緩沖液為陰性對照。

1.3 陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[5]

YAP1陽性表達(dá)位于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)，MDC1陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，陽性細(xì)胞呈黃色或棕黃色。染色強(qiáng)度評分：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色或褐色為3分。陽性細(xì)胞所占百分比評分：＜5%為0分，≥5%且＜25%為1分，≥25%且＜50%為2分，≥50%且＜75%為3分，≥75%為4分。根據(jù)兩項評分的乘積判斷陽性結(jié)果，≥4分判斷為陽性，＜4分則為陰性。

1.4 觀察指標(biāo)

比較YAP1、MDC1在卵巢癌組織及正常卵巢組織中的表達(dá)情況，并分析其與臨床特征及預(yù)后的關(guān)系，患者術(shù)后以電話隨訪或門診復(fù)查方式進(jìn)行為期1年的隨訪，統(tǒng)計患者預(yù)后。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組織及正常卵巢組織中YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較

卵巢癌組織中YAP1、MDC1的陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 卵巢癌組織及正常卵巢組織中YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 不同臨床特征卵巢癌患者的卵巢癌組織中YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較

分化程度為G1級、FIGO分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中YAP1陽性表達(dá)率分別明顯高于分化程度為G2～3級、FIGO分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=29.804、17.979、11.113，P＜0.01）；分化程度為G1級、FIGO分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中MDC1陽性表達(dá)率分別明顯高于分化程度為G2～3級、FIGO分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=31.222、39.519、10.062，P＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征卵巢癌患者的卵巢癌組織中YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較（ n=118）

2.3 不同預(yù)后患者YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較

根據(jù)患者的預(yù)后不同分為死亡組（n=25）與生存組（n=93），死亡組患者的卵巢癌組織中YAP1、MDC1陽性表達(dá)率均明顯高于生存組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表3）

表3 不同預(yù)后患者YAP 1、MDC 1表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.4 YAP 1、MDC 1在卵巢癌組織中表達(dá)情況的相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析顯示，YAP1、MDC1在卵巢癌組織中表達(dá)無相關(guān)性（r=0.126，P=0.213）。

3 討論

卵巢癌在婦科惡性腫瘤中的發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮體癌，但病死率卻位居第一[6-7]。近年來，隨著手術(shù)方式的不斷進(jìn)步及輔助治療的改進(jìn)，早期卵巢癌患者在外科手術(shù)治療后進(jìn)行放化療輔助治療5年生存率得到明顯提高，但是晚期患者的預(yù)后仍然較差，對于晚期患者治療的關(guān)鍵在于改善生活質(zhì)量，延長生存期[8-10]。因此提高早期卵巢癌的診斷水平，對提高患者生存率至關(guān)重要。目前臨床對于卵巢癌發(fā)生及發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制尚未明確，YAP1是Hippo信號通路中較為關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白，YAP1在細(xì)胞內(nèi)的定位關(guān)鍵在于是否發(fā)生磷酸化，當(dāng)Hippo信號通路被激活后，YAP會發(fā)生磷酸化，此時YAP則會聚集在細(xì)胞質(zhì)中[11-12]。當(dāng)Hippo信號通路失活后會轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，與TEAD相結(jié)合，對于生長相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)揮促進(jìn)作用，比如雙調(diào)蛋白、結(jié)締組織生長因子等，這些都說明Hippo信號通路對YAP進(jìn)行磷酸化負(fù)調(diào)控，調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡和增殖，使YAP1聚集在細(xì)胞質(zhì)[13-15]。目前有相關(guān)研究報道，YAP信號通路作為腫瘤抑制的一個重要信號通路，具有調(diào)節(jié)器官大小和維持細(xì)胞增殖與凋亡的動態(tài)平衡等功能，與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展具有密切關(guān)系[16]。本研究結(jié)果顯示，YAP1在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織，同時與卵巢癌患者的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示YAP1可能與卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，同時死亡組患者的YAP1陽性表達(dá)率高于生存組，進(jìn)一步說明了YAP的高表達(dá)對卵巢癌的進(jìn)展有促進(jìn)作用，分析其原因可能是因為Hippo信號通路失活，導(dǎo)致YAP轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，促進(jìn)了靶基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。最近較多研究顯示，YAP1在腫瘤組織中的表達(dá)增高，尤其是在細(xì)胞核內(nèi)呈高表達(dá)，進(jìn)一步證明YAP1參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[17-18]。

MDC1蛋白是由骨髓細(xì)胞分離而得，其在不同種類腫瘤中發(fā)揮的作用不同，在宮頸癌和食管癌中呈高表達(dá)，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤、增殖、轉(zhuǎn)移，在肺癌和乳腺癌中表達(dá)水平較低，可能發(fā)揮抑癌基因的作用[19]。本研究結(jié)果顯示，MDC1在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織，且與卵巢癌患者臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時在死亡組患者中的陽性表達(dá)率高于生存組，表明MDC1在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。分析其原因可能是因為在DNA損傷后，MDC1激活并磷酸化，能夠參與細(xì)胞周期調(diào)控與DNA損傷修復(fù)，促進(jìn)DNA修復(fù)程序的啟動，MDCA失活或突變都會增加細(xì)胞基因的不穩(wěn)定性，而當(dāng)DNA修復(fù)受到阻礙時則會誘發(fā)癌變[20]。在對YAP1與MDC1的相關(guān)性研究分析中顯示，兩者在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)無相關(guān)性，但是由于本研究樣本較少，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大研究證實。

綜上所述，卵巢癌患者卵巢組織中YAP1、MDC1均呈高表達(dá)，且與患者臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，參與了卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展，可以用于卵巢癌的輔助診斷。