不同羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后對(duì)血液和肝胰腺生化指標(biāo)的影響*

敖秋桅 羅永巨 呂 敏 朱佳杰

不同羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后對(duì)血液和肝胰腺生化指標(biāo)的影響*

敖秋桅 羅永巨 呂 敏 朱佳杰①

(廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院 廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南寧 530021)

為探究無(wú)乳鏈球菌()感染后對(duì)羅非魚(yú)的血液和肝胰腺生化指標(biāo)的影響，本研究以吉富羅非魚(yú)()抗病選育系F5代、奧尼羅非魚(yú)()、吉富羅非魚(yú)“百桂”品系為對(duì)象，通過(guò)人工腹腔注射感染無(wú)乳鏈球菌，檢測(cè)感染后不同時(shí)期肝胰腺和血液中的酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)和溶菌酶(LZM)活性的變化。結(jié)果顯示，奧尼羅非魚(yú)、吉富羅非魚(yú)抗病選育系F5代和吉富羅非魚(yú)“百桂”品系的平均死亡率分別為55.4%、60.5%和78.6%，表明奧尼羅非魚(yú)抗感染能力最強(qiáng)；3個(gè)品系感染無(wú)乳鏈球菌后，肝胰腺組織中的ACP、AKP、SOD和T-AOC酶活力均呈先升高后下降的趨勢(shì)，其中，在感染后24 h，奧尼羅非魚(yú)的AKP和CAT酶活力顯著高于吉富羅非魚(yú)抗病選育系F5代和吉富羅非魚(yú)“百桂”品系；而感染后24 h，血清中ACP、AKP、LZM、CAT和T-AOC酶均顯著升高，而SOD酶則下降，其中，奧尼羅非魚(yú)的ACP、AKP、CAT和T-AOC酶活性明顯高于吉富羅非魚(yú)抗病選育系F5代和吉富羅非魚(yú)”百桂”品系。綜合比較6種酶在感染后不同時(shí)期的活性變化及3個(gè)品系的感染存活率，篩選出AKP和CAT作為評(píng)估羅非魚(yú)抗無(wú)乳鏈球菌感染能力強(qiáng)弱的指標(biāo)。

羅非魚(yú)；無(wú)乳鏈球菌；免疫酶

硬骨魚(yú)類(lèi)作為較低等的脊椎動(dòng)物，其免疫系統(tǒng)分為非特異性免疫(Innate)和特異性免疫(Adaptive)兩種(Sasimanas, 2015)。魚(yú)類(lèi)受外界抗原刺激后會(huì)進(jìn)入應(yīng)激狀態(tài)，非特異免疫系統(tǒng)被激活以抵御病原菌感染。免疫應(yīng)答過(guò)程中，產(chǎn)生大量的活性氧自由基(ROS)，刺激機(jī)體增加抗氧化酶的分泌，如過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等來(lái)清除過(guò)量的ROS。而免疫相關(guān)組織受損后導(dǎo)致ROS清除能力下降，過(guò)剩的ROS會(huì)對(duì)機(jī)體造成生物損傷及免疫力下降，繼而表現(xiàn)出發(fā)病癥狀，如發(fā)炎、腫瘤等(Sifa, 2002)。因此，可以通過(guò)檢測(cè)病原菌脅迫后魚(yú)體內(nèi)血液和相關(guān)組織的生化指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)魚(yú)體的健康狀態(tài)。

羅非魚(yú)是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)向全世界推廣養(yǎng)殖的優(yōu)良品種(Zhu, 2017)，也是中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要品種(Zhu, 2015)。近幾年，受羅非魚(yú)養(yǎng)殖規(guī)模的盲目擴(kuò)大和養(yǎng)殖環(huán)境惡化等因素的影響，中國(guó)南方地區(qū)90%的羅非魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)均不同程度暴發(fā)過(guò)無(wú)乳鏈球菌()病，感染死亡率最高可達(dá)90%(Ye, 2011; Chen, 2012)，給養(yǎng)殖從業(yè)者造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，目前，尚未找到有效根治的措施。為從種源上提高羅非魚(yú)抵抗無(wú)乳鏈球菌侵染的能力，開(kāi)展抗無(wú)乳鏈球菌病品種選育已刻不容緩，而篩選出羅非魚(yú)抗病性能評(píng)價(jià)指標(biāo)是開(kāi)展抗病育種的關(guān)鍵。目前，對(duì)羅非魚(yú)感染細(xì)菌性疾病后機(jī)體內(nèi)血清生化指標(biāo)的研究已有相關(guān)報(bào)道，如Chen等(2012)等研究了羅非魚(yú)在海豚鏈球菌菌()和創(chuàng)傷弧菌()脅迫下血清生化指標(biāo)的變化，Benli等(2004)研究了尼羅羅非魚(yú)()感染遲鈍愛(ài)德華菌()后的免疫相關(guān)酶的活性變化，韋現(xiàn)色等(2014)檢測(cè)了吉富羅非魚(yú)()感染無(wú)乳鏈球菌后尿素氮、肌酐含量以及肝胰腺溶菌酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和黃嘌呤氧化酶的活性變化。以上研究?jī)H針對(duì)病原菌脅迫感染后對(duì)羅非魚(yú)機(jī)體內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響，并沒(méi)有開(kāi)展抗病性能評(píng)價(jià)免疫酶指標(biāo)篩選的報(bào)道。

本研究對(duì)抗病力較強(qiáng)的奧尼羅非魚(yú)()、較易發(fā)病的吉富羅非魚(yú)“百桂”品系及經(jīng)5個(gè)世代選育后的吉富羅非魚(yú)抗病品系進(jìn)行人工感染無(wú)乳鏈球菌，比較3個(gè)品系感染后的存活率、肝胰腺組織和血清中的免疫相關(guān)酶的活性變化，旨在篩選出羅非魚(yú)抗無(wú)乳鏈球菌感染能力的評(píng)價(jià)指標(biāo)，為羅非魚(yú)抗病新品種選育提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料為吉富羅非魚(yú)抗病選育系F5代(以下簡(jiǎn)稱(chēng)抗病品系)、奧尼羅非魚(yú)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)奧尼品系)和吉富羅非魚(yú)“百桂”品系(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“百桂”品系)，均來(lái)源于國(guó)家級(jí)廣西南寧羅非魚(yú)良種場(chǎng)。選取健康有活力、規(guī)格統(tǒng)一[平均重為(56.48±0.70) g]的3個(gè)羅非魚(yú)品系各125尾，常規(guī)暫養(yǎng)8~10 d，水溫為30℃~31℃。實(shí)驗(yàn)前，先用雞血平板對(duì)3個(gè)羅非魚(yú)品系(每個(gè)品系3尾魚(yú))進(jìn)行接種分離，檢測(cè)是否攜帶鏈球菌病原。

1.2 菌株來(lái)源與復(fù)蘇

實(shí)驗(yàn)所用的菌株(無(wú)乳鏈球菌HN016)由本院魚(yú)病防治研究室饋贈(zèng)。菌株的復(fù)蘇與培養(yǎng)參考朱佳杰等(2012)的方法，培養(yǎng)的菌液經(jīng)革蘭氏染色無(wú)雜菌后用PBS溶液將菌液稀釋至半數(shù)致死濃度1×107CFU/ml。

1.3 無(wú)乳鏈球菌感染實(shí)驗(yàn)

人工腹腔注射方式感染無(wú)乳鏈球菌，每個(gè)品系注射90尾魚(yú)(30尾魚(yú)為1個(gè)重復(fù)，養(yǎng)殖容器為1 m3水桶)，每尾魚(yú)注射0.2 ml菌液。每個(gè)品系均設(shè)對(duì)照組(30尾)，注射等量PBS溶液。感染后每隔3 h觀察1次實(shí)驗(yàn)魚(yú)的情況，實(shí)時(shí)記錄死魚(yú)數(shù)量，保持水質(zhì)新鮮。

1.4 樣品采集、處理與測(cè)定

無(wú)乳鏈球菌感染后，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別于0 h(感染實(shí)驗(yàn)前)、感染后24 h取3尾魚(yú)進(jìn)行尾靜脈采血，分離血清，保存于–20℃；同時(shí)，采集0 h、感染后5 h和24 h的肝胰腺組織，保存于–80℃。分別測(cè)定血清和肝胰腺組織中SOD、CAT、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、總抗氧化能力(T-AOC)的活性。酶活性檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。各組間差異使用單因素方差分析(One-way ANOVA)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 無(wú)乳鏈球菌脅迫下不同羅非魚(yú)品系的死亡率統(tǒng)計(jì)

3個(gè)羅非魚(yú)品系感染后都出現(xiàn)了典型的無(wú)乳鏈球菌病癥狀，其表現(xiàn)為魚(yú)體失去平衡上下翻滾、打圈圈、鰓充血、眼球渾濁紅腫等，解剖后發(fā)現(xiàn)，肝胰腺、腎、脾明顯腫大出血、腸排空等癥狀。采用黎炯等(2010)的無(wú)乳鏈球菌PCR鑒定方法確診感染了無(wú)乳鏈球菌病。3個(gè)品系感染無(wú)乳鏈球菌后的累積死亡率如圖1所示，感染后24 h開(kāi)始出現(xiàn)死魚(yú)，24~72 h為死亡高峰期，72 h后死亡魚(yú)數(shù)量逐漸趨向平穩(wěn)。抗病品系、“百桂”品系和奧尼品系的平均累積死亡率分別為60.5%、78.6%和55.4% (圖1)。

2.2 3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后肝胰腺組織中免疫相關(guān)酶活性的變化

由圖2A可見(jiàn)，感染前(0 h)，3個(gè)羅非魚(yú)品系肝胰腺組織中ACP活力的大小依次為“百桂”品系>奧尼品系>抗病品系，三者之間差異顯著(<0.05)。感染后5 h，抗病品系和奧尼品系的ACP活力顯著上升，而“百桂”品系的ACP活力顯著下降(<0.05)。感染后24 h，抗病品系和奧尼品系的ACP活力顯著下降，其中奧尼品系的ACP活力顯著低于其他品系(<0.05)。

圖1 3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈菌后的平均累積死亡率

同一時(shí)間點(diǎn)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(<0.05)

Different lowercase letters indicate significant difference at the same time point (<0.05)

由圖2B可見(jiàn)，感染前(0 h)，奧尼品系肝胰腺中AKP活力顯著低于其他2個(gè)品系(<0.05)。感染后5 h，抗病品系和奧尼品系的AKP活力顯著上升(<0.05)，而“百桂”品系與感染前相比差異不顯著(>0.05)。感染后24 h，和奧尼“百桂”品系肝胰腺組織的AKP活力均顯著下降。

由圖2C可見(jiàn)，感染前(0 h) 3個(gè)品系肝胰腺中的CAT活力以?shī)W尼品系的活力最高，各組間比較差異顯著(<0.05)。感染后5 h，3個(gè)品系的CAT活力均顯著下降，各組間差異顯著(<0.05)。感染后24 h，CAT的活力逐漸上升，但仍低于感染前的水平，其中，以?shī)W尼品系的活力最高。

由圖2D可見(jiàn)，感染前(0 h)，抗病品系和奧尼品系肝胰腺中SOD活力顯著低于“百桂”品系(<0.05)。感染后5 h，抗病品系和奧尼品系的SOD活力顯著上升，而“百桂”品系則顯著下降(<0.05)，抗病品系和奧尼品系的SOD活力均高于“百桂”品系。感染后24 h，3個(gè)品系的SOD活力均低于感染前的水平，其中，抗病品系的活力最高。

由圖2E可見(jiàn)，感染前(0 h)，3個(gè)品系肝胰腺組織中T-AOC活力大小依次為抗病品系>“百桂”品系>奧尼品系，三者間差異顯著(<0.05)。感染后5 h，奧尼品系中T-AOC活力顯著上升，“百桂”品系中T-AOC活力顯著下降(<0.05)。感染后24 h，抗病和奧尼品系的T-AOC活力均顯著下降(<0.05)，其中，抗病品系的活力最高。由圖2F可見(jiàn)，感染前(0 h)，3個(gè)品系肝胰腺中LZM的活力大小依次為奧尼品系>抗病品系>“百桂”品系。感染后5 h，抗病選育品系的活力顯著上升(<0.05)，奧尼品系的活力則顯著下降(<0.005)，感染后24 h，抗病品系和奧尼品系均顯著下降，其LZM活力均低于感染前的水平，而“百桂”品系在感染前后均無(wú)顯著變化(>0.05)。

圖2 3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后肝胰腺組織免疫相關(guān)酶活力的變化

不同大寫(xiě)字母表示同一品系在不同時(shí)間點(diǎn)有顯著差異(<0.05)；不同小寫(xiě)字母表示同一時(shí)間點(diǎn)的不同品系有顯著差異(<0.05)。下同

Different capital letters indicate significant differences of the same strain at different time points (<0.05); Different lowercase letters indicate significant differences in different strains at the same time point (<0.05). The same as below

2.3 3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后血清中免疫相關(guān)酶活性的變化

3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后血清中免疫相關(guān)酶活性的變化見(jiàn)圖3。在無(wú)乳鏈球菌感染24 h后，抗病和奧尼品系的ACP和T-AOC活性均顯著上升(<0.05)，而“百桂”品系變化不顯著(>0.05)；AKP、CAT和LZM在3個(gè)品系感染24 h后均顯著上調(diào)(<0.05)，其中，AKP和CAT以?shī)W尼品系的活性最高，LZM則以抗病品系活性最高；SOD在感染24 h后活性呈下降趨勢(shì)，抗病選育品系和奧尼羅非魚(yú)下降最明顯，這2個(gè)品系與“百桂”品系相比差異顯著(<0.05)。

圖3 3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌前后血液中免疫相關(guān)酶活力的變化

對(duì)3個(gè)品系感染無(wú)乳鏈球菌前后肝胰腺組織和血清中6個(gè)免疫相關(guān)酶活性進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，在感染后24 h，AKP和CAT在奧尼品系的表達(dá)量顯著高于抗病品系和奧尼品系(<0.05)，結(jié)合奧尼品系感染無(wú)乳鏈球菌后的存活率最高得出，可以通過(guò)檢測(cè)不同羅非魚(yú)個(gè)體或群體感染無(wú)乳鏈球菌后24 h AKP和CAT的表達(dá)量高低來(lái)判斷個(gè)體或群體抗病力的強(qiáng)弱。

3 討論

魚(yú)類(lèi)屬于較低等的生物，在受到外界環(huán)境脅迫應(yīng)激時(shí)，非特異性免疫系統(tǒng)作為魚(yú)類(lèi)抵抗病原的第一道屏障率先發(fā)揮作用，免疫過(guò)程會(huì)誘發(fā)魚(yú)體免疫器官釋放大量的活性氧自由基(ROS)到血液中，經(jīng)血液循環(huán)后到達(dá)各個(gè)組織，過(guò)量的ROS會(huì)對(duì)機(jī)體各個(gè)組織器官的機(jī)能造成損傷(Ardó, 2010)，從而表現(xiàn)出癥狀。無(wú)乳鏈球菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，是目前中國(guó)羅非魚(yú)養(yǎng)殖的首要致病菌(黎源等, 2017)，感染后的羅非魚(yú)體內(nèi)典型的病變就是肝胰腺組織腫大壞死，而肝胰腺是羅非魚(yú)機(jī)體物質(zhì)代謝的中樞器官和解毒器官 (Chen, 2011; 強(qiáng)俊等, 2012)。血液的生理生化是評(píng)估魚(yú)體的健康狀態(tài)的一個(gè)重要參數(shù)，可作為實(shí)時(shí)反映魚(yú)類(lèi)的生理狀態(tài)變化和機(jī)體抵御抗原的有力指標(biāo)(Chen, 2013; Clauss, 2008)。因此，研究羅非魚(yú)感染無(wú)乳鏈球菌后肝胰腺組織及血液中免疫相關(guān)酶活性的變化，對(duì)研制防治藥物及篩選抗病評(píng)價(jià)指標(biāo)均具有重要意義。

ACP和AKP廣泛分布于動(dòng)物體內(nèi)，是2種參與磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移和代謝的調(diào)控酶。ACP是巨噬細(xì)胞溶菌酶的特征性酶，直接參與吞噬作用，能協(xié)助殺死及吞噬病原體，還能形成水解酶體系消除異物，主要存在于魚(yú)類(lèi)的肝胰腺、脾臟和血液中(Grinde, 1998)。AKP是機(jī)體解毒系統(tǒng)中的重要組成之一，在堿性環(huán)境下能水解磷酸單酯起到解毒的作用，發(fā)揮免疫防御功能(劉石林等, 2016)。高溫脅迫刺參()(劉石林等, 2016)和亞硝酸鹽脅迫草魚(yú)()(葉俊等, 2016)均顯著影響到ACP和AKP酶活力的變化。馮寧寧等(2014)研究發(fā)現(xiàn)，ACP和AKP可作為評(píng)價(jià)脊尾白蝦()抗WSSV能力的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，在感染前抗病品系和奧尼品系肝胰腺組織的ACP和AKP酶活力均低于“百桂”品系，而感染后抗病和奧尼品系均呈先上升后下降的趨勢(shì)，這可能是感染后體內(nèi)病原菌的增殖使得肝胰腺組織通過(guò)去磷酸化應(yīng)激反應(yīng)來(lái)適應(yīng)病原菌的侵染有關(guān)，而“百桂”品系由于抵抗感染能力較弱，則處于下降趨勢(shì)。此外，3個(gè)品系感染后24 h的血清中AKP活力均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，這是由于肝胰腺及其他免疫器官組織因病原菌入侵釋放了大量的活性氧自由基(ROS)，這些ROS通過(guò)新陳代謝進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)中，從而導(dǎo)致血清中的AKP酶活力在處于上升狀態(tài)，其中，奧尼羅非魚(yú)感染后，肝胰腺和血清中的AKP酶活性均顯著高于其他2個(gè)品系。由此暗示，通過(guò)檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌感染后AKP酶活性高低，可作為評(píng)估羅非魚(yú)抗感染能力強(qiáng)弱的一個(gè)指標(biāo)。

SOD是機(jī)體抗氧化的關(guān)鍵酶之一(羅勝玉等, 2017)，在清除機(jī)體活性氧自由基、輔助吞噬細(xì)胞增強(qiáng)殺菌功能及提高機(jī)體的免疫功能等方面起著重要作用，可作為反映機(jī)體自由基代謝和氧化損傷的重要依據(jù)，為判斷魚(yú)體的健康水平及免疫能力提供參考(徐增輝等, 2008; Zenteno-Savin, 2006)。唐保軍等(2017)研究發(fā)現(xiàn)，高鹽度脅迫黃邊糙鳥(niǎo)蛤()后，SOD活性呈先升高后下降的趨勢(shì)。本研究發(fā)現(xiàn)，感染后5 h，抗病品系和奧尼品系肝胰腺的SOD活力顯著上升，這說(shuō)明由于病原菌的侵入引起的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)很可能引起魚(yú)體內(nèi)ROS積聚，從而引發(fā)肝胰腺組織合成SOD酶的能力增強(qiáng)，減輕ROS對(duì)機(jī)體損傷。而感染后24 h，肝胰腺組織和血清中SOD活力均明顯下降，說(shuō)明病原菌已引發(fā)相關(guān)組織損傷，導(dǎo)致機(jī)體新陳代謝和能量代謝合成各種酶的能力下降。

CAT作為機(jī)體重要的抗氧化功能酶，能夠催化過(guò)氧化氫分解，補(bǔ)償機(jī)體清除自由基的能力。T-AOC能反映機(jī)體抗自由基的能力(Elvitigala, 2013)。趙靜等(2015)研究發(fā)現(xiàn)，齊口裂腹魚(yú)()感染嗜水氣單胞菌()后，血清中的CAT和T-AOC呈現(xiàn)短暫上升后再下降的趨勢(shì)。本研究發(fā)現(xiàn)，3個(gè)羅非魚(yú)品系感染后，血清中CAT和T-AOC活性明顯升高，表明病原菌脅迫魚(yú)后激活了機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)，通過(guò)提高相關(guān)酶的活性來(lái)清除機(jī)體產(chǎn)生的ROS，其中，奧尼品系的活性顯著高于其他2個(gè)品系。而感染后在肝胰腺組織和血清中CAT的活性以?shī)W尼品系最高，“百桂”品系最低。綜合比較CAT在3個(gè)品系的肝胰腺和血清中的變化，再結(jié)合它們的感染存活率，可將CAT作為評(píng)價(jià)羅非魚(yú)抗無(wú)乳鏈球菌感染能力強(qiáng)弱的一個(gè)生化指標(biāo)。

LZM作為魚(yú)類(lèi)的非特異性免疫物質(zhì)之一，主要在肝胰腺內(nèi)合成通過(guò)裂解外源性病原菌的細(xì)胞壁、糖苷鍵或酰基葡萄糖鍵來(lái)達(dá)到清除病原菌的目的，尤其對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有良好的殺菌作用，本研究所用無(wú)乳鏈球菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌(Fujimoto, 2001)。本研究發(fā)現(xiàn)，抗病品系的肝胰腺組織在感染無(wú)乳鏈球菌后5~24 h，肝胰腺體組織的LZM活力呈先升高后降低的趨勢(shì)，這與溶藻弧菌()感染三疣梭子蟹() (謝建軍等, 2011)和鰻弧菌()感染中國(guó)明對(duì)蝦()(Yin, 2014)的結(jié)果相近，說(shuō)明無(wú)乳鏈球菌進(jìn)入羅非魚(yú)體內(nèi)后，機(jī)體提高了肝胰腺LZM的合成量并釋放到血清中。而LZM活力的提高，可增強(qiáng)LZM清除無(wú)乳鏈球菌的能力，提高機(jī)體的免疫抵抗力。而“百桂”品系的LZM活力在感染前后變化不明顯，這可能是該品系對(duì)無(wú)乳鏈球菌刺激在LZM的分泌上反應(yīng)不敏感，導(dǎo)致LZM活力的變化不大。

本研究分析了3個(gè)羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后肝胰腺組織和血清中SOD、CAT、ACP、AKP、LZM和T-AOC酶活性的變化，結(jié)合3個(gè)品系感染后的存活率進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，篩選出AKP和CAT可作為評(píng)價(jià)羅非魚(yú)抗無(wú)乳鏈球菌病能力的生化指標(biāo)。研究結(jié)果可為羅非魚(yú)抗無(wú)乳鏈球菌新品種選育提供參考依據(jù)。

Ardó L, Jeney Z, Adams A,. Immune responses of resistant and sensitive common carp families following experimental challenge with. Fish and Shellfish Immunology, 2010, 29: 111–116

Benli ACK, Yildiz HY. Blood parameters in Nile tilapia (L.) spontaneously infected with. Aquaculture Research, 2004, 35, 1388– 1390

Chen C, Yang B, Zeng Z,. Genetic dissection of blood lipid traits by integrating genome-wide association study and gene expression profiling in a porcine model. BMC Genomics, 2013, 14: 848

Chen D, Wang K, Geng Y,. Pathological changes in cultured channel catfishspontaneously infected with. Diseases of Aquatic Organisms, 2011, 95(3): 203–208

Chen M, Li LP, Wang R,. PCR detection and PFGE genotype analyses of streptococcal clinical isolates from tilapia in China. Veterinary Microbiology, 2012, 159: 526–530

Clauss TM, Dove ADM, Arnold JE. Hematologic disorders of fish. Veterinary Clinics of North America Exotic Animal Practice, 2008, 11(3): 445–462

Elvitigala DAS, Premachandra HKA, Whang I,Marine teleost ortholog of catalase from rock bream (): Molecular perspectives from genomic organization to enzymatic behavior with respect to its potent antioxidant properties. Fish and Shellfish Immunology, 2013, 35(4): 1086–1096

Feng NN, Sun YM, Wen R,Analysis on the activity of immune related enzymes in survivedfrom WSSV infection. Marine Sciences, 2014, 38(3): 75–79 [馮寧寧, 孫玉苗, 溫榮, 等. 脊尾白蝦白斑綜合征病毒耐受群體重要免疫相關(guān)酶的活性分析. 海洋科學(xué), 2014, 38(3): 75–79]

Fujimoto S, Toshimori-Tsuda I, Kishimoto K,Protein purification cDNA cloning and gene expression of lysozyme from eri-silkworm,. Comparative Biochemistry and Physiology Part B Biochemistry and Molecular Biology, 2001, 128(4): 709–718

Grinde B, Jolles J, Jolles P. Purification and characteristic of two lysozymes from rainbow trout (). European Journal of Biochemistry, 1998, 173(2): 269–273

Li J, Ye X, Lu MX,Rapid identification ofandwith duplex PCR assay. Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences), 2010, 36(4): 449–452 [黎炯, 葉星, 盧邁新, 等. 雙重PCR快速鑒別無(wú)乳鏈球菌和海豚鏈球菌. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2010, 36(4): 449–452]

Liu SL, Ru XS, Xu QZ,Effects of high-temperature stress on several immune enzyme activities ofthermotolerant and normal species. Journal of Fishery Sciences of China, 2016, 23(2): 344–351 [劉石林, 茹小尚, 徐勤增, 等. 高溫脅迫對(duì)刺參耐高溫群體和普通群體主要免疫酶活力的影響. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 2016, 23(2): 344–351]

Li Y, Wang B, Wang ZW,Transmission routes ofand the strategy of immune evasion in tilapia. Guangdong Agricultural Sciences, 2017, 44(7): 132–140 [黎源, 王蓓, 汪志文, 等. 羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌傳播途徑與逃避宿主免疫防御策略. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 44(7): 132–140]

Luo SY, Xu DD, Lou B,Effects of low temperature stress on activities of antioxidant enzymes, Na+/K+-ATP enzyme and Hsp70 content of.Marine Science Bulletin, 2017, 36(2): 189–194 [羅勝玉, 徐冬冬, 樓寶, 等. 低溫脅迫對(duì)黃姑魚(yú)()抗氧化酶、Na+/K+-ATP酶及Hsp70蛋白含量的影響. 海洋通報(bào), 2017, 36(2): 189–194]

Qiang J, Yang H, Wang H,. Studies on blood biochemical indices and expression of hepatic HSP70 mRNA of different tilapia strains artificially challenged with. Journal of Fisheries of China, 2012, 36(6): 958–968 [強(qiáng)俊, 楊弘, 王輝, 等. 海豚鏈球菌感染對(duì)不同品系羅非魚(yú)血液生化指標(biāo)和肝臟HSP70 mRNA表達(dá)的影響. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2012, 36(6): 958–968]

Sasimanas U, Nutthida P, Napat S,Molecular characterization of Galectin-8 from Nile tilapia (Linn.) and its response to bacterial infection. Molecular Immunology, 2015, 68(2): 585–596

Sifa L, Chenhong L, Dey M,Cold tolerance of three strains of Nile tilapia (), in China. Aquaculture, 2002, 213(1): 123–129

Tang BJ, Zou X, Yin F. Effects of acute hyperosmotic stress on metabolic rates and immune-related enzymatic activities in clam (). Progress in Fishery Sciences, 2017, 38(2): 143–150 [唐保軍, 鄒雄, 尹飛. 高鹽脅迫對(duì)黃邊糙鳥(niǎo)蛤()呼吸排泄和免疫酶活性的影響. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2017, 38(2): 143–150]

Wei XS, Hu TJ, Yang HZ,.Effects of streptococcus stress on biochemical indices and immune function in GIFT strain of Nile tilapia.Chinese Journal of Fisheries, 2014, 27(4): 29–34 [韋現(xiàn)色, 胡庭俊, 楊慧贊, 等. 鏈球菌脅迫對(duì)羅非魚(yú)生化指標(biāo)及免疫功能的影響. 水產(chǎn)學(xué)雜志, 2014, 27(4): 29–34]

Xie JJ, Xu WJ, Shi H,. Evaluation of hemato- immunological parameters in the swimming crabinfected with low dose.Journal of Fisheries of China, 2011, 35(9): 1392–1398 [謝建軍, 許文軍, 施慧, 等. 溶藻弧菌誘導(dǎo)對(duì)3疣梭子蟹血淋巴非特異性免疫水平的影響. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2011, 35(9): 1392–1398]

Xu ZH, Chen HZ, Chen M,. Effect ofvaccine on immune response of tilapia.Journal of Dalian Ocean University, 2008, 23(6): 413–418 [徐增輝, 陳漢忠, 陳明, 等. 海豚鏈球菌疫苗對(duì)羅非魚(yú)免疫功能的影響. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 23(6): 413–418]

Ye J, Xiao C, Yin XY,Effect of nitrite on the non-specific immune responses of. Freshwater Fisheries, 2013, 43(4): 40–44 [葉俊, 肖琛, 尹曉燕, 等. 亞硝態(tài)氮脅迫對(duì)草魚(yú)非特異性免疫性能的影響. 淡水漁業(yè), 2013, 43(4): 40–44]

Ye X, Li J, Lu MX,Identification and molecular typing ofisolated from pond-cultured tilapia in China. Fisheries Science, 2011, 77(4): 623–632

Yin XL, Li ZJ, Yang K,Effect of guava leaves on growth and the non-specific immune response of. Fish and Shellfish Immunology, 2014, 40(1): 190–196.

Zenteno-Savin T, Saldierna R, Ahuejote-Sandoval M. Superoxide radical production in response to environmental hypoxia in cultured shrimp. Comparative Biochemistry and Physiology Part C Toxicology and Pharmacology, 2006, 142(3): 301–308

Zhao J, Wang L. Changes in serum indices ofchallenged with. Fisheries Science,2015, 34(3): 178–181 [趙靜, 王利. 齊口裂腹魚(yú)感染嗜水氣單胞菌后血清指標(biāo)的變化. 水產(chǎn)科學(xué), 2015, 34(3): 178–181]

Zhu JJ, Huang DL, Fu QProteomic analysis of genetic improvement of farmed tilapia (GIFT) liver. Current Proteomics, 2015, 12(2): 137–142

Zhu JJ, Li LP, Tang ZY,Family establishment and disease resistance of different families of GIFT Nile tilapia. South China Fisheries Science, 2012, 8(6): 22–27 [朱佳杰, 李莉萍, 唐瞻楊, 等. 吉富羅非魚(yú)家系構(gòu)建及抗病力檢測(cè). 南方水產(chǎn)科學(xué), 2012, 8(6): 22–27]

Effects ofInfection on Blood and Hepatopancreatic Tissue Biochemical Indices in Different Species of Tilapia

AO Qiuwei, LUO Yongju, Lü Min, ZHU Jiajie①

(Guangxi Key Laboratory of Aquatic Genetic Breeding and Healthy Aquaculture, Guangxi Academy of Fishery Sciences, Nanning 530021)

Nonspecific immunity plays a vital role in pathogen infection in fish. The bacteriumis an important pathogen in tilapia cultivation, but its effects on tilapia blood and hepatopancreatic biochemical indices are unclear. We injected three strains of Nile tilapia ()?a disease-resistant genetically improved farmed tilapia (GIFT) strain,a GIFT Baigui strain, and hybrid tilapia ()?with, then monitored superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), acid phosphatase (ACP), phosphatase (AKP), lysozyme (LZM), and total antioxidant capacity (T-AOC) enzyme activities in blood and hepatopancreatic tissues. Mortality rates in the hybrid tilapia, GIFT disease-resistant strain, and GIFT Baigui strain were 55.4%, 60.5%, and 78.6%, respectively. Post-infection, enzyme activities of ACP, AKP, SOD, and T-AOC in hepatopancreatic tissues of all strains changed, first increasing then decreasing, and AKP and CAT activities after 24 h of infection were significantly higher in the hybrid tilapia than in the two GIFT strains. ACP, AKP, LZM, CAT and T-AOC enzyme activities in blood increased after infection, but SOD activity decreased; ACP, AKP, CAT and T-AOC activities in the hybrid strain were significantly higher than in the two GIFT strains. Using activity changes of the six enzymes and infection mortality rates, we identified AKP and CAT as potential indicators of streptococcalresistance in strains of tilapia.

Tilapia;; Immunity enzymes

ZHU Jiajie, E-mail: 724790058@qq.com

S817.4

A

2095-9869(2020)04-0167-07

10.19663/j.issn2095-9869.20190610001

http://www.yykxjz.cn/

敖秋桅, 羅永巨, 呂敏, 朱佳杰. 不同羅非魚(yú)品系感染無(wú)乳鏈球菌后對(duì)血液和肝胰腺生化指標(biāo)的影響. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2020, 41(4): 167–173

Ao QW, Luo YJ, Lü M, Zhu JJ. Effects ofinfection on blood and hepatopancreatic tissue biochemical indices in different species of tilapia. Progress in Fishery Sciences, 2020, 41(4): 167–173

* 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃課題(2018YFD0900302-5)、廣西科技重大專(zhuān)項(xiàng)(桂科AA17204080-2)、國(guó)家特色淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-46)、廣西水產(chǎn)畜牧科技推廣應(yīng)用(GXIF-2016-015)和廣西重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科AB16380077)共同資助 [This work was supported by the Key Research and Development Program of China (2018YFD0900302-5), Guangxi Major Projects for Science and Technology (AA17204080-2), Freshwater Fishery Industry Technology System of China (CARS-46), Guangxi Aquaculture and Husbandry of Science and Technology of Promotion of Application (GXIF-2016-015), and Guangxi Key Research and Development Program (AB16380077)]. 敖秋桅，E-mail: 179312955@qq.com

朱佳杰，副研究員，E-mail: 724790058@qq.com

2019-06-10,

2019-08-09

(編輯 馮小花)