非小細胞肺癌組織中NSE的基因表達及與患者臨床特征的相關性研究

彭 琦，程少鵬，陳輔萍

（商洛市中心醫院a.呼吸內科；b.檢驗中心，陜西商洛 726000）

肺癌是我國發病率和死亡率均位居榜首的惡性腫瘤，其嚴重威脅人們的生命健康[1-2]，其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占肺癌的80%以上，并且患者的5年生存率僅為15%[3-5]。由于NSCLC 的發病機理尚不明確，因此臨床上缺乏針對此病的根本療法。目前主要的治療方法有放射性治療、化學藥物治療和生物靶向治療等，其雖有一定的臨床療效，但仍存在明顯的局限性。因此，如何有效預測和治療NSCLC 仍是擺在科研工作者面前的重要難題。

神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)是神經元和神經內分泌細胞中特有的酶[6]。已有文獻報道其在NSCLC 中呈高表達[7-8]，但是關于其在NSCLC 中的表達鮮有報道，本研究旨在分析NSCLC 患者腫瘤組織中NSE 的基因表達及其與患者臨床特征的相關性，以期為NSCLC 的臨床診療提供合理參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2013年1月～2017年12月商洛市中心醫院157 例NSCLC 患者為研究對象，其中男性94 例，女性63 例，平均年齡55.5±11.9 歲。入院時收集和整理研究對象完整的臨床資料。本研究經由我院醫學倫理委員會批準，并且患者均自愿參加且簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 熒光定量PCR儀(ABI公司,7900HT型)，電化學發光儀(廣州金程科學儀器有限公司,ECL-20 型)，電化學發光法所用試劑均購自北京陸橋技術公司。TRIzol Reagent 購自美國Invitrogen公司，RNA 反轉錄試劑盒和RT-PCR 試劑盒均購自TAKARA 公司，PCR 引物的合成和設計由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

1.3 方法 分別取50 ～100 mg 凍存的NSCLC 組織及其相應的癌旁正常組織，放入有液氮的研缽中研磨，加入TRIzol 試劑提取NSCLC 組織及其相應的癌旁組織中的總RNA，然后采用RNA 反轉錄試劑盒和RT-PCR 試劑盒將RNA 反轉錄為cDNA，以cDNA為模板進行PCR擴增。GAPDH作為內參基因。

本研究采用電化學發光法檢測血清NSE 水平。抽取患者股靜脈血2ml，于室溫下靜置1 h，3 000 r/min 離心15 min，取上清液，離心后2 h 加樣檢測，嚴格參照儀器和原裝試劑的操作流程進行檢測。另外，根據血清中NSE 的水平，分為低表達組(NSE＜15.2 ng/ml)和高表達組(NSE＞50.0ng/ml)。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0 統計軟件進行數據分析，NSCLC 組織和對應癌旁正常組織中NSE 表達水平的差異采用配對t檢驗，計量資料以均數± 標準差（+s）表示，PCR 結果采用2-ΔΔCt法進行分析。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

圖1 患者NSCLC 組織和相應癌旁正常組織中NSE 的相對表達量

2 結果

2.1 患者NSCLC 組織和相應癌旁正常組織中NSE的相對表達量 見圖1。探究患者NSCLC 組織和相應癌旁正常組織中NSE 的相對表達量，結果顯示NSE 在NSCLC 癌組織中的相對表達量顯著高于相應癌旁正常組織，其差異具有統計學意義(P=0.0182)。

2.2 患者血清中NSE 表達水平與患者臨床特征間的相關性 見表1。進一步探究NSE 表達水平與NSCLC 患者的臨床特征間的相關性，結果顯示NSE 表達水平與NSCLC 患者是否吸煙(P=0.002)、是否飲酒(P=0.032)、臨床分期(P=0.001)、是否原位癌(P＜0.001)、有無淋巴結(P＜0.001)和遠端轉移顯著相關(P=0.017)。

表1 患者血清中NSE 表達水平與患者臨床 特征間的相關性[n(%)]

3 討論

肺癌是我國第一大癌，其中NSCLC 占所有肺癌病例的85%左右。臨床上絕大多數的NSCLC 患者在就診時已錯過了最佳手術時機，只能選擇放化療。近年來探索有效的腫瘤標志物用于NSCLC 的預測和治療已成為科研工作者們關注的熱點。腫瘤標志物作為腫瘤發生、發展過程中的特異性物質，其可在惡性腫瘤的鑒別診斷、臨床分期、療效評估以及預后判別中發揮重要的作用[9-10]。

本研究旨在分析NSCLC 患者腫瘤組織中NSE的基因表達及其與患者臨床特征的相關性，以期為NSCLC 的臨床預測和診療提供合理參考。結果顯示NSE 在NSCLC 組織中的相對表達量顯著高于相應癌旁正常組織，這就表明NSE 可作為NSCLC 的腫瘤標志物。另外NSE 表達水平與NSCLC 患者的吸煙和飲酒習慣有關，并且還與患者的臨床分期、是否原位癌、有無淋巴結和遠端轉移顯著相關。

綜上所述，在NSCLC 患者中NSE 可作為其診斷的生物學指標，在臨床實踐中可考慮將NSE 作為NSCLC 早篩和診療的重要指標加以應用。