板藍根抗病毒成分提取工藝研究

王林華

摘? 要：本文采用正交試驗法對板藍根抗病毒成分的工藝進行研究，提高其提取率，以便于充分發揮藥效。

關鍵詞：板藍根;靛玉紅;提取工藝

板藍根是十字花科菘藍屬植物菘藍的干燥根，是中國傳統中藥。始載于《神農本草經》，味苦，性寒，具有清熱解毒、涼血利咽的功效[1-2]。在臨床上板藍根常用于病毒性疾病及細菌感染性疾病。隨著對板藍根研究的深入，人們從板藍根中提取分離的成分越來越多，尤其是脂溶性成分，在抗病毒方面具有十分重要的作用[3]。

1 材料

AR2140型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司），1260系列高效液相色譜儀（美國安捷倫）。板藍根均自山東省，經鑒定符合要求。靛玉紅對照品（中國食品藥品鑒定研究院），甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為屈臣氏水。

2方法與結果

2.1靛玉紅分析方法的建立

2.1.1色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18柱（250mm×4.6mm）

檢測波長：288nm

柱溫：25℃

進樣量：20μl

流速：1.0ml/min

流動相：甲醇-0.1%冰醋酸（80：20）

2.1.2 對照品溶液的制備

取靛玉紅對照品約10mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;從中取1ml，置500ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml溶液中含靛玉紅0.08μg）。

2.1.3 供試品溶液的制備

取供試品粉末約0.05g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，濾液另器保存，即得。

2.1.4 線性關系考察

精密吸取對照品溶液0，1.0，2.0，2.5，3.75，5ml，分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按色譜條件進樣，測定峰面積。以對照品峰面積（Y）為縱坐標，對照品濃度（X）為橫坐標，得回歸方程Y=5499X+3.5879，r=0.9996，表明靛玉紅濃度在0～0.08μg/ml范圍內對峰面積呈良好線性關系。

2.1.5 精密度試驗

取供試品溶液，于所建立的色譜條件下進樣6次，記錄對照品峰面積，并計算RSD =1.16%，小于2%，表明供試品含量測定方法的精密度良好。

2.1.6 穩定性試驗

在本試驗條件下，取供試品溶液分別在室溫放置0，2，4，6，10，12h，于所建立的色譜條件下進樣，記錄峰面積并計算RSD=1.50%，表明供試品溶液至少在12h內穩定。

2.1.7 重復性試驗

取同一批樣品共6份，每份約0.5g，精密稱定，按“2.1.3”項下方法制備成供試品溶液，于所建立的色譜條件下進樣，記錄峰面積，并計算RSD=0.80%，小于2%，表明含量測定方法重復性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗

精密吸取已知含量的供試品溶液6份，分別精密加入0.08μg的靛玉紅對照品，依法進行含量測定，按公式計算平均回收率為99.26%，RSD=0.47%，表明此方法可行。

2.2 提取工藝研究

2.2.1溶劑用量、提取次數、提取時間的優選

2.2.1.1藥材吸醇量考察

加醇量是影響提取效率的重要因素之一，加醇量太少會導致提取不完全，過多則會導致溶劑的浪費，提高生產成本。藥材吸醇率的考察意義在于更科學的確定加醇量。

按處方比例稱取藥材，共三份，各100g，加800ml 70%乙醇浸泡，以藥材完全浸泡透芯為指標，每隔30min觀察一次，直至藥材全部浸透，濾出全部未被吸收的乙醇溶液，測量體積，計算吸醇量。結果見表1。

藥材吸醇量結果表明：平均吸醇量為98ml，故確定加醇量為6倍、8倍、10倍。

2.2.1.2乙醇濃度的選擇

根據文獻資料，確定乙醇濃度為70%、75%、80%。

2.2.1.3 溶劑量選擇

處方藥材的平均吸醇量約藥材質量的1倍，加溶劑量太大不但浪費溶劑，又使成本過高，故選擇溶劑量為6倍、8倍、10倍。

2.2.1.4提取次數選擇

按常規方法，選擇提取次數依次為：1次、2次、3次。

2.2.1.5提取時間的選擇

按常規方法，選擇煎煮時間依次為1h、2h、3h。

2.2.2正交試驗

按處方比例稱取藥材，共9份，各100g，以提取物中靛玉紅含量為考察指標，優化乙醇回流提取工藝。

采用L9（34）的正交設計進行試驗，按因素水平表（表2）設計的條件進行回流提取，提取液濾過，濾液合并，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，干燥至恒重，依法測定干膏中靛玉紅的含量，計算提取率。正交試驗表見表3，方差分析表見表4。

結果表明，以靛玉紅的含量為考核指標，影響乙醇提取工藝的因素作用順序為：提取時間>提取次數>醇濃度>加醇量，其中提取時間的影響具有極顯著性（P<0.05），A、B和D因素的影響沒有顯著性，考慮到要用最經濟和最常規的方案，確定提取工藝應為A2B2C2D2，即加8倍于藥材量的濃度為75%的乙醇提取二次，每次2h。

3討論

3.1 前期研究中靛玉紅的最大吸收波長在280nm和530nm，由于采用530nm波長作為檢測波長時，液相圖譜干擾較大，故采用280nm為檢測波長。

3.2 提取工藝中乙醇濃度根據文獻資料[4～5]，并結合實際生產最終確定正交試驗乙醇濃度為70～80%。

參考文獻

[1]? 王建敏，李偉.板藍根顆粒中有效成分的測定及藥理作用研究進展[J].中國醫藥導報，2019，16（18）：49-52.

[2]? 常寶勤，李梅梅，藺華吉，等.板藍根中生物堿靛藍、靛玉紅的提取與分析[J].檢驗監測，2019，22：40-43.

[3]? 黃遠，董福越，李楚源.板藍根中主要化學成分含量測定方法研究進展[J].中國藥業，2020，29（7）：150-156.

[4]? 王璐璐，鄭穩生.板藍根中有效成分提取方法的研究[J].中成藥，2005，27（12）：1387-1390.

[5]? 史曉昱.板藍根提取工藝及質量標準的研究[D].山西：山西醫科大學，2007.