KLF6 及相關(guān)抗體P63、P16、CK5/6 在宮頸癌中的表達(dá)及意義

周姝雯，胡成艷，余芳，羅駿，伍仁姣

（黔西南州人民醫(yī)院，貴州 興義 562400）

0 引言

宮頸癌常由感染引起，多見(jiàn)于30 歲以上女性，早期多無(wú)明顯癥狀，可能會(huì)有接觸性出血情況，但患者多不會(huì)注意，發(fā)展到中晚期，可見(jiàn)不規(guī)則陰道流血，陰道還會(huì)出現(xiàn)異常排液情況，液體味多腥臭，發(fā)展到晚期可見(jiàn)尿頻、下肢腫痛，還會(huì)引起周?chē)鞴俳M織病變，危害性極高[1]。對(duì)于疾病的診治，臨床上建議越早越好，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，KLF6 在宮頸癌中的表達(dá)存在差異，為疾病早期診斷提供了方向[2]。同時(shí)，KLF6 有望成為判斷宮頸癌患者預(yù)后效果的重要指標(biāo)，在未來(lái)?yè)碛休^為廣闊的應(yīng)用前景。本研究通過(guò)檢測(cè)KLF6 在宮頸癌中的表達(dá)，探討其臨床意義，為臨床提供參考指標(biāo)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選擇我院2019 年1 月至2019 年12 月存檔病例，經(jīng)再次嚴(yán)格閱片確定宮頸癌前病變50 例，設(shè)為對(duì)照組，宮頸癌50 例，設(shè)為觀察組，所選案例均經(jīng)過(guò)病理學(xué)診斷，確認(rèn)為宮頸癌前病變和宮頸癌，并且未罹患其他疾病，不會(huì)產(chǎn)生無(wú)關(guān)因素干擾，且同意參加本次研究，符合研究標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組年齡41-64 歲，平均（52.86±4.28）歲，觀察組年齡42-64 歲，平均（53.36±3.97）歲。基本信息無(wú)顯著差異（P＞0.05），有可比性。

1.2 方法。提取患者病例石蠟包埋切片，厚4 um，作免疫組織化學(xué)染色，同時(shí)提取對(duì)照組健康女性組織切片，根據(jù)不同抗體不同要求作出陽(yáng)性結(jié)果的判斷。比較宮頸癌及宮頸癌前病變各種免疫標(biāo)記物的表達(dá)，并探討上述標(biāo)記物與宮頸癌生物學(xué)行為的關(guān)系。

操作步驟如下：

（1）石蠟切片脫蠟至水。

（2）3%H2O2室溫孵育10 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

（3）蒸餾水沖洗，PBS 浸泡5 分鐘。

（4）抗原修復(fù)，即將1500-3000 mL 的枸櫞酸鹽抗原修復(fù)液注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于切片架上，放入鍋內(nèi)，使切片位于液面以下，蓋鍋壓閥。當(dāng)壓力鍋開(kāi)始慢慢噴氣時(shí)（約加熱5-6 分鐘后），計(jì)時(shí)3 分鐘，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后，取下氣閥，打開(kāi)鍋蓋，取出切片。

（5）蒸餾水洗后，PBS 洗2 分鐘×3。

（6）滴加一抗，4℃過(guò)夜。

（7）PBS 沖洗，2 分鐘×3 次。

（8）滴加試劑1，室溫或37℃孵育20 分鐘。

（9）PBS 沖洗，2 分鐘×3 次。

（10）滴加試劑2，室溫或37℃孵育20 分鐘。

（11）PBS 沖洗，2 分鐘×3 次。

（12）DAB 顯色劑顯色。

（13）自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.3 分析標(biāo)準(zhǔn)。KLF6 以細(xì)胞漿染色有清晰淡黃色至棕黃色顆粒為陽(yáng)性；陽(yáng)性結(jié)果判定根據(jù)以下兩方面的總分進(jìn)行判斷：①選染色均勻的陽(yáng)性表達(dá)腫瘤區(qū)域，以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比為五級(jí)計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞率＜5%計(jì)0 分；陽(yáng)性細(xì)胞率5%-25%計(jì)1 分；陽(yáng)性細(xì)胞率26%-50%計(jì)2 分；陽(yáng)性細(xì)胞率51%-75%計(jì)3 分；陽(yáng)性細(xì)胞率＞75%計(jì)4 分。②按染色強(qiáng)度來(lái)分：不著色0 分，淺黃色1 分，棕黃色2 分，黃褐色3 分。兩種評(píng)分相加，0-1 分為陰性（-），2-3 分為弱陽(yáng)性（+），4-5分為陽(yáng)性（++），6-7 分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），以上方法均由兩名病理醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立檢測(cè)，取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用SPSS 20.0 軟件分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，用檢驗(yàn)，P＜0.05 代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

根據(jù)KLF6 及相關(guān)抗體P63、P16、CK5/6 表達(dá)情況，對(duì)照組宮頸癌前病變患者，多數(shù)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，少數(shù)呈陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，觀察組宮頸癌少數(shù)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，就陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)情況來(lái)看，觀察組明顯高于對(duì)照組，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

宮頸癌的診斷主要是依靠病史、臨床表征、婦科檢查、宮頸組織活檢等，其中組織活檢是診斷的重要指標(biāo)，但是此類(lèi)診斷模式一般都是應(yīng)用于患者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)明顯異常之后，此時(shí)疾病多數(shù)已經(jīng)發(fā)展到中晚期，治療難度增加[3]。基于此種情況，臨床上一直在致力于早期篩查，宮頸細(xì)胞學(xué)在此方面起到了重要作用，為疾病的早期診治提供了可靠依據(jù)，其中起到重要指導(dǎo)意義的就是KLF6 及其相關(guān)抗體的表達(dá)情況[4]。目前，針對(duì)該基因的研究還在不斷擴(kuò)大，目的在于探討其作用機(jī)制，分析其在癌細(xì)胞中的作用。

表1 KLF6 及相關(guān)抗體P63、P16、CK5/6 表達(dá)情況[n（%）]

KLF6 屬于抑癌基因，在臨床上發(fā)現(xiàn)，腫瘤中普遍存在該基因，現(xiàn)階段所得出的結(jié)論是KLF6 能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，但是尚不明確其作用機(jī)制，主要認(rèn)為有雜合性缺失、點(diǎn)突變、選擇性剪接等原因[5]。其相關(guān)抗體主要有P63、P16、CK5/6，P63 常用于腫瘤的診斷，尤其適用于鱗狀上皮癌，P16 屬于抗癌基因，能夠直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，在腫瘤細(xì)胞中超過(guò)一半P16 存在純合子缺失的情況，CK5/6 是基底細(xì)胞角蛋白，常用于癌癥類(lèi)型的診斷[6]。可以明顯發(fā)現(xiàn)，KLF6 及其相關(guān)抗體在腫瘤中的表達(dá)會(huì)有明顯不同，臨床上可以參考其表達(dá)情況，對(duì)病情加以分析。

根據(jù)KLF6 及相關(guān)抗體P63、P16、CK5/6 表達(dá)情況，對(duì)照組宮頸癌前病變患者，多數(shù)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，少數(shù)呈陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，觀察組宮頸癌少數(shù)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，就陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)情況來(lái)看，觀察組明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。

綜上所述，宮頸癌患者、宮頸癌前病變患者相比，KLF6及相關(guān)抗體P63、P16、CK5/6 表達(dá)情況有明顯差異，臨床上可以根據(jù)此數(shù)據(jù)對(duì)疾病發(fā)展情況進(jìn)行評(píng)估。