老年急性腦出血并發癲癇患者血清HP，SOD，MDA水平表達及其與認知功能損害的相關性研究

王麗麗，張 寧，趙迎春，潘曉春，汪 霞，左 麗

（1.上海松江區中心醫院神經內科,上海 201609；2.上海交通大學附屬第六人民醫院南院神經外科，上海 201499）

腦出血發病兇險、病情惡化快,致死致殘率高[1]，其并發癥卒中后癲癇發作（post-stroke seizure，PSS）的發病率達到7%左右；65歲以上的老年新發癲癇患者，PSS比例高達30%～49%[2]。癲癇和腦血管疾病存在共同的病理機制[3]。有研究發現PSS患者,其認知損傷會隨著癲癇的發展而加重進展[4]。認知功能障礙是由癲癇因素和非癲癇因素等多種因素相互綜合作用引起的常見并發癥，主要包括神經遞質異常、氧化應激失衡等[5],而神經系統損傷繼發的癲癇與氧化應激有關[6]。急性腦出血血腫周圍腦組織受到刺激產生的炎癥因子可啟動強大的氧化應激反應，進而加重腦組織的損傷。觸珠蛋白（haptoglobin，Hp）是一種非常有效的抗氧化劑，通過與血紅蛋白結合（hemoglobin，Hb）而減弱血漿中Hb的破壞作用,其表達量可在一定程度上提示神經系統病變的損傷程度。而自由基緩沖系統丙二醛（malondialdehyde，MDA）/血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）在氧化應激反應中則具有重要的作用[7]。

本研究選取老年急性腦出血患者，測定其血清HP,SOD和MDA水平，探究其與PSS的關系，并對HP,SOD和MDA的表達和認知損害相關性進行分析，為更深入地認識PSS提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 經上海市松江區中心醫院倫理委員會批準，選擇上海市松江區中心醫院2018年1月～2019年5月神經內科收治住院的383例急性老年腦出血患者為研究對象。收集患者的臨床資料：年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓病史、糖尿病史、腦卒中史等；并記錄體重指數（body mass index，BMI）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）等。根據腦出血是否并發癲癇，分為癲癇發作組（123例）和癲癇未發作組（260例）。入選標準為：參考全國第四屆腦血管病學術會議修訂診斷要點，患者發病后24h內進行頭顱CT檢查，經2名高年資神經內科醫師評定，診斷為急性腦出血；年齡65～75歲。排除標準為：①既往癲癇病史；②行急診手術患者；③繼發性腦出血(腦腫瘤、創傷性腦損傷、腦動靜脈畸形、顱內動脈瘤、腦梗死后出血轉化、腦出血恢復期、腦出血后遺癥；④排除服用抗凝藥物、并發血液系統疾病、慢性肝腎功能不全、惡性腫瘤及嚴重的心血管疾病等病人。⑤無影響神經心理檢查的疾病（比如聽力、視力嚴重障礙、失語等）。無精神病史：如抑郁、焦慮、精神分裂癥等。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 試劑和儀器 體重計、身高尺。羅氏C8000全自動生化分析儀。HP試劑盒購自美國Ortho-Clinical Diagnostics,Inc。SOD和MDA檢測試劑盒購自南京聚力生物醫學工程研究所。嚴格按照試劑盒使用說明書進行操作。

1.3 方法

1.3.1 血清HP,SOD和MDA檢測：采集2組患者的晨起空腹肘靜脈血2ml，并以0.50ml枸櫞酸鈉溶液抗凝，靜置30min，3 000r/min離心10min，取上清液，于-80℃保存。采用ELISA法進行檢測，以Bio-Rad酶標儀檢測標準品及樣本HP數值。采集2組患者的晨起空腹肘靜脈血2ml，靜置30min，3 000r/min離心10min，取上清液，-20℃冰箱保存。采用黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活性，硫代巴比妥酸比色法檢測MDA含量。血脂測定：TC，TG，LDL和HDL采用電化學發光法測定。

1.3.2 BMI測定：測量所有研究對象的身高、體重，BMI（kg/m2）=體重/身高2。

1.3.3 癲癇發作的定義：主要根據國際抗癲癇聯盟的診斷標準：腦出血后癲癇發作指腦出血前無癲癇發作病史，在出現急性腦出血事件后一定時間內由于腦組織受損、并排除腦部其他及代謝性病變等導致的癲癇發作[8]。

1.3.4 認知功能評價：采用蒙特利爾認知評估量表（MoCA）(北京版)[9]，包括執行控制/視空間功能、瞬時和5 min延遲記憶、詞語流暢性測試等共30分，測試結果正常值為＞26分。如受教育年限≤12年則加1分。測試過程均采取統一的指導語，測試工具和測試環境，由經過培訓的2名高年資神經內科醫師操作。

1.4 統計學分析 采用SPSS24.0版軟件對實驗數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗。采用Spearman相關分析對HP,SOD,MDA與MoCA評分進行相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組研究對象的一般資料比較 見表1。與未發作組相比，發作組患者年齡、性別、高血壓、糖尿病、冠心病病史、吸煙、飲酒等基本資料比較，差異均無統計學意義(均P＞0.05)。而腦卒中史差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 兩組患者MoCA評分、BMI,血脂以及血清HP,SOD,MDA水平比較 見表2。與未發作組相比，發作組患者TC,TG,LDL,HDL和BMI等差異均無統計學意義(均P＞0.05)。MoCA評分以及HP,SOD,MDA水平差異均有統計學意義（均P＜0.01）。

表1 兩組研究對象一般資料比較[n(%)]

表2 兩組研究對象MoCA評分、BMI，血脂以及血清HP,SOD,MDA檢測水平比較（±s）

表2 兩組研究對象MoCA評分、BMI，血脂以及血清HP,SOD,MDA檢測水平比較（±s）

項 目 發作組（n=123）未發作組（n=260）t P TG（mmol/L）1.85±0.73 1.81±0.59 0.573 0.567 TC（mmol/L）3.59±1.23 3.42±0.97 1.465 0.144 HDL（mmol/L）1.27±0.15 1.29±0.21 -0.948 0.344 LDL（mmol/L）3.89±1.52 3.63±1.29 1.737 0.083 BMI（kg/m2）24.12±2.52 23.69±2.84 1.433 0.153 SOD(u/ml) 95.23±12.13 100.91±12.95 -4.089 0.000 MDA (nmol/ml) 10.87 ±3.32 8.69±2.48 7.174 0.000 HP(mg/dl) 153.16±27.00 166.06±28.69 -6.741 0.000 MoCA評分（分）22.76 ±2.41 24.38±3.02 -5.214 0.000

2.3 血清中SOD，MDA，HP含量與認知功能損害的相關性分析 Spearman相關分析顯示，MDA與MoCA評分呈顯著負相關（r=-0.145，P=0.004），SOD與MoCA評分呈顯著正相關（t=0.144，P=0.005），HP與MoCA評分呈顯著正相關（r=-0.114，P=0.026）。

3 討論

腦卒中患者癲癇發病率高，有文獻報告PSS隨著年齡的增長而增加[10],而且PSS會加重腦卒中患者病情[11]。而認知功能障礙是老年癲癇患者最常見的并發癥。既往有關PSS與認知功能之間的研究較少，因此，本研究擬評估老年急性腦出血并發癲癇患者血清相關分子水平與氧化應激及認知障礙之間的相關性。反映氧化應激的最常用指標是SOD和MDA，其與癲癇的病理機制密切相關[12]。SOD可清除生物體內自由基，SOD下降破壞了氧化-抗氧化平衡系統，誘導氧化損傷，進而參與癲癇的發作；而MDA是癲癇發作的異常代謝產物同時通過損傷腦神經促進癲癇發作，具有細胞毒性[13-14],其含量間接反映了氧自由基含量和神經細胞損傷程度。HP是α2球蛋白中的一種酸性糖蛋白，與出血性疾病關系密切，主要生理功能是參與游離Hb的代謝，通過與游離Hb結合形成HP-Hb復合物，避免游離Hb的氧化修飾[15]，從而抑制Hb誘導組織氧化損傷,所以Hp具有抗氧化的作用。本研究顯示癲癇發作患者血清SOD，HP的表達下降（P＜0.01），而MDA表達則明顯上升（P＜0.01），提示HP，SOD，MDA可能參與到腦出血并發癲癇的生物電活動中。進一步說明老年急性腦出血并發癲癇發病過程與氧化應激密切相關。

隨年齡增長認知功能下降主要與中樞神經退行性變有關；而腦出血后癲癇發作是一種病理狀態，癲癇發作會加重患者腦部缺氧并延長腦缺氧的時間，進而加重神經元損傷而引起認知障礙。本研究結果顯示癲癇發作組患者認知功能損害重于未發作組（P＜0.01）。而且血清中SOD，MDA，HP水平與認知功能損害有關（P＜0.05），SOD，HP水平越高，患者MoCA評分越高，認知功能損害越輕（P＜0.05）。而MDA含量越高，患者認知功能損害越顯著（P＜0.01）。表明血清SOD，MDA，HP水平可以在一定程度上反映老年急性腦出血并發癲癇患者認知功能損害的嚴重程度，對于評估患者病情及預后具有一定的參考價值。

綜上所述，臨床上可通過檢測血清中SOD，MDA，HP水平來判斷PSS的認知損害的嚴重程度和短期預后情況。可為PSS患者預后評估提供參考依據。但本研究收集患者血標本檢測血清中SOD，MDA，HP均在患者入院次日，此時患者并未發生卒中相關性肺炎等并發癥，不會影響血清SOD，MDA，HP水平與認知損害相關性的最終結果。本研究未進行后期隨訪，并且選擇的患者資料具有單中心性特點，研究結果可能存在一定局限，有待多中心及大樣本的前瞻性研究及基礎實驗對這一問題進行更深入的探索，為揭示HP，SOD，MDA在PSS中的作用提供進一步的理論依據。