遼西地區非綜合征性耳聾患者及其親屬常見耳聾基因檢測結果分析

吳思 邢巍巍

摘要：目的 ?分析遼西地區非綜合征性耳聾患者及其直系親屬耳聾基因突變檢測結果，了解本地區非綜合征性耳聾的常見遺傳基因及其分布特點。方法 ?收集2018年4月～2019年4月就診于錦州醫科大學附屬第一醫院門診和遼西地區聾啞學校及當地殘聯注冊的感音神經性耳聾患者及其直系親屬共178例（患者170例，親屬8例），采集患者及部分耳聾患者直系親屬的外周血樣本，應用遺傳性耳聾基因芯片技術篩查4個常見耳聾基因的13個突變位點情況，并對檢測結果進行統計學分析。結果 ?共178名受檢者中，耳聾檢出率為34.83%，其中非綜合征性耳聾檢出率為33.53%。GJB2突變基因26例，陽性率為14.61%;SLC26A4突變基因33例，陽性率為18.54%;線粒體DNA 12S rRNA突變基因2例，陽性率為1.12%;GJB3突變基因1例，陽性率為0.56%。8例直系親屬進行耳聾基因測序，有5人檢測出病理性耳聾基因突變，包括GJB2、SLC26A4兩個基因的3個位點（235delC、IVS7-2A>G、1299C>T），其中2例為GJB2雜合突變，3例為SLC26A4雜合突變，且4組家庭中父母聽力均無明顯下降。不同性別、遺傳史、各地區檢出陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。不同民族檢出陽性率比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 ?遼西地區非綜合征性耳聾所占比例較高，其中最常見的突變基因為SLC26A4，IVS7-2A>G為其最主要的突變位點，其次為GJB2基因，235delC為其最常見的突變位點。

關鍵詞：非綜合征性耳聾;基因突變;基因芯片

中圖分類號：R764.3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.11.038

文章編號：1006-1959（2020）11-0122-04

Abstract：Objective ?To analyze the detection results of deafness gene mutations in patients with nonsyndromic deafness and their immediate family members in western Liaoning， to understand the common genetic genes of non-syndromic deafness in the region distribution characteristics.Methods ?A total of 178 sensorineural hearing loss patients （170 patients，8 relatives） registered in the outpatient clinic of the first affiliated hospital of Jinzhou Medical University and the deaf and mute school of western Liaoning Province and the local disabled association were collected on April 2018 and April 2019.The peripheral blood samples of the direct relatives of the patients and some of the deafness patients were collected， and 13 mutation sites of 4 common deafness genes were screened by genetic deafness gene chip technology.Results ?Among the 178 subjects， the deafness detection rate was 34.83%， and the non-syndromic deafness detection rate was 33.53%. 26 cases of GJB2 mutant gene， the positive rate was 14.61%; 33 cases of SLC26A4 mutant gene， the positive rate was 18.54%; 2 cases of mitochondrial DNA 12S rRNA mutant gene， the positive rate was 1.12%; 1 case of GJB3 mutant gene， the positive rate was 0.56%. 8 immediate family members performed deafness gene sequencing， and five persons detected pathological deafness gene mutations， including three sites of two genes of GJB2 and SLC26A4 （235delC， IVS7-2A> G， 1299C> T）， of which 2 cases GJB2 heterozygous mutations，3 cases were SLC26A4 heterozygous mutations， and there was no significant decrease in parents' hearing in the 4 groups of families.There was no statistically significant difference in the positive rates of different genders， genetic history， and regions（P>0.05）.Compared with the positive rate of different nationalities， the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion ?The proportion of non-syndromic deafness in western Liaoning is relatively high. The most common mutation gene is SLC26A4， IVS7-2A> G is the most important mutation site， followed by the GJB2 gene， and 235delC is the most common mutation site.

Key words：Non-syndromic deafness;Gene mutation;Gene chip

耳聾（hearing impairment）是常見的致殘因素，可降低患者認知水平及溝通交流能力，世界范圍內兒童的發病率約為1‰[1]。據報道[2]，耳聾在我國是第一大致殘因素，聽力殘疾人數占全部殘疾人總數的27%，約2800萬，每年新生的先天性聽力下降患兒約3.5萬例，加上藥物性耳聾及環境因素造成聽力下降的患者，聽力障礙兒童的增長速度將超過6萬人/年。導致聽力殘疾的病因非常復雜，40%左右與環境因素有關，如感染、長期接觸噪聲、震爆傷或其他不明原因等，而遺傳因素所致的耳聾約占60%[3]。遺傳性耳聾分為綜合征性耳聾（SHI）和非綜合征性耳聾（NSHI）。NSHI是指僅出現耳聾癥狀而不伴有全身其他系統的疾病，多為雙耳對稱性中重度至極重度感音神經性耳聾，約占遺傳性耳聾的70%。流行病學調查顯示[4]，與我國非綜合征性耳聾最為密切相關的基因為GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12S rRNA，但不同地區和不同人群中NSHI患者基因的突變方式、突變頻率和突變位點并不相同[5]。現階段我國關于耳聾致病基因的研究報道不斷深入，耳聾基因及其突變熱點數據已經通過大規模的篩查獲得，這些數據及成果對明確診斷耳聾具有重要的意義。致病基因的篩查不僅有助于了解耳聾患者具有遺傳因素的比例，為分子流行病學研究提供依據，還能了解耳聾的分子病因，確定主要致病基因的類型和了解分布趨勢。基于此，本研究通過對2018年4月～2019年4月遼西地區非綜合征性耳聾患者及其直系親屬耳聾基因突變檢測結果進行分析，以期為遼西地區防聾治聾工作提供一定的參考依據，現報道如下。

1對象與方法

1.1研究對象 ?收集2018年4月～2019年4月就診于錦州醫科大學附屬第一醫院門診和遼西地區聾啞學校及當地殘聯注冊的感音神經性耳聾患者及其直系親屬共178例（患者170例，親屬8例），年齡0～53歲，平均年齡（14.52±7.95）歲;男性96例，女性82例;漢族113例，滿族44例，回族11例，蒙古族8例，哈尼族1例，錫伯族1例;明確存在耳聾家族史患者22例，未明確存在耳聾家族遺傳史患者156例;語前聾患者93例，語后聾患者77例;中度聾9例，中重度聾15例，重度聾107例，極重度聾39例;無明顯聽力下降的患者親屬8例。

1.2納入及排除標準 ?納入標準：①均為遼西地區常住人口;②聽力檢測證實為中度～極重度感音神經性耳聾患者;③發病前有或無氨基糖苷類抗生素使用史;④有或無耳聾家族遺傳史。排除標準： ①曾患有或確診為急、慢性化膿性中耳炎所導致的聽力下降，或有中耳手術史者;②其他疾病史，明確可引起聽力下降（包括顱面部外傷、腦膜炎、迷路感染等）者;③有外耳、中耳畸形，引起傳導性聽力下降者;④有明確的爆震傷，噪音接觸史導致聽力下降者;⑤使用過大劑量的非氨基糖苷類藥物導致聽力下降者;⑥伴有腦癱、智力發育障礙、因為全身其他疾病影響聽力檢查效果者;⑦綜合征性耳聾患者。

1.3方法 ?收集所有研究對象的聽力學檢查及基因檢測結果。

1.3.1聽力學檢查 ?①純音測聽：對>6歲兒童和成人測試聽閾，根據WHO（1997年，0.5、1、2、4 kHz的平均氣導聽閾）標準，聽力損失程度分級：正常聽力：≤25 dBHL;輕度聽力損失：26～40 dBHL;中度聽力損失：41～55 dBHL;中重度聽力損失：56～70 dBHL;重度聽力損失：71～90 dBHL;極重度聽力損失：>90 dBHL[6]。②聲導抗檢查：鼓室圖分為（根據Liden-Jerger分型）：A型（包括As和Ad兩個亞型）、B型和C型。③聽性腦干反應檢測（ABR）：<6歲的兒童使用腦干誘發電位儀，于符合國家標準的電屏蔽隔聲室進行常規檢測。④顳骨CT檢查：對基因檢測顯示SLC26A4基因突變陽性者均進行顳骨CT檢查;前庭導水管擴大的CT診斷標準：前庭導水管或內淋巴管（內淋巴囊）外口與總腳連線的中點直徑>1.5 mm[7]。

1.3.2基因檢測 ?采集受試者5 ml外周靜脈血置于EDTA抗凝真空采血管中編號后保存于4 ℃冰箱中，送至我院分子檢測中心進行檢測。使用基因組DNA提取試劑盒對樣本進行核酸提取、質檢、PCR擴增、上機前PCR及產物純化、毛細管電泳測序、數據分析、出具報告。檢測樣本4個基因的13個常見突變位點GJB2（235delG、155～158delTCTG、176～191dell6bp、235delC及299delAT），SLC26A4（IVS7-2A>G、2168A>G、1229C>T），線粒體DNA 12S rRNA（1555A>G、1494C>T、7445A>G、12201T>C）和GJB3（538C>T）。

1.4統計學方法 ?采用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析。計量資料以（x±s）進行表述，計數資料以[n（%）]進行描述，比較采用？字2檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1耳聾突變基因檢出情況 ?共178例受檢者（患者170例，親屬8例）中，耳聾檢出率為34.83%（62/178），其中非綜合征性耳聾檢出率為33.53%（57/170）。GJB2突變基因26例，陽性率為14.61%;SLC26A4突變基因33例，陽性率為18.54%;線粒體DNA 12S rRNA突變基因2例，陽性率為1.12%;GJB3突變基因1例，陽性率為0.56%，見表1。

2.2非綜合征性耳聾患者及直系親屬聽閾及突變基因測序結果 ?8例直系親屬進行耳聾基因測序，有5人檢測出病理性耳聾基因突變，包括GJB2、SLC26A4兩個基因的3個位點（235delC、IVS7-2A>G、1299C>T）。其中2例為GJB2雜合突變，3例為SLC26A4雜合突變。4組家庭中父母聽力均無明顯下降，見表2。

2.3遼西地區各城市非綜合征性耳聾分布情況 ?遼西地區中葫蘆島市非綜合征性耳聾患者檢出率最高為40.91%。遼西各城市之間非綜合征性耳聾患者的檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表3。

2.4不同性別、民族、遺傳史檢出陽性率比較 ?男性檢出34例（陽性率35.42%，34/96），女性檢出28例（陽性率34.15%，28/82），不同性別檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05）;漢族檢出57例（陽性率50.44%，57/113），少數民族5例（陽性率7.69%， ? ?5/65），不同民族檢出率比較，差異有統計學意義（P<0.05）;具有遺傳病史的患者檢出9例攜帶耳聾基因（陽性率40.91%，9/22），未明確遺傳病史的患者檢出53例（陽性率33.97%，53/156），不同遺傳史檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

3討論

耳聾是最常見的感覺缺陷性疾病之一，可以由遺傳、環境因素或兩者相互作用所導致，其中遺傳因素是耳聾發生最重要的病因。流行病學調查顯示，我國常見的耳聾基因有GJB2、GJB3、SLC26A4和12S rRNA[4]，其中21%的耳聾患者攜帶GJB2基因突變，14%的耳聾患者攜帶SLC26A4基因突變，4.4%的耳聾患者攜帶線粒體DNA 12S rRNA基因突變[8]。非綜合征性耳聾基因的突變形式在不同的國家、民族以及不同地域間存在差異。遼西地區除漢族外，還有滿族、蒙古族等多個少數民族，掌握本地區遺傳性耳聾常見基因的分布特點及比例，可對遼西地區各個城市非綜合征性耳聾的診斷、治療及其阻斷致病基因的傳遞提供有價值的資料。

GJB2基因突變是我國遺傳性耳聾的第1大病因，且GJB2基因具有明顯的種族差異性，東亞人群中以235delC位點最為多見，而在白種人群和阿拉伯人群中則以35delG位點為最常見的突變類型[9]。本研究結果顯示，遼西地區攜帶GJB2基因突變患者26例（14.61%），為本地區檢出率第2高的基因;GJB2總檢出位點頻率由高到低依次為235delC、235delC與299delAT、299delAT、175del16與235delC、175del16，其中235delC位點為本地區GJB2基因的突變熱點，符合東亞人群中GJB2基因的突變熱點，但GJB2并非本地區陽性率最高的基因，表明遼西地區GJB2基因分布可能與其他地域存在差異，但也存在檢測位點受限及樣本量少的可能性。由于GJB2基因相關耳聾患者的螺旋神經節細胞數量正常，如能盡早進行人工耳蝸植入術，可使該類患者獲得較為理想的聽覺效果和語言理解能力，基本能夠融入正常的社會活動。因此，早期明確病因對患者治療和預后具有重要價值。

SLC26A4基因又稱PDS基因，編碼Pendrin蛋白，該基因位點突變可造成Pendrin蛋白功能障礙，導致大前庭導水管綜合征和Pendred綜合征，是我國突變率第2位的基因，其中最常見的位點是IVS7-2A>G。Tsukada K等[10]研究報道，在東亞地區該基因突變檢出率為5.5%～12.6%，法國為40.0%、美國為20.0%，各國之間差異存在差異。國內研究顯示[11]，97.9%的前庭導水管擴大患者攜帶有SLC26A4基因突變，IVS7-2A>G為最常見的突變位點。大前庭導水管綜合征的患兒出生時可能并無明顯的聽力下降，發病或病情加重多與感冒、頭部外傷、潛水、舉重等引起顱內壓升高的因素相關，因此其發病誘因、聽力損失程度、特點、性質和聽力曲線等方面可能表現出明顯的個體差異性，如早期確診，此類患者多可以通過針對性的指導、治療和嚴格的活動限制措施避免聽力損失的進一步加重，降低重度、極重度耳聾的發病率。本研究中33例檢測到攜帶SLC26A4基因突變，陽性率為18.54%，為本地區出現總數最多的基因，其中IVS7-2A>G為其突變熱點（純合子9例，雜合子14例），表明SLC26A4基因突變在遼西地區可能處于高發水平，其中IVS7-2A>G為本地SLC26A4基因的突變熱點，應引起足夠重視，作為本地區NSHI基因篩查的重點目標。

Prezant TR等[12]首次證實使用氨基糖苷類藥物導致聽力下降的患者攜帶線粒體DNA 12S rRNA基因突變，1555A>G、1494C>T為常見的突變位點。本研究中2例患者為均質性突變。帶有線粒體DNA 12S rRNA基因突變的人群有很大風險在使用氨基糖苷類藥物時造不可逆的聽力損失。由于該基因為母系遺傳，應對患者及其母系親屬進行藥物宣教，終生禁止使用氨基糖苷類藥物，降低藥物性耳聾的發生的可能性。GJB3基因為常染色體顯性遺傳，通常引起患者高頻聽力損失。GJB3基因在國內未見相關的大規模篩查報道，本研究中僅有1例患者發現GJB3基因突變（0.56%），提示該基因突變也是遼西地區遺傳性耳聾的病因之一，但整體突變率較低。

本研究對4個耳聾患兒的家庭基因篩查結果顯示，聽力正常的直系親屬中5例檢測到攜帶病理性基因突變，涉及GJB2和SLC26A4基因的3個突變位點，表明先證者的聽力下降可能均與耳聾基因突變相關。如果夫妻雙方攜帶同一基因的同一突變位點或同一個基因的不同突變位點，下一代出現遺傳性耳聾的風險將非常高，同時也說明了在聽力正常的普通人群中進行婚前或孕前耳聾基因檢測是非常必要的。目前，聽力篩查已納入新生兒常規檢查項目，但新生兒聽力篩查還存在一定的局限性，部分NSHI患兒在出生時沒有出現聽力下降的癥狀，無法進行及時的診斷和治療。如果發現耳聾基因雜合突變伴隨聽力下降者，并不排除環境或其他未知因素對聽力造成影響的可能性，建議進一步行基因測序檢查，排除其他罕見位點突變的可能性。

綜上所述，遼西地區非綜合征性耳聾所占比例較高，其中最常見的突變基因為SLC26A4，IVS7-2A>G為其最主要的突變位點，其次為GJB2基因，235delC為其最常見的突變位點。

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收稿日期：2019-12-17;修回日期：2020-04-01

編輯/杜帆