熒光免疫層析法檢測全血2019-nCoV IgM和IgG抗體在新型冠狀病毒肺炎診斷中的應用

陳澤衍，馬 雯，張立俊，許玉成，申紅衛，劉 嬌，梁 琪，陳曉靜，賈興旺

(1.南方醫科大學深圳醫院檢驗科，廣東深圳 518110；2.深圳市福田區疾病預防控制中心，廣東深圳 518040； 3.深圳大學總醫院檢驗科，廣東深圳 518055）

自2019年12月至今，2019-nCov 已造成全國八萬多人感染，三千多人死亡。2020年1月20日我國將新型冠狀病毒感染的肺炎納入法定乙類傳染病，并采取甲類傳染病的預防、控制措施[1]。COVID-19 潛伏期長、進展迅速、死亡率高，嚴重影響人民的身體健康，因此，建立早期、快速、簡便、準確的診斷體系，及時隔離疑似病例，是切斷這種烈性傳染病傳播最重要的手段。

機體感染2019-nCoV 后，免疫系統會針對該病毒發生免疫反應，產生特異性抗體。IgM 抗體是機體受感染后免疫系統最早產生的抗體，可作為早期感染的指標；IgG 抗體的產生通常晚于IgM，是既往感染的指標。特異性抗體IgM 和IgG 廣泛應用于各種疾病的臨床診斷，國家衛生健康委員會發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第七版）》[2]已把新型冠狀病毒抗體檢測列為疑似病例確診的病原學證據之一。本研究通過檢測全血IgM 和IgG 抗體來評估熒光免疫層析法檢測2019-nCoV IgM 和IgG 的應用價值，從而更好地指導臨床對COVID-19 患者的分類管理。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年1～2月期間首次2019-nCoV 核酸陽性而以后連續兩次核酸檢測均陰性的患者作為觀察組，將本院同期發熱門診排除COVID-19 的其他發熱患者作為對照組。觀察組28例，男性15 例，女性13 例，年齡15～62 歲，平均年齡38.82±12.23 歲；對照組30 例，男性19 例，女性11 例，年齡7～82 歲，平均年齡36.43±17.74歲。兩組患者上述資料對比無明顯差異（P＞0.05）。該回顧性研究經我院倫理委員會批準（倫理號：NYSZYYEC20200009）,所有患者數據都是匿名的，故予以豁免患者知情同意。納入標準：①符合《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案 (試行第七版) 》[2]中的診斷標準；②均屬于首次發病；③首次核酸檢測陽性而第二次以后連續兩次核酸檢測均陰性者；④臨床資料完整者。排除標準：①存在自身免疫性疾病患者；②有免疫缺陷疾病患者；③患有惡性腫瘤患者。

1.2 試劑與儀器 檢測試劑用北京丹大生物技術有限公司生產的新型冠狀病毒抗體測定試劑盒（熒光免疫層析法），用配套的干式熒光免疫分析儀（KHF01）檢測2019-nCoV IgM 和IgG 水平。根據試劑盒說明書，所有陽性值以大于正常范圍為判斷標準。

1.3 方法 抽取患者EDTA 抗凝全血2～3ml，檢測2019-nCoV IgM 和IgG 水平，比較兩組患者全血2019-nCoV IgM 和IgG 檢測值及陽性檢出率，陽性檢出率=陽性檢出例數/研究組例數×100%。比較全血2019-nCoV IgM 和IgG 檢測及聯合檢測診斷新型冠狀病毒肺炎的靈敏度和特異度。

1.4 統計學分析 采用Excel 2013 建立數據庫，采用SPSS 20.0 進行統計學分析，其中：抗體水平采用中位數和四分位間距描述，計數資料采用百分比描述；率的比較用χ2檢驗（Fisher 精確檢驗），對總體不符合正態分布或方差不齊的兩組連續變量的比較采用Wilcoxon 秩和檢驗，檢驗水準α= 0.05。

2 結果

2.1 兩組患者全血2019-nCoV IgM 和IgG 檢測值比較 見表1。進行秩和檢驗分析觀察組的抗體水平顯著高于對照組，差異具有統計學意義。

表1 觀察組與對照組IgM 和IgG 抗體比較[M(P25～P75) ]

2.2 兩組患者2019-nCoVIgM 和IgG 的陽性檢出率比較 見表2。觀察組IgM 和IgG 的陽性檢出率分別為71.4%和75.0%，IgM 和IgG 聯合檢測陽性檢出率為96.4%，高于IgM 或IgG 單項檢測，對照組IgM 或IgG 的陽性檢出率為0%。

類 別 觀察組(n=28) 對照組(n=30)IgM+，IgG- 21.4 0 IgM+，IgG+ 50 0 IgM-，IgG+ 25 0 IgM-，IgG- 3.6 100

2.3 2019-nCoV IgM 和IgG 檢測的靈敏度和特異度比較 2019-nCoV IgM 和IgG 檢測的靈敏度分別為71.4%和75.0%，特異性均為100%，兩者聯合檢測的靈敏度為96.4%。

3 討論

熒光RT-PCR 是檢測2019-nCoV 核酸最成熟、應用最廣的實驗室確診方法，但此方法敏感度較低，且對實驗條件、設施、人員要求高，檢測時間長而且影響因素多，單純使用咽拭子篩查有可能出現假陰性[3]。最新的研究顯示，咽拭子在新型冠狀病毒核酸檢測中存在較高的漏檢率[4]，此外，樣本的采集、運輸、儲存和核酸檢測試劑盒質量等問題均可影響檢測結果[5-9]。

有研究者針對98 例SARS 患者的研究發現一般在感染7 天后可以發現IgM 陽性，并在發病3 周后陽性最高，15 天左右出現IgG 陽性，60 天左右陽性最高，且持續時間較長[10]。ZHANG 等[11]連續監測15 例COVID-19 患者IgG 和IgM 的滴度變化，發現采樣第5 天IgG 的陽性率（81%～100%）和IgM 的陽性率（50%～81%）都大幅增加。我們的研究結果顯示，觀察組2019-nCoV IgM 和IgG的抗體水平顯著高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。2019-nCoV IgM 和IgG 的陽性檢出率分別為71.4%（20/28）和75.0%（21/28），而聯合檢測陽性檢出率高達96.4%（27/28），由此可見，2019-nCoV IgM 和IgG 抗體檢測試劑具有較高的靈敏度， 2019-nCoV IgM 和IgG 抗體的檢測有望彌補核酸檢測漏檢的風險。對照組中30 例全血標本2019-nCoV IgM 和IgG 抗體均為陰性，說明該試劑盒對COVID-19 的診斷具有較高的特異度，可以作為COVID-19 的篩查和診斷。

觀察組中IgM 單陽性患者占21.4%（6/28），提示該部分患者初次感染載量較低的2019-nCoV 并處于感染早期，機體免疫應答產生少量的IgM 抗體而尚未產生IgG，應關注這部分患者病情的變化。IgM 和IgG 均陽性患者占50%(14/28),說明該觀察組的大部分患者處于感染中期或恢復期，IgM 尚未減低至檢測下限，持久性抗體IgG 已產生，機體已經對2019-nCoV 產生了一定的免疫能力；或核酸檢測結果假陰性，患者處于感染活躍期。IgG 單陽患者占25%（7/28），這部分患者隨著IgM 濃度的下降直至消失和IgG 濃度的升高，預示患者逐漸痊愈并獲得對2019-nCoV 的免疫力，如恢復期IgG抗體仍持續升高，較急性期增加4 倍及以上時，應堤防復發感染的可能。IgM 和IgG 均陰性患者占3.6%(1/28),通過分析該患者的臨床癥狀和流行病學史，雖然該患者連續兩次核酸檢測和抗體檢測均陰性，但臨床癥狀和影像學檢查符合疑似病例診斷，且抗體水平較對照組的平均水平均偏高，患者可能處于2019-nCoV 感染“窗口期”，需進一步監測抗體滴度的變化。

2020年2月21日國家衛生健康委員會發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第五版）》中附件4《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南》[12]，指出應用新型冠狀病毒抗體檢測可作為新型冠狀病毒肺炎的輔助診斷；2020年3月3日國家衛生健康委員會發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第七版）》在原有基礎上增加了 “血清學檢測”作為依據[2]，把新型冠狀病毒抗體檢測列為疑似病例確診的病原學證據之一，隨著檢驗手段的不斷提升，防控方案的不斷更新，抗體檢測在COVID-19 的診斷中起著重要的作用。本研究采用外周血樣本進行2019-nCoV IgM 和IgG 抗體檢測，樣本采集和保存簡單易行可控，避免多次采集鼻咽拭子標本所冒被傳染的風險，檢測方法不需要特別的操作人員，基層醫院均可開展，實驗條件要求低，操作簡便快捷，15min 即可出結果。

綜上所述，采用熒光免疫層析法檢測2019-nCoV IgM 和IgG 診斷COVID-19 患者具有靈敏度高、特異度好的特點。該方法操作簡單、適合中等批量樣本篩查，是對核酸檢測的良好補充。利用該方法監測患者抗體濃度變化可動態監測患者康復過程，本文的樣本例數有限，2019-nCoV IgM 和IgG抗體的臨床價值有待后續工作繼續研究。