不同產(chǎn)地蘭州百合中多糖的含量測(cè)定＊

韓曉霞，李 潔，邱國(guó)玉，馬 瀟

（1.蘭州食品藥品檢驗(yàn)所，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅省中藏藥檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730070）

蘭州百合為百合科百合屬植物蘭州百合Lilium davidii Duchartre var.unicolor Cotton.的鱗莖[1]，又稱甜百合，是百合科百合屬川百合Lilium davidii的一個(gè)變種，屬多年生草本植物，是我國(guó)四大百合品系中唯一可食用的品系，被譽(yù)為“蔬菜人參”，是一種藥食兼用的品種，具有清熱潤(rùn)肺，止咳，清心安神的功效。蘭州百合中含有多種成分，如含磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、雙磷脂酰甘油、溶血磷脂酰膽堿及磷脂酰醇胺[2]。干品含淀粉6.96%、蔗糖9.78%、還原糖0.65%、蛋白質(zhì)4.39%、果膠4.23%、粗纖維4.10%[3]。從花中分離到β-谷甾醇、豆甾醇和大黃素成分[4]。研究證明，蘭州百合中含有豐富的多糖類成分，藥理研究顯示：蘭州百合水提醇沉物對(duì)小白鼠SO2引咳法具明顯的鎮(zhèn)咳作用；對(duì)小白鼠用酚紅比色法具明顯的祛痰作用；明顯增加戌巴比妥鈉的睡眠時(shí)間及閾下劑量的睡眠率，具明顯的鎮(zhèn)靜作用；明顯延長(zhǎng)小鼠的游泳時(shí)間而具抗疲勞作用；對(duì)異丙腎上腺所致心肌耗氧增加，能延長(zhǎng)缺氧時(shí)間[5]，因此蘭州百合多糖是蘭州百合主要活性成分之一。

蘭州百合主要分布在蘭州、定西、平?jīng)觥足y、臨夏等地，以蘭州市盛產(chǎn)而得名，雖然分布不是很廣，便不同產(chǎn)地的蘭州百合在大小、味道方面仍然存在較大的差異，其作為食品所發(fā)揮的作用遠(yuǎn)大于作為藥品，同時(shí)收載蘭州百合的現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)僅有《甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2009年版）、《甘肅省中藥炮制規(guī)范》（2009 年版）、《地理標(biāo)志產(chǎn)品蘭州百合》（DB62/T412-2014）和《甘肅省地方標(biāo)準(zhǔn)蘭州百合干質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（DB62/411-95），所有的標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其所含活性成分多糖均沒有制定相應(yīng)的質(zhì)量控制方法，因此，作者將蘭州市及周邊6個(gè)主產(chǎn)地的蘭州百合進(jìn)行多糖的含量測(cè)定，旨在為蘭州百合藥材的質(zhì)量控制評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Evolution300紫外-可見分光光度計(jì)，Thermo Fisher Scientific；SCG-4型智能恒溫槽，寧波新芝生物科技股份有限公司；ME204/02型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 材料

無(wú)水乙醇為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為20180309；硫酸為分析純，白銀良友化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為140212；蒽酮為分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為2015年2月07日；D-無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110833-201205。蘭州百合樣品分別產(chǎn)自蘭州市七里河區(qū)西果園鎮(zhèn)、七里河區(qū)黃裕鎮(zhèn)、七里河區(qū)魏嶺鄉(xiāng)、七里河區(qū)阿干鎮(zhèn)、西固區(qū)金溝鄉(xiāng)和榆中縣原子岔鄉(xiāng)青碾村，每個(gè)產(chǎn)區(qū)選品質(zhì)不同的樣品名2批，根據(jù)鱗莖大小依次編號(hào)，較大者為1#，較小者為2#，甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院馬瀟主任中藥師鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取經(jīng)105℃干燥至恒重的D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品31.26mg（以99.5%計(jì)），精密稱定，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含無(wú)水葡萄糖0.311037mg的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2 硫酸蒽酮試液的配制

取蒽酮0.2g，用濃硫酸溶解并稀釋至100mL，臨用時(shí)配制。

2.1.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別精密量取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品和供試品溶液適量，各加水至2.0mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8mL，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。置紫外-可見分光光度計(jì)上繪制400～800nm范圍內(nèi)的光譜圖，葡萄糖對(duì)照品在588nm±2nm有最大吸收，供試品在582nm～586nm有最大吸收，考慮到供試品中存在其他成份的干擾，故選取588nm為最大吸收波長(zhǎng)（如圖1、圖2所示）。

圖1 D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品紫外吸收光譜圖

圖2 供試品紫外吸收光譜圖

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對(duì)照品溶液0.lmL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL，分別置 15mL 具塞刻度試管中，各加水至2.0mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8ml，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法（通則0401)，在588nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度（X，單位：μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為A=0.0044X+0.0173，r=0.998204（如圖3所示），試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)水葡萄糖質(zhì)量在31.10～186.62μg，用0.2%蒽酮-硫酸溶液顯色后的線性關(guān)系良好。

圖3 無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及各點(diǎn)對(duì)應(yīng)對(duì)照品質(zhì)量

2.1.5 供試品溶液的配制

取本品細(xì)粉約0.25g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150mL，置水浴中加熱回流1h，趁熱濾過，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150mL，置沸水浴中加熱回流1h，趁熱濾過，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至200mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1mL，置15mL具塞干燥試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水葡萄糖的重量（mg)，計(jì)算，即得。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液0.5mL,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0mL”起，依法測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果RSD分別為 0.0031%（見表 1）。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批供試品溶液 (青碾村1#樣)1.0mL，于提取后0,1,2,3,4,5,6,8,10,12h內(nèi)測(cè)定，結(jié)果表明，蘭州百合多糖在l2h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD分別為0.71%（見表 2）。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 加樣回收率試驗(yàn)

稱取己知含量的樣品(青碾村1#樣)6份，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入對(duì)照品D-無(wú)水葡萄糖3.11037mg，照2.1.5項(xiàng)下制成供試品溶液，分別顯色，測(cè)定，結(jié)果D-無(wú)水葡萄糖平均回收率為94.32%，RSD為1.05%，見表3。

表3 蘭州百合多糖回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

2.3 樣品中多糖含量的測(cè)定

分別精密量取供試品溶液各1.0mL,分別顯色，測(cè)定，結(jié)果見表4。

表4 12批蘭州百合多糖含量測(cè)定結(jié)果（%）

3 討論

本研究采用蒽酮-硫酸法測(cè)定蘭州百合多糖的含量，顯色后線性良好，該法操作簡(jiǎn)便快速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地蘭州百合中多糖的含量有較大差異，相同產(chǎn)地不同品質(zhì)蘭州百合中多糖的含量也存在差異，提示蘭州百合中多糖的含量與其產(chǎn)地、品質(zhì)等因素密切相關(guān)，建議將多糖的含量作為蘭州百合藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。