高效液相色譜法檢測20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑

劉 鈺，莊占興，劉 軍，崔蕊蕊，朱芹芹，韓增瑞，韓金濤*

(1.山東省農藥科學研究院，山東省化學農藥重點實驗室，山東 濟南 250033;2.濟南綠霸農藥有限公司，山東 濟南 251600)

噁唑酰草胺(Metamifop，結構見圖1)，化學名稱：(2R)-2-[4-[(6-氯-2-苯噁唑基)]苯氧基]-N-(2-氟苯)-N-甲基丙酰胺。噁唑酰草胺(metamifop)是一種新的芳氧苯氧丙酸酯類(APP)除草劑。APP從上世紀70年代開始用于寬葉作物防除窄葉雜草，但噁唑酰草胺是這類除草劑中第一個在水稻上顯示選擇性的品種。噁唑酰草胺有著廣泛的可混性，并有望用于其它類作物和草坪除草，已在全世界各地進行了各種田間試驗，是一個很有發展前途的除草劑品種[1]。

滅草松(Bentazone，結構見圖1)，化學名稱：3-異丙基-(1H)-苯并-2,1,3-噻二嗪-4-酮-2,2-二氧化物。滅草松屬雜環類觸殺型具選擇性的苗后除草劑，用于苗期，莖葉處理。防除冬、春禾谷類作物田中闊葉類雜草。噁唑酰草胺與滅草松兩者進行混配，可以有效防除水稻田禾各類雜草[2-3]。

圖1 噁唑酰草胺和滅草松的結構式

目前國內已有噁唑酰草胺的液相色譜和色譜-質譜法分析相關報道[4-9]，也有對滅草松的液相色譜和液相色譜-質譜法分析報道[10-13]。但噁唑酰草胺和滅草松混配制劑的色譜分析尚未見報道。本文建立了一種同時快速定性定量檢測20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑的高效液相色譜分析方法，該檢測方法靈敏度高，準確可靠，簡便、快速，有較高的實際應用和參考價值。

1 實驗過程

1.1 儀器和試劑

日立Primaide高效液相色譜儀，具有可變波長紫外檢測器；

N2000色譜工作站；

乙腈：LC級；

水：0.22μm濾膜過濾的二次水；

噁唑酰草胺標準品(CAS:256412-89-2)：質量分數≥99.0%；

滅草松標準品(CAS：25057-89-0)：質量分數≥99.0%；

分析樣品：20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑。

1.2 HPLC儀器條件

色譜柱： BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm×5μm)；

檢測波長λ：240nm；

流動相：V(乙腈)∶V(水)=65∶35；

流量：1.0mL/min；

柱溫：室溫；

進樣體積：5μL；

保留時間：滅草松約2.4min；噁唑酰草胺7.6min。

圖見2、圖3為噁唑酰草胺和滅草松典型LC色譜圖。

圖2 噁唑酰草胺和滅草松標準物質LC色譜圖

圖3 20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑LC色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1 配制標準溶液

準確稱取0.01g噁唑酰草胺標樣和0.05 g滅草松標樣，置于同一50mL容量瓶中，用乙腈溶解，并用乙腈準確定容,經超聲波振蕩15min待用。

1.3.2 配制試樣溶液

準確稱取20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑試樣0.3g置于50mL容量瓶中，用乙腈定容備用。

1.3.3 HPLC分析

在上述分析條件下，等儀器狀態穩定基線平穩后，注入數針標樣溶液，等相鄰兩針標樣中目標物峰面積的相對變化控制在1.5%以內后，按照一針標樣、一針試樣、一針試樣、一針標樣的順序依次進行進樣，記錄結果。

1.3.4 計算方法

本實驗以目標物在色譜圖中的保留時間定性，采用外標法依據峰面積大小來定量。將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中目標物的峰面積分別進行平均。試樣中被測組分的質量分數X1(%)，按下述公式計算：

式中：

A1——標樣溶液中，目標物峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中，目標物峰面積的平均值；

M1——目標物標樣的質量，g；

M2——試樣質量，g；

P——標樣中目標物的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 HPLC分析條件的優化

2.1.1 檢測波長λ的確定

對噁唑酰草胺/滅草松標準樣品溶液進行紫外波長(190～400nm)全掃描，得到波長λ與響應值A的光譜圖。根據光譜圖可知，噁唑酰草胺/滅草松在λ=240nm時，有較強吸收峰，且雜質和流動相干擾小，所以確定該分析方法的檢測波長為240nm。

2.1.2 色譜柱和流動相的確定

根據噁唑酰草胺/滅草松的化學結構特點，選用Thermo Hypersil ODS C18不銹鋼柱對試樣進行分離檢測。在上述色譜柱條件下，我們嘗試了常規流動相甲醇、乙腈等按照不同的比例與水進行混配作為流動相。在保證噁唑酰草胺和滅草松既能夠出峰快又能夠有效分離前提下，為節約成本，最終確定V(乙腈)∶V(水)=65∶35作為試驗條件。

2.2 分析方法線性相關性研究

配制噁唑酰草胺濃度分別為53,101,191,249,337mg/L的標準質量溶液，在上述確定好的色譜條件下進行分析測定，將噁唑酰草胺的質量濃度為為橫坐標，將其峰面積作為縱坐標進行作圖，可得到線性回歸方程：y = 4804.3x - 3214.4，相關系數r=0.9992。結果可看出，在上述分析條件下，噁唑酰草胺質量濃度在53～337mg/mL范圍內具有較好的定量線性關系。

配制滅草松濃度分別為290,540,1013,1364,1724mg/L的標準質量溶液，同樣在上述色譜條件下進行測定，將滅草松的質量濃度作為橫坐標，將其峰面積作為縱坐標作圖，得到線性回歸方程：y = 3994.5x + 141678，相關系數r=0.9995。結果可看出，在上述分析條件下，滅草松質量濃度在290-1724mg/L范圍內具有較好的定量線性關系。

2.3 分析方法精密度研究

選用上述優化的色譜條件，為研究其標準偏差和RSD值，我們對20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑進行了5次平行檢測，試驗結果見表1、表2。

表1 噁唑酰草胺精密度測量結果

表2 滅草松精密度測量結果

2.4 分析方法回收率研究

在已知組分含量的20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑試樣溶液中加入一定量的標準物質，選用上述優化的色譜條件，測定加標試樣中被測組分的質量分數，計算添加回收率(見表3、表4)。由表3可看出，噁唑酰草胺的回收率范圍99.0%～100.2%，對5次回收率進行平均計算，得出其平均回收率為99.4%。由表4可知，滅草松的回收率范圍99.1%～101.4%，對5次回收率進行平均計算，得出其平均回收率為99.9%。由此可見，該分析方法同時測定噁唑酰草胺/滅草松的質量分數，具有滿意的回收率。

表3 噁唑酰草胺回收率試驗結果

表4 滅草松回收率試驗結果

3 結論

上述HPLC分析方法能夠同時快速準確測定樣品中噁唑酰草胺和滅草松的質量分數，且具有良好的線性關系r>0.9992，有令人滿意的精密度和回收率，該分析方法可以對實際生產過程中相關產品的質量檢測提供依據，有一定參考價值。