清開靈注射液用細菌內毒素檢查法的可行性

程曉嶺，張旭，郝欣嶺

（神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430）

0 引言

清開靈注射液主要包括膽酸、板藍根以及黃芩苷等八味中藥為主，具有清熱解毒、化痰通絡、醒腦開竅的功能作用，因此在臨床上應用十分廣泛。但是現階段清開靈注射液在2015 年版藥典中依然應用家兔法檢查熱原，但是由于家兔法操作起來十分復雜，要花費較長的檢查時間，且成本較高，靈敏度較低，依照2015 年版藥典四部細菌內毒素檢查方法與熱原家兔檢查方法的基本要求，對此藥物展開對比與研究，結果證明，清開靈注射液可以應用細菌內毒素檢查方，進而取代家兔方法檢查熱原，但是不可忽視藥物對于試驗本身的干擾性[1]。為了進一步探究細菌內速度檢查應用清開靈注射液的可行性效果，現將探究過程與結果進行以下幾點分析。

1 材料與設備

1.1 基本材料。此次試驗研究選取鱟試劑2 種規格，2 個生產批次（產地：湛江安度斯生物有限公司，靈敏度：0.5 Eu/ml，批次1705412 與1808452，靈敏度0.25 Eu/ml，批次1708642，批次1809167）。細菌內毒素檢查用水（產地：湛江安度斯生物有限公司，規格：0.5 mL，批次：1704065），細菌內毒素工作標準物（產地：湛江安度斯生物有限公司，規格10Eu/支，批次：17040821）[2]。熱原應用家兔，生命體征健康，同時通過相關檢測為合格，清開靈注射液（產地：神威藥業集團有限公司，國藥準字：Z13020880，批次：170117223、18044365）。

1.2 設備。此次試驗選用漩渦式混懸器設施，由天津藥典標準儀器廠生產，型號為ZH-2 型；電熱恒溫水浴箱設備，由江蘇金壇市大儀器廠生產，型號為420 型；無熱源移液器設備，由上海求精生化試劑儀器有限公司生產[3]。

2 檢測方法和結果

2.1 明確內毒素限值。根據我國藥典2015 年版4 部1143 標準要求，明確藥品、生物制品的細菌內素質限值為（L），根據L=K/M，公式進行計算，其K 值為人體每千克體質量，在1 小時內最大可承受的內霉素計量，注射劑為K=5 Eu/（kg·h），而M 是人用每千克質量1 小時可最大供試品劑量，清開靈注射液的應用一次最大限度的注射量為40 mL，依照藥典標準人均體質量根據60 kg 加以計算，注射時間為1 小時，那么M 值為0.667 mL/（kg·h），由此可以得出清開靈注射內毒素的限值為7.5 Eu/mL。

2.2 最大范圍稀釋倍數的明確。結合藥典要求標準，MVD=cL/λ，而c 是供試品溶液的濃度，結合藥典，c=1.0 mL/mL，基于上一部分的基礎上，已經結合清開靈注射液的應用說明與藥典要求，得出L=7.5 Eu/mL，因此鱟試劑的靈敏度即0.5 Eu/mL，使MVD=15。

2.3 鱟試劑靈敏度復核試驗分析，依照2015 年片藥典的基本要求，如若選用新批號的鱟試劑或者試驗基本條件出現變化，都會對檢查結果造成影響，因此應該反復進行鱟試劑靈敏度的復核試驗分析。選用10 Eu/支細菌內毒素，應用1.0 mL 細菌內毒素檢測用水加以溶解，使其在漩渦混合器設備上混勻15 分鐘以后，根據制成2λ、1λ、0.5λ 以及0.25λ四個濃度的內毒素標準溶液進行稀釋。通過反復復核，4 個批次的鱟試劑濃度最大為2λ 的試管呈陽性，濃度最小0.25λ的試管呈陰性，且陰性對照管以陰性為主，可見此次試驗結果真實有效，同時4 個批次鱟試劑0λC 計算結果處于2λ-0.25λ 范圍之內，可以將靈敏度為0.5 Eu/mL 作為鱟試劑靈敏度標準。

2.4 干擾試驗分析。供試品溶液根據梯度進行稀釋，最大達到15 倍的5 個稀釋等級溶液，利用標記濃度為0.5 Eu/mL鱟試劑結合我國藥典2015 年版四部1143 鱟試劑靈敏度進行復核試驗分析，確保每個濃度平行做4 支管，除此之外2 支陰性參照管與2 支試劑品陰性對照管，2 個批次供試品結果一致，詳情如表1 所示。

表1 表示靈敏度0.5Eu/mL 批次1705412 與批次1808452 鱟試劑結果分析

分析表1 可知，此次試驗具有一定的可行性，但是供試品在稀釋15 倍過程中，針對1λ 內毒素鱟試劑干擾的影響，使其結果呈陰性，結合藥典的根本要求，這時可以對供試品展開更大倍數的稀釋，達到排除干擾的效果，故此進行更大倍數的稀釋。

通過觀察發現，陰性參照管全部平行管呈陰性，2λ 管呈陽性，0.25 管呈陰性，試驗結果有效，1λ 管呈陽性，可以將干擾排除。由此可見，清開靈注射液針對內毒素檢查有一定的干擾性，但是稀釋30 倍后可以將干擾排除。

2.5 家兔方法檢測。選出6 只健康并經過檢測合格的家兔，根據我國藥典2015 年片一部1142 熱原檢查方法進行檢測，實驗結果表明2 批次供試品熱原都符合要求。

2.6 對比兩種檢測結果。此次試驗2 破此供試品達到30 倍稀釋，結合2015 年版藥典四部1143 細菌內毒素檢查方法，利用0.5 Eu/支鱟試劑進行檢測，結果呈陰性，依照2015 年版藥典四部1142 熱原檢查方法展開檢查，結果符合標準要求，此兩種檢測方法結果相同。

3 討論

清開靈注射液由中藥制成，作為臨床常見藥物，現階段沿用家兔方法進行熱原檢測，不僅浪費精力與時間，還有著較高的成本要求。因此為了優化細菌內毒素檢查方法，采用清開靈注射液加以檢測，應該在實際的試驗中充分考慮藥品自身對于試劑的干擾性[4-5]。

此次研究結果表明，清開靈注射液稀釋倍數之后，檢測結果和熱原檢查方法的結果相一致[6-9]。經過反復復核研究證實，試驗中采用0.25 Eu/mL 鱟試劑檢驗應用供試品30 倍稀釋液時，可以除去藥品根本的干擾性。此研究結果與張軍霞、郭姣梅、周繼春等人研究結果相一致[10]，證明此次研究具有可行性特點。

綜上所述，選用清開靈注射液通過30 倍稀釋以后，排除對細菌內毒素檢查的干擾因素，利用細菌內毒素檢查方法展開細菌內毒素檢查，可以將固有的熱原檢查方法所取代，可見清開靈注射液用細菌內毒素檢查法具有一定的可行性。