胃癌中CK19mRNA 的表達變化及臨床意義

孫永華，王惠，胡博，徐優耀，李晶

中國醫科大學附屬第一醫院鞍山醫院1檢驗科，2消化內科，3普外科，遼寧 鞍山 114011

胃癌是中國常見的消化系統惡性腫瘤之一，具有較高的發病率和病死率，嚴重威脅著患者的健康與生命。短期內的病情持續性進展能夠導致胃癌患者高腫瘤負荷的出現，并增加病死的風險[1-2]。分析與胃癌患者臨床特征相關的評估性指標能夠為胃癌的臨床診療提供參考。細胞因子或腫瘤蛋白表達水平的波動能夠在胃黏膜上皮細胞的異常分裂過程中發揮作用，影響早期胃癌的發生。細胞角蛋白 19（cytokeratin 19，CK19）mRNA能夠通過影響腫瘤細胞的增殖，導致胃黏膜上皮細胞的細胞核中的DNA持續分裂，進而促進胃癌的發生與發展。CK19mRNA還能夠通過影響腫瘤基因的轉錄激活程度，導致細胞周期發生紊亂，干預腫瘤細胞的分化成熟過程，最終促進消化道惡性腫瘤的發生[3]。為了探討CK19mRNA的表達情況與胃癌的關系，從而為胃癌患者臨床特征的臨床評估提供參考，本研究探討了CK19mRNA的表達情況及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2018年10月中國醫科大學附屬第一醫院鞍山醫院收治的胃癌患者。納入標準：①符合胃癌的診斷標準[4]；②患者年齡≤75歲；③經胃鏡取活組織檢查或手術后病理學檢查確診。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②合并免疫系統疾病；③有放化療史；④手術后復發的胃癌患者；⑤合并其他系統嚴重性疾病。根據納入、排除標準，本研究共納入90例胃癌患者作為胃癌組。胃癌組中，男51例，女39例；年齡44～75歲，平均（54.0±8.4）歲；TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期35例，Ⅲ期25例，Ⅳ期8例；分化程度：低分化27例，中分化38例，高分化25例；淋巴結轉移陽性42例；浸潤深度（根據T分期）：T1～2期41例，T3～4期49例；病灶直徑≥3 cm 42例，病灶直徑＜3 cm 48例；病理類型：管狀腺癌80例，其他類型10例。另選取90例健康者為對照組。

1.2 檢測方法

采集受試者的肘部靜脈血3 ml，3000 r/min離心20 min，收集上層液體儲存于低溫冰箱中保持待用，采用北京奧維亞生物公司生產的試劑盒提取總RNA，逆轉錄成cRNA后進行基因擴增。采用Primer 5軟件檢測基因的合成和引物設計，以GADPH為內參，CK19mRNA的上游引物為5'-CAAGGACCAACTACAACC-3'，下游引物為5'-TGCCTCTTCTTTAATTG-3'，經歷45個循環后進行曲線溶解，每個孔設置3個復孔，取平均值。采用實時定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量。IQ5實時熒光定量PCR儀購自美國伯樂公司。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件對數據進行統計分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CK19mRNA 相對表達量的比較

qRT-PCR檢測結果顯示，胃癌組患者外周血中CK19mRNA的相對表達量為（12.167±2.770），明顯高于對照組患者的（1.804±0.448），差異有統計學意義（t=35.036，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達情況

不同年齡、性別、病灶直徑、病理學類型、分化程度、浸潤深度胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同TNM分期、淋巴結轉移情況胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）；其中，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量均明顯高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的胃癌患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征胃癌患者外周血中CK19 mRNA相對表達量的比較（n=90）

3 討論

胃黏膜上皮細胞的異常病變或腫瘤基因的長期激活均能夠提高胃癌的發生風險。臨床長期觀察發現，胃癌患者的總體生存時間較短，中晚期胃癌患者的病死率或致殘率較高[5]。部分研究發現，合并幽門螺桿菌感染的胃癌患者的發病率較高，與臨床特征的關系更明顯[6-7]?，F階段主要通過血清非特異性腫瘤標志物如癌胚抗原、糖類抗原19-9評估胃癌患者的病情，但其評估胃癌患者病情的局限性較為明顯，與胃癌患者臨床分期或淋巴結轉移情況的明確關系尚未明確[8]。本研究的創新性在于分析了CK19mRNA的表達情況與胃癌患者TNM分期、腫瘤細胞浸潤深度、分化程度的關系。

CK19mRNA是細胞角蛋白家族的成員，主要定位于間質細胞、部分胚胎組織細胞或生發上皮細胞，在細胞分離、細胞核基因或上皮細胞凋亡的調控過程中發揮了重要的作用?；A生物學的研究表明，CK19mRNA能夠通過促進腫瘤細胞內蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）信號通路的激活，促進腫瘤細胞早期異常核分離象的出現，進而誘導腫瘤基因的激活和腫瘤細胞的產生[9]。CK19mRNA還能通過影響腫瘤細胞膜上的跨膜蛋白受體，促進細胞生物學特征的改變，誘導腫瘤細胞的浸潤和侵襲。有研究發現，在中晚期或合并明顯惡病質的胃癌患者中，CK19mRNA呈明顯的高表達趨勢[10]，但對于CK19mRNA與胃癌患者病理類型、臨床分期等關系的分析較少。

本研究發現，胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量明顯高于對照組患者，表明CK19mRNA的高表達與胃癌的發生密切相關，高表達的CK19mRNA能夠在腫瘤細胞生物學特征惡化、腫瘤細胞增殖調控異常等方面發揮作用，最終促進胃黏膜早期上皮異常病變的發生。同時CK19mRNA對胃癌發生的具體影響，還在于其能夠影響胃黏膜上皮細胞的腫瘤基因錯配修復的能力，激活腫瘤基因，提高胃黏膜上皮細胞核異常分裂的風險。CK19mRNA還能夠增加胃癌患者腫瘤復發、轉移及擴散的風險[11]。本研究發現，CK19mRNA的表達并不會影響胃癌細胞的浸潤過程，而TNM分期較高或發生淋巴結轉移的胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達水平較高，提示CK19mRNA的表達與胃癌患者臨床特征的進展情況具有一定關聯。CK19mRNA不僅能夠通過促進腫瘤細胞的上皮-間充質轉化過程，促進腫瘤細胞的擴散，提高胃癌的臨床分期，還能夠提高腫瘤細胞與腹腔內淋巴結內皮細胞的黏附能力，促進淋巴結轉移的發生[12-15]。但本研究并未發現不同分化程度胃癌患者外周血中CK19mRNA的表達差異，表明CK19mRNA的表達可能與胃癌的分化程度無關。

綜上所述，胃癌患者外周血中CK19mRNA的相對表達量較高，且其表達與胃癌患者的TNM分期、淋巴結轉移情況均可能有關。相比于癌胚抗原或糖鏈蛋白，CK19mRNA的優勢在于其對于胃癌細胞擴增的標志作用更大，更能反映腫瘤細胞生物學行為的惡化程度。本研究未分析CK19mRNA的表達與胃癌患者生存情況或治療后臨床轉歸的關系，今后仍需深入探討。