血清THBS2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義

范沖沖,葉圣昌,陳賢真,李雪影,喬建甌

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科,上海200011)

據(jù)《2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)》獲知，在185個(gè)國(guó)家36種癌癥中肺癌作為臨床最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率均居于首位,占癌癥死亡總?cè)藬?shù)的18.4%[1]。作為占據(jù)肺癌病理類型80%的非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[2]，其起病隱匿，無(wú)特異性臨床表現(xiàn),且容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，故多數(shù)患者被確診時(shí)已處于臨床晚期，治療效果及生存率均不樂觀。因此，探索非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找可以作為早期診斷的標(biāo)志物，對(duì)于提高臨床診斷率和患者的生存率至關(guān)重要。血小板反應(yīng)蛋白-2(THBS2)是由基質(zhì)成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞釋放的一種150 kDa鈣結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞骨架組織的組成，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，血管生成和細(xì)胞凋亡等多種細(xì)胞活動(dòng)[3-5]。目前研究發(fā)現(xiàn)，THBS2在多種腫瘤組織和血清中高表達(dá)，并且與腫瘤進(jìn)展和總體存活率密切相關(guān)。由此，本研究通過檢測(cè)血清THBS2水平，來探討其與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，為臨床診斷、治療非小細(xì)胞肺癌及判斷預(yù)后提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料

選取我院 2019年3月-2019年9月收治的69例非小細(xì)胞肺癌患者及50例健康體檢者為研究對(duì)象，所有研究對(duì)象排除有肺部感染、慢性阻塞性肺疾病、哮喘等肺部良性疾病，排除合并其它臟器疾病，合并自身免疫性疾病，有其它惡性腫瘤病史，手術(shù)前均未進(jìn)行放、化療及免疫治療。臨床分期按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟新推出的第八版肺癌 TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，分為Ⅰ期19例，Ⅱ期20例，Ⅲ期9例，Ⅳ期21例。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所用的標(biāo)本均得到患者的知情同意。

1.2 標(biāo)本采集與檢測(cè)方法

非小細(xì)胞肺癌患者于入院第二天清晨空腹采集肘正中靜脈血3-5 ml于肝素抗凝試管內(nèi)，健康對(duì)照組于體檢當(dāng)日采集，采集的血漿標(biāo)本進(jìn)行離心處理，3 000 r/min 離心10 min，取上層血清放于-80℃下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩HBS2的檢測(cè)嚴(yán)格按照THBS2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)廠家:美國(guó) R&D System) 說明書進(jìn)行操作，然后檢測(cè) OD 值，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計(jì)算出樣品中THBS2濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清THBS2水平的比較

ELISA 檢測(cè)結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌患者血清THBS2水平顯著高于健康對(duì)照組[(28.37±8.24) ng/mL vs (18.99±5.30) ng/mL]，且兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.543，P=0.000) ，見圖1。

2.2 非小細(xì)胞肺癌患者血清THBS2水平與臨床病理特征的關(guān)系

血清 THBS2水平與非小細(xì)胞肺癌患者的年齡、性別、吸煙、病理類型及分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)；而與非小細(xì)胞肺癌腫瘤直徑、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05),見表1。

圖1 兩組研對(duì)象血清THBS2的水平比較

表1 非小細(xì)胞肺癌患者血清THBS2水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清THBS2的臨床診斷價(jià)值

通過繪制所得的ROC曲線分析，可知在THBS2 的血清水平為(25 ng/mL) 時(shí)，為最佳截點(diǎn)，曲線下面積(AUC)為0.813(P<0.001，95% CI:0.738-0.888)，敏感度為66.7%和特異度為90.0%，見圖 2。

圖2 血清THBS2在非小細(xì)胞肺癌中的診斷價(jià)值

3 討論

血小板反應(yīng)蛋白2(THBS2)屬于由基質(zhì)成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞分泌的基質(zhì)細(xì)胞鈣結(jié)合糖蛋白家族的一員。其與各種細(xì)胞表面受體、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和蛋白酶相互作用，以參與細(xì)胞基質(zhì)粘附、運(yùn)動(dòng)、趨化性、傷口愈合、血管抑制等[6]。目前，有關(guān)THBS2在多種腫瘤中的表達(dá)及作用的研究結(jié)果尚存在爭(zhēng)議。一方面，THBS2在胃癌中具有抗血管生成，抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用[7]，另一方面，THBS2在胰腺癌[8]、結(jié)直腸癌[9]、膀胱癌[10]、乳腺癌[11]等腫瘤中有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用，與腫瘤進(jìn)展和總體存活率密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，THBS2可通過增強(qiáng)AXL依賴的生態(tài)位成纖維細(xì)胞活化來增強(qiáng)成纖維細(xì)胞的作用，進(jìn)而參與乳腺癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[11]。在肺癌方面，Weng TY等[12]發(fā)現(xiàn)，肺腺癌和鱗癌組織中THBS2 mRNA的表達(dá)量顯著增加，且與臨床結(jié)局顯著相關(guān)，免疫組織化學(xué)顯示THBS2的表達(dá)水平與腫瘤大小和分期具有顯著相關(guān)性，進(jìn)一步研究提示，與THBS2共表達(dá)的COL5A2，MXRA5和VCAN基因可能在肺癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。Liu等[13]發(fā)現(xiàn)THBS2能夠通過誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-13的產(chǎn)生來促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示，THBS2在非小細(xì)胞肺癌患者血清中較健康對(duì)照組高表達(dá)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。預(yù)示著血清THBS2的水平可能成為非小細(xì)胞肺癌潛在的診斷指標(biāo)。通過分析THBS2與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織直徑越大、臨床分期越高、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移，對(duì)應(yīng)受檢患者血清中THBS2水平越高，說明THBS2的高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。這與Weng TY等[12]在微陣列基因表達(dá)和深入的蛋白質(zhì)組學(xué)分析方面的研究的結(jié)果具有相同的趨勢(shì)和意義。近年來，THBS2作為新的腫瘤標(biāo)志物在腫瘤的輔助診斷中發(fā)揮重要作用。Wang X等[14]發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者血漿中THBS2水平顯著升高，且與臨床病理特征具有顯著相關(guān)性，可作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者臨床結(jié)果的潛在生物標(biāo)志物。Zhang J等人[15]研究表明，肝細(xì)胞癌患者血清中THBS2的水平顯著升高，且高水平的血清THBS2與肝細(xì)胞癌患者的微血管侵犯和TNM分期顯著相關(guān),THBS2水平高的肝細(xì)胞癌患者的DFS和總生存期明顯短于THBS2水平低的患者,認(rèn)為THBS2可用作肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的候選血清生物標(biāo)志物。THBS2在多種腫瘤中的表達(dá)水平與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)，這與我們目前的研究結(jié)果相一致。通過分析ROC曲線可知，血清THBS2診斷非小細(xì)胞肺癌的敏感性為66.7%，特異性為90.00%，ROC曲線下面積為0.81。這意味著血清THBS2診斷非小細(xì)胞肺癌的特異性較高，有望成為非小細(xì)胞肺癌篩查和診斷的潛在腫瘤標(biāo)志物，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，THBS2與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，在非小細(xì)胞肺癌患者血清中高表達(dá)，且與臨床病理特征顯著相關(guān)，可作為非小細(xì)胞肺癌潛在的生物標(biāo)志物，有較高的診斷和臨床評(píng)估價(jià)值。但本研究樣本量較小，尚需擴(kuò)大臨床病例數(shù)來進(jìn)一步評(píng)價(jià)THBS2對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷價(jià)值。還可進(jìn)一步設(shè)計(jì)前瞻性研究，探討血清THBS2的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者生存期及預(yù)后的關(guān)系。