烏蘞莓薄層色譜鑒別方法的建立

曲曉明，劉 艷，張 慧，周 銀，羅斐然

（六盤水市食品藥品檢驗檢測所，貴州 六盤水 553001）

烏蘞莓為葡萄科植物烏蘞莓Cayratia japonica(Thunb.)Gagnep.的干燥全草。生于海拔300～2500米的山谷林中或山坡灌叢。[1]收錄于2003版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中。性味苦、酸，寒。歸心、肝、胃經(jīng)；具有清熱利濕，解毒消腫。用于熱毒癰腫，疔瘡，丹毒，咽喉腫痛，蛇蟲咬傷，水火燙傷，風(fēng)濕痹痛，黃疸，瀉痢，白濁。烏蘞莓中所含活性成分為：木犀草素，芹菜素，檸檬酸三乙酯，吲哚-3-甲醛，秦皮乙素，β-谷甾醇，鄰苯二甲酸二乙基己酯，反式咖啡酸乙酯，木犀草素7-O-葡萄糖苷，胡蘿卜苷等。現(xiàn)采用薄層色譜法鑒別烏蘞莓，以β-谷甾醇為對照，方法操作簡便，結(jié)果易于辨別。

1 儀器與材料

1.1 儀器

DHG-9202電熱恒溫干燥箱，SB25-12DTDN超聲波提取器(寧波新芝生物科技股份有限公司)，梅特勒ME104E電子天平。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠，批號：20180902）（青島基億達(dá)硅膠試劑廠批號20181225）

1.2 材料

β-谷甾醇（中國食品藥品檢定研究院，批號110851-201608，含量97.0%），對照品購于中檢院。所用試劑為分析純。烏蘞莓樣品采自貴州各地區(qū)，共7批。六枝特區(qū)大用鎮(zhèn)李寨樣品經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院魏升華教授鑒定為葡萄科植物烏蘞莓Cayratia japonica(Thunb.)Gagnep.的干燥全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

稱取β-谷甾醇對照品適量，置于10 ml量瓶中，加入無水乙醇溶解定容，配制成1 ml含0.5 mg溶液，作為對照液。

2.2 供試品溶液的制備

取7批樣品粉末2 g，加無水乙醇30 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試液。

2.2.1 提取方法的考察：稱取W1樣品粉末(過3號篩)2 g 3份，分別按下述方法處理后作為供試液:①加乙醇30 mL，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試液。②加無水乙醇30 mL，超聲處理40分鐘，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試液。③加無水乙醇30 mL，水浴回流40分鐘，過濾，濾液濃縮至約2 ml，作為供試液。另取β-谷甾醇對照品，加無水乙醇制成1 ml含0.5 mg溶液，作為對照液。取上述供試液及對照液各5 μL，薄層板硅膠G，展開劑三氯甲烷-丙酮（25:1），顯色劑10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。結(jié)果:方法①主斑點不清晰;方法②主斑點清晰，易于辨別;方法③主斑點有拖尾。方法②斑點無拖尾，且清晰，故選擇方法②為供試品溶液的制備方法。

2.3 點樣

用毛細(xì)管吸取供試液和對照液各5μl。

2.3.1 點樣量的考察：取W1供試品按提取方法②制成供試液，取供試液2、3、5、10μL，β-谷甾醇對照品溶液5 μL，薄層板硅膠G，展開劑三氯甲烷-丙酮（25:1），顯色劑10% 硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰，結(jié)果供試液以點樣量5 μL效果最佳。故選5 μL為烏蘞莓薄層色譜鑒別的點樣體積。

2.4 展開

以三氯甲烷-丙酮（25:1）為展開劑，展開，取出，晾干。

2.4.1 展開系統(tǒng)的考察：取W1供試品按提取方法②制成供試品溶液，取供試液和對照液各5 μL，點于薄層板上，分別在下述展開系統(tǒng)中展開:分別以①硅膠G板，環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（9:2:0.2），②硅膠G板，三氯甲烷-丙酮（25：1），③硅膠G板，三氯甲烷-甲醇（20：1）作為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。結(jié)果:系統(tǒng)①分離效果差，斑點不清晰;②分離效果好，主斑點展開，斑點清晰；③主斑點未展開，分離效果差。因此選擇②為烏蘞莓薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)。

2.5 顯色

10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。

2.6 耐用性考察

①濕度的考察：進(jìn)行了高濕度（7 4%）、中等濕度（54%）和低濕度（26%）的考察，結(jié)果均較好。②溫度的考察：進(jìn)行了低溫(4℃)、室溫(25℃)、高溫(40℃)的考察，結(jié)果表明在上述條件下都能較好分離。③不同生產(chǎn)廠家薄層硅膠G板的考察：共試驗兩個廠家的薄層硅膠G板，分別為青島海洋化工有限公司及青島基億達(dá)硅膠試劑廠，結(jié)果未有明顯差異。

2.7 結(jié)果

見圖1。

圖1 烏蘞莓TLC 鑒別圖

2.8 烏蘞莓的薄層色譜鑒別

取供試品粉末2 g，加無水乙醇40 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約2 ml，作為供試品溶液。另取β-谷甾醇對照品，加無水乙醇制成1 ml含0.5 mg溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μl，薄層板硅膠G ，展開劑三氯甲烷-丙酮（25：1），顯色劑10% 硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，呈相同顏色的斑點。

3 討 論

《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版收載的烏蘞莓僅有性狀，顯微鑒別描述。本實驗從提取方法、點樣、展開劑等方面對烏蘞莓進(jìn)行了研究，選出上述薄層鑒別方法，該方法簡便，分離好，斑點清晰，建議納入烏蘞莓藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。