催乳素與子宮內膜腺癌的相關性

李揚，劉貴朋，楊清

（中國醫科大學附屬盛京醫院婦產科，沈陽 110004）

子宮內膜癌是婦科三大惡性腫瘤之一，其中腺癌為其主要分型。早期子宮內膜癌的5年生存率為75%～95%，但Ⅲ～Ⅳ期患者的預后情況不容樂觀。如果診斷時癌癥已經轉移，尤其是遠處轉移患者［1］，5年生存率大大降低。因此，預防和早期發現能夠進一步減輕疾病負擔。本課題組前期研究［2］發現，卵巢癌組織中催乳素（prolactin，PRL）的表達升高，而PRL與子宮內膜腺癌的關系國內外較少報道。

PRL是一種由垂體產生的激素，也是一種由多種炎癥反應產生的自分泌性細胞因子。它除了具有促進乳汁分泌和性腺發育的作用，還可與PRL受體結合，通過Janus激酶、胞外信號調節激酶、信號轉導及轉錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）激活細胞內信號，發揮其他生物學作用，如免疫、應激、細胞的分裂和增殖等。以往的臨床研究［3］顯示，結腸癌患者血清PRL水平升高。也有研究［4］報道，PRL與一些婦科腫瘤的發生相關，PRL通過激活STAT5、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白和絲裂原活化的胞外信號調節激酶，誘導和促進卵巢癌細胞增殖。本研究旨在通過檢測血清PRL水平和癌組織中PRL的表達情況，探討PRL與子宮內膜腺癌發生、發展的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清標本：選取2016年1月至2017年1月于中國醫科大學附屬盛京醫院第一微創婦科經手術確診的41例子宮內膜腺癌患者作為觀察組，年齡44～72歲，平均（56.5 ±4.2）歲。同期選取38例健康女性志愿者作為對照組，年齡43～75歲，平均（57.5±4.8）歲。排除其他腫瘤等疾病患者。所有研究對象入組前3個月內未使用過激素治療；觀察組患者之前未接受任何治療。手術前3～5 d采集血清樣本。

1.1.2 免疫組化標本：標本取自2015年1月至2017年1月中國醫科大學附屬盛京醫院第一微創婦科收治患者的手術切除組織，其中分泌期正常子宮內膜組織和增生期正常子宮內膜組織取自因輸卵管因素不孕的患者和因子宮脫垂而切除子宮的患者，各5例，子宮內膜不典型增生組織20例，子宮內膜腺癌組織57例。以上標本均經病理診斷證實。罹患其他疾病但具備正常子宮內膜組織患者，年齡32～50歲，平均（43.7±5.7）歲。子宮內膜不典型增生患者，年齡26～57歲，平均（47.5±4.2）歲。子宮內膜腺癌患者，年齡31～73歲，平均（55.7±7.8）歲；病理類型均為子宮內膜腺癌；國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ+Ⅱ期29例，Ⅲ+Ⅳ期28例；組織學分級：高分化（G1）9例，中分化（G2）20例，低分化（G3）28例；浸潤＜1/2肌層37例，浸潤≥1/2肌層20例；無淋巴結轉移37例，有淋巴結轉移20例。

1.2 方法

1.2.1 血清PRL的檢測：使用DIX800型全自動化學發光儀檢測血清PRL水平，檢測方法為化學發光免疫法，儀器和配套試劑由美國BECKMAN COULTER公司提供，按說明進行操作。

1.2.2 免疫組化：采用免疫組化SP法，其中兔抗人PRL多克隆抗體（北京博奧森生物技術公司）濃度為1 ∶400，按SP試劑盒的步驟操作，濃縮型二氨基聯苯胺試劑盒進行顯色，試劑盒均由北京中杉金橋公司提供，通過蘇木素溶液復染，脫水完成后封片。將步驟中一抗替換為PBS作為對照。2位病理科醫生判定病理結果，染色陽性表現為細胞內形成黃色著色。細胞染色強度評分：無色，0分；淺黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。顯色細胞百分比評分：無顯色細胞，0分；顯色細胞比例＜10%，1分；顯色細胞比例10%～＜50%，2分；顯色細胞比例50%～＜75%，3分；顯色細胞比例≥75%，4分。將細胞染色強度、顯色細胞百分比評分之積設定為總積分，總積分≤2分提示陰性（-），總積分≥3分提示陽性，其中總積分3～4分提示弱陽性（+），總積分5～8分提示中度陽性（++），總積分9～12分提示強陽性（+++）。將++～+++定義為PRL高表達。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 觀察組與對照組血清PRL水平的比較

觀察組和對照組血清PRL水平分別為（14.7±10.23）和（7.8±6.05）ng/mL，觀察組明顯高于對照組（P＜ 0.05），但二者均在正常值（3.34～26.72）ng/mL范圍內。

2.2 PRL的表達與子宮內膜病變程度的關系

秩和檢驗結果顯示，正常子宮內膜組織、子宮內膜不典型增生組織和子宮內膜腺癌組織3組比較，PRL表達水平有統計學差異（P＜ 0.05）。PRL高表達率子宮內膜腺癌組織（64.9%，37/57）＞子宮內膜不典型增生組織（25.0%，5/20）＞正常子宮內膜組織（10.0%，1/10）。子宮內膜腺癌組織與正常子宮內膜組織、子宮內膜不典型增生組織比較，PRL高表達率的差異均有統計學意義（分別為P=0.020和P=0.040），但正常子宮內膜組織與子宮內膜不典型增生組織比較，PRL高表達率無統計學差異（P=0.628）。見表1、圖1。

表1 不同子宮內膜病變中PRL表達的情況Tab.1 PRL expression in different endometrial lesions

圖1 不同子宮內膜病變中PRL的表達 SP×200Fig.1 Expression of PRL in different endometrial lesions SP×200

2.3 子宮內膜腺癌中PRL的表達水平與臨床病理參數的關系

晚期（Ⅲ+Ⅳ期）子宮內膜腺癌患者的PRL高表達率（82.1%，23/28）明顯高于早期（Ⅰ+Ⅱ期）患者（48.3%，14/29）（P＜ 0.05）。秩和檢驗結果顯示，G1、G2和G3三組比較，PRL表達水平有統計學差異（P＜0.05）。G3中PRL高表達率明顯高于G1（P=0.001）和G2（P=0.025），但G1與G2比較PRL高表達率無統計學差異（P＞ 0.05）。有淋巴結轉移的子宮內膜腺癌中PRL高表達率明顯高于無淋巴結轉移的子宮內膜腺癌（P＜ 0.05）。PRL的表達與肌層浸潤深度無關（P＞ 0.05）。見表2。

3 討論

PRL由腦垂體分泌，主要作用是刺激乳汁分泌。還有許多組織局部產生PRL，參與調節包括生殖、生長、發育、代謝和免疫調節在內的多種生理活動。PRL局部積累可能促進乳腺癌和結直腸癌等癌癥的發生［3，5］。PRL與PRL受體結合，促進細胞增殖和腫瘤形成。研究［5］報道，給患有乳腺癌的小鼠注射PRL抗血清可以抑制腫瘤或使腫瘤消退，再次注射PRL時乳腺癌又迅速生長。另外，最新研究［6］表明，PRL積累可以通過將p-STAT5轉移到細胞核并與BRCA1形成抑制復合物，抑制乳腺癌細胞p21的腫瘤抑制活性。

本研究結果顯示，雖然觀察組和對照組血清PRL水平均在正常范圍，但是子宮內膜腺癌患者血清PRL水平較健康人明顯增高，與LEVINA等［7］的研究結果一致。但本研究缺乏子宮內膜腺癌患者術后血清PRL水平的隨訪，無法確切證實血清PRL水平在患病后確有升高。雖然已有研究［8］證明，血清PRL的敏感度可能比CA125高，但其特異度和子宮內膜腺癌患者血清水平的有效評價范圍有待考證。

子宮內膜癌患者的發病年齡有降低趨勢［9］，女性生殖系統的生育功能和生理功能對年輕女性尤為重要，而子宮內膜癌主要病理類型以子宮內膜腺癌為主，故子宮內膜腺癌的早期診斷和治療有重要意義。體外研究［7］顯示，PRL可促進正常子宮內膜組織增殖并向惡性轉化。本研究發現，PRL在子宮內膜腺癌組織中的高表達率明顯高于子宮內膜不典型增生組織和正常子宮內膜組織，而子宮內膜不典型增生組織與子宮內膜正常比較PRL高表達率無明顯差異。說明PRL可能在子宮內膜不典型增生組織向腺癌組織的轉化中發揮了重要作用，PRL與腫瘤的發生、發展正相關，或許可以作為子宮內膜腺癌病理診斷的標志物之一。

表2 子宮內膜腺癌中PRL的表達水平與臨床病理參數的關系Tab.2 Relationship between PRL expression and clinicopathological parameters of endometrial adenocarcinoma

癌細胞的分化程度可影響子宮內膜腺癌患者病情進展，細胞分化程度越低，其惡性程度越高，術后接受放化療的概率越大［10］。結合臨床病理資料，發現PRL在G1、G2、G3癌組織中的表達水平有差異，G3中的高表達率顯著高于G1和G2，而G2中PRL高表達率雖高于G1，但差異無統計學意義。由此推測，子宮內膜腺癌惡性程度可能與PRL水平上調具有相關性，與前列腺癌研究［11］報道惡性病灶中PRL表達提高相互印證。本研究還發現，Ⅲ+Ⅳ期子宮內膜腺癌組織中PRL高表達率明顯高于Ⅰ+Ⅱ期子宮內膜腺癌組織，有淋巴結轉移的子宮內膜腺癌中PRL高表達率明顯高于無淋巴結轉移的子宮內膜腺癌，提示PRL表達的增加對子宮內膜腺癌轉移有促進作用。PRL通過與PRL受體結合，刺激下游信號通路發揮作用，提高癌細胞復制和轉移能力［8］，從而促進腫瘤的侵襲和轉移。另有研究［12-13］顯示，PRL受體拮抗劑能夠通過多種信號通路途徑抑制乳腺癌細胞增殖，包括抑制AKT、HER2磷酸化，上調轉化生長因子-β1，活化caspase-3等，抑制STAT5和STAT3活性，進一步反向確認PRL能夠促進腫瘤發展。此外，PRL還可促進血管新生［14］，保證腫瘤細胞的營養供給；提高細胞黏附能力［3，7］，促進腫瘤組織的增大和局部侵襲。既往研究［15］證實子宮內膜癌的轉移與浸潤深度有關，但PRL的表達與肌層浸潤深度無相關性，這可能與本研究的病例不足有關。

關于子宮內膜腺癌與PRL相關性的研究還較少，免疫組化方法存在一定程度局限性，需進一步增大樣本量，并進行基因水平研究，為子宮內膜腺癌發病機制、診斷和治療的研究提供新的方向，實現對子宮內膜腺癌的早期診斷和靶向治療。