甘肅省市售牛羊肉中雌激素殘留狀況分析

李維紅　熊琳　高雅琴　楊曉玲

摘要：以甘肅省蘭州市、靖遠縣、臨夏州、張掖地區牛羊肉為試驗材料，分析了甘肅省市售牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇等4種雌激素殘留狀況。結果表明，80份樣品中（4個地方牛羊肉各10份）所測定的4種雌激素均未檢出，甘肅省市售牛羊肉中無論是天然的雌二醇還是己烯雌酚、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇3種人工合成雌激素均沒有殘留。

關鍵詞：牛羊肉；雌激素；殘留；甘肅省

中圖分類號：R155.5+5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）06-1538-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.06.044

激素類藥物具有提高牛羊的繁殖性能、促進生長，改善牛羊肉品質、促進泌乳羊的產奶量等作用[1]。激素通過食物鏈在人體內積累，可誘發癌變，對生殖與神經等系統帶來影響，還可造成嚴重的環境污染問題[2]，并能使男性生殖器官發生異常與病變以及使女性乳腺癌和子宮內膜發生異位[3]。因此，對牛羊肉的監測也是保證食品安全的措施之一。在己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇中，雌二醇是惟一的天然型雌激素，其余3種均為人工合成雌激素。本研究采用HPLC法對甘肅省市售牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇4種雌激素殘留狀況進行分析，以期了解甘肅省市售牛羊肉中4種雌激素的殘留狀況。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

分別于甘肅省蘭州市、靖遠縣、臨夏州、張掖地區的屠宰場、農貿市場和超市采集牛羊肉樣品各10份，共計80份。

1.2 試劑

甲醇（色譜純）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）（國藥集團化學試劑上海有限公司）；雌二醇（Sigma-Alorich公司）、己烯雌酚（Sigma-Alorich公司）、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標準品（中國藥品生物制品檢定所）。

雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標準儲備液：精密稱取50 mg雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標準品，分別用甲醇定容在50 mL容量瓶中，即得到每個單標的儲備液為1 mg/mL。然后分別吸取2.5 mL雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標準儲備液混合，再將混合儲備液用甲醇分別稀釋至0.4、0.5、1.0 mg/mL，保存于4 ℃備用[4]。

1.3 儀器及條件

Waters e2695高效液相色譜儀，配有2998 PAD檢測器；超聲波清洗器；離心機（10 000 r/min）；色譜柱：C18，ODS（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動相：甲醇∶磷酸氫二鈉=80∶20（V/V）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測波長：280 nm。分別取雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的單個標準品及0.4、0.5、1.0 mg/mL的混合標樣經0.45 μm的有機濾膜過濾，取10 μL依次進行HPLC中，先用標準品的出峰時間定性，再用混合標樣做定量標準工作曲線。

1.4 測定方法

稱取粉碎樣品5.0 g置于20 mL帶蓋離心管中，加甲醇10.0 mL，超聲萃取20 min后4 000 r/min離心10 min。殘渣中再加10.0 mL甲醇，再超聲萃取20 min，4 000 r/min離心10 min，合并上清液于80 ℃水浴蒸干。用20 mL甲醇溶解殘渣，經0.22 μm 1次性有機濾膜過濾，準備上機。

1.5 計算公式

X=2C/mV

式中，X為樣品中某一種雌激素的含量；C為在標準曲線上查出來的某一種雌激素的濃度（μg/mL）；V為進樣體積（μL）；m為樣品質量（g）。

2 結果與分析

由表1可知，雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇濃度在0～100 ng/mL之間，濃度與峰面積之間有較好的線性關系，其相關系數分別為0.999 5、0.999 3、0.999 2和0.999 4。4種雌激素的檢出限分別為1.5、3.0、1.0和2.0 ng/mL。用1.0 mg/mL加標樣品提取液進樣10 μL，進樣6次求出變異系數（表2），分別為0.36%、0.35%、0.12%和0.78%。以羊肉樣品為樣本，添加0.4、0.5、1.0 μg/mL 3個濃度水平的標樣測定回收率，其范圍為85.96%～101.56%，符合標準要求（80%～120%）（表3）。

該方法的線性范圍、精密度和回收率均良好，能夠滿足分析要求。依據上述方法，對甘肅省蘭州市、靖遠縣、臨夏州、張掖地區的屠宰場、農貿市場和超市的80份牛羊肉樣品進行了雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的檢測，從表4可以看出，無論是天然型雌二醇還是人工合成雌激素均未檢出。

3 小結與討論

肉中天然雌激素以雌二醇為代表，其濃度約為10 ng/g[5]。80份樣品中無論是天然型雌二醇還是人工合成其余3種雌激素均未檢出。80份樣品來源于甘肅省的4個牛羊肉產區，每個區又從不同的途徑取樣，所以樣品具有很好的代表性。樣品中未檢出3種人工合成的雌激素，說明沒有添加或經過休藥期已經沒有殘留。至于天然雌激素雌二醇也未檢出，檢測結果與田軍等[6]的研究結果一致，認為雌激素僅作用和存在于靶器官，肌肉中并不含雌激素。但與林奕芝等[7]的研究結果相悖，其檢測的深圳市市售牛羊肉均檢測出了雌二醇。而本研究中可能是市售牛羊肉的雌激素含量較低而未檢出，也有可能是有待于更精密的儀器仔細篩查。

參考文獻：

[1] TYLER C R， JOLBING S， SUMPTER T P. Endocrine disruption in wildlife：A critical review of the evidence[J].Critical Reviews in Toxicology，1998，28：319-361.

[2] RUDEL R. PREDICTING. Health effects of exposure to compounds with estrogenic activity： Methodological issues[J]. Environ Health Perspect，1997，105（s3）：655-663.

[3] 張靜云，呂 劍，何義亮.環境雌激素的生物檢測與應用[J].環境科學與技術，2007，30（2）：100-102.

[4] GB/T 5009.108-2003，畜禽肉中己烯雌酚的測定[S].

[5] 楊惠芬.食品衛生理化檢驗標準手冊[M].北京：中國標準出版社，1998.

[6] 田 軍，夏 夢，朱 晨，等.閹割與不閹割對生長肥育母豬生長速度的影響及血液、肌肉中雌激素含量的測定[J].養豬，2012（5）：47-48.

[7] 林奕芝，司徒潮滿，劉 奮，等.深圳市市售肥牛、羊肉中雌激素殘留狀況分析[J].現代預防醫學，2009，36（6）：1168-1169.