獸藥中非法添加硝基咪唑類藥物的檢查方法

1 適用范圍

1.1 本方法適用于鹽酸多西環素可溶性粉和硫酸新霉素可溶性粉中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢查。

1.2 用于其他獸藥制劑中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑檢查時，需進行空白試驗和檢測限測定。

2 檢查方法

照高效液相色譜法（《中國獸藥典》一部附錄0512）測定。

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent EclipsePlus C18 4.6 mm×250 mm，5 μm 色譜柱或其他等效的色譜柱）；以甲醇為流動相A，以水為流動相B，流速為每分鐘0.8 mL，按表1進行線性梯度洗脫；柱溫25 ℃；二極管陣列檢測器檢測，采集波長范圍為200～400 nm，分辨率為1.2 nm，記錄320 nm 波長處的色譜圖。供試品溶液中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑的色譜峰與相鄰色譜峰的分離度應符合要求。

表1 線性梯度洗脫程序

2.2 測定法 取供試品1.0 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理10 min，冷卻至室溫，濾過；取續濾液5.0 mL，置50 mL 量瓶中，用30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別取羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑對照品各約25 mg 置50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度；取適量，用30%甲醇溶液定量稀釋制成每1 mL中各含約50 μg的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品各20 μL，分別注入液相色譜儀，同時記錄色譜圖和光譜圖。必要時，可調整供試品溶液或對照品溶液的濃度，使兩者峰面積接近。通過與對照品溶液色譜圖保留時間、光譜圖的對比，確定供試品中是否含有羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

3 結果判定

3.1 供試品溶液色譜圖中如出現與相應對照品溶液色譜圖中保留時間一致的色譜峰（差異不大于±5%），且為單一物質峰；在規定的采集波長范圍內，兩者紫外光譜圖匹配，且最大吸收波長一致（差異不大于±2 nm），判定為檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

3.2 供試品溶液色譜圖中峰保留時間與相應對照品峰相同，但峰面積小于檢測限峰面積，判定為未檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。

4 檢測限

本方法中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢測限為1 mg/g。