多發(fā)皮損尖銳濕疣患者不同部位取材樣本HPV基因型的差異性分析

馮 婷,曾成龍,馬翠玲,王勝春,趙小東,閆 丹

（第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科，西安 710032）

尖銳濕疣(condyloma acuminate，CA)是人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染引起的常見性傳播疾病，根據(jù)基因組的同源性不同將HPV 分為多種型別，目前已明確200 多種[1]，分別用數(shù)字表示，其中有30 種在宮頸癌患者中發(fā)現(xiàn)[2]，42 種與生殖道疾病有關(guān)[3]，HPV 基因型具有地域性差別和個體差異[4]。CA 好發(fā)于肛周和生殖器部位，隨著性生活方式的改變，亦可見于口腔，臨床中常見多個部位同時累及的患者，那么這些患者各個部位HPV 基因型有何特點？部位之間HPV 感染是否具有差異性？為此我們選取多發(fā)皮損CA 患者的不同部位皮損作為研究對象，探究其HPV 基因型數(shù)量及危險程度的差異性，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 研究對象 均來自2011年7月～2019年7月就診于西京醫(yī)院性病門診患者。入選標準：①符合臨床診斷標準[5]；②采集標本前未給予任何治療的患者；③至少兩個部位有皮損；④隨機采取兩處部位皮損并進行了HPV 基因分型檢測。排除標準：①其它HPV 相關(guān)感染疾病；②嚴重肝、腎、心和腦等疾病者；③均排除梅毒、艾滋病、生殖道沙眼衣原體感染、淋病、乙肝和自身免疫性疾病患者；④妊娠及哺乳期婦女。根據(jù)入選標準和排除標準，最終入選患者184 例，男性88 例（47.83%），女性96 例（52.17%），年齡32.43±11.25 歲。根據(jù)取材部位不同將患者分為四組，即肛周外陰組、口腔外陰組、肛周口腔組和不同外陰組。

1.2 試劑和儀器 HPV 基因分型檢測試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供，可檢測18 種高危型(HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83) 和5 種 低危型(HPV6，11，42，43，81)共23 種HPV 基因型。TL988 實時熒光定量PCR 儀由西安天隆科技有限公司提供，F(xiàn)YY-3 型分子雜交儀由江蘇興化市分析儀器廠提供。

1.3 試驗方法 充分暴露患者要采集的疣體部位，先用生理鹽水清洗，然后在患者皮損處消毒，再用消毒活檢鉗夾取疣體組織置于標本保存液，立即檢測或置于-20℃冰箱內(nèi)保存待檢。HPV 基因分型檢測原理采用的是PCR 反向分子雜交法，實驗步驟均嚴格按照試劑盒說明書進行操作，實驗過程也在質(zhì)量控制范圍內(nèi)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0 軟件包進行數(shù)據(jù)匯總與統(tǒng)計分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者HPV 基因分型檢測結(jié)果 見表1。184 例CA 患者共368 份標本，陽性363 份（98.64%，其中5 份陰性為口腔部位）。HPV 基因型完全相同的有69 例（37.5%），少于基因型不同病例115 例(62.5%，包括不全相同81 例和完全不同34 例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=23.00，P＜0.05）。

表1 184 例CA 患者HPV 基因型差異性比較[n(%)]

2.2 肛周外陰組HPV 型差異性分析 見表2。有21 例（50.00%）完全相同的HPV 基因型且依次為HPV6,11,18,42,43,56,59；不全相同HPV 基因型有18 例（42.86%），主要表現(xiàn)為外陰部位HPV 基因型、高危型和低危型的數(shù)量多于肛周部位，另肛周部位HPV 基因型、高危型和低危型的數(shù)量多于外陰部位是女性明顯高于男性；完全不同HPV 基因型有3 例（7.14%），分別是2 男1 女，男性一例是外陰多2 種低危型，另一例是外陰多1 種高危型和少2 種低危型，女性是外陰多1 種高危型和少1種低危型。

表2 肛周外陰組18 例CA 患者HPV 基因型 不全相同的情況分析（n）

2.3 口腔外陰組HPV 型差異性分析 見表3。HPV基因型均完全不同，且外陰部位的型別數(shù)量、高危型數(shù)量和低危型數(shù)量大于口腔部位。

表3 口腔外陰組16 例CA 患者HPV 基因型完全 不同的情況分析（n）

2.4 不同外陰組HPV 型差異性分析 見表4 和表5。有48 例（38.40%）完全相同的HPV 基因型且依次為HPV6,11,51,18,43,52,31,53,66,16,33,42,56 和59；不全相同的HPV 基因型有63 例（50.40%），完全不同的HPV 基因型有14 例（11.20%），男性和女性的兩個部位差異主要表現(xiàn)為相差1 種低危型或高危型。

2.5 肛周口腔組HPV 型差異性分析 僅有1 例肛周為6 型和口腔為11 型HPV 基因型完全不同的男性。

表4 不同外陰組63 例CA 患者不全相同HPV 基因型的情況分析（n）

表5 不同外陰組14 例CA 患者完全不同HPV 基因型的情況分析（n）

3 討論

HPV 是屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬的雙鏈球形DNA 無包膜病毒，HPV 通過皮膚黏膜接觸途徑感染人體后，大量病毒顆粒的脫落表層細胞或角蛋白碎片通過小的損傷進入易感上皮裂隙，潛伏在基底角朊細胞間，HPV 侵入細胞核，引起細胞向側(cè)面迅速分裂增殖同時伴隨病毒顆粒的繁殖與播散，引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，形成特征性的乳頭瘤[6]，主要表現(xiàn)為尋常疣和尖銳濕疣等。CA 可以單發(fā)也可以多個部位同時累及,CA 患者一個部位的HPV 型別特點是可能單一感染，也可能多重感染,可能是單純低危型或高危型感染，也可能是低危和高危混合感染,那么多個部位的HPV 基因型特點呢？它們之間有何差異？這是本研究的目的。

本研究結(jié)果顯示184 例CA 患者中HPV 基因型完全相同有69 例，少于基因型不同病例115 例(包括不全相同81 例和完全不同34 例），另四組中除肛周外陰組相等外，其余三組均符合以上結(jié)果，得出多發(fā)皮損CA 患者皮損部位不同，其感染HPV基因型的類型、數(shù)量及危險程度大多不同。肛周外陰組和口腔外陰組差異性為外陰部位HPV基因型、高危型和低危型的數(shù)量多于肛周部位和口腔部位，可以說明外陰部位的HPV 基因型較肛周和口腔更復(fù)雜，而不同外陰之間HPV基因型也存在明顯差異，而且主要相差1 種低危型或高危型。總之多發(fā)皮損患者的HPV 感染特點較單發(fā)患者更具復(fù)雜性，也有文獻報道顯示多發(fā)皮損比單發(fā)皮損復(fù)發(fā)率高[7]，這可能與多發(fā)皮損部位的HPV 基因型特點有關(guān)。

部位不同HPV 基因型感染特點也不同，其原因有以下考慮：①HPV 本身具有宿主和組織的特異性，HPV 可感染皮膚或者黏膜表面，即皮膚型和黏膜型。②各個部位HPV 清除時間不一致。③可能與生殖器不同部位組織對性激素反應(yīng)程度不同有關(guān)，使HPV 病毒載量有差異。④采集標本方法因素，CA 致病機制顯示HPV 病毒主要集中在顆粒層中的細胞核內(nèi)，多分布在表皮基底層，這決定了采集標本的方法，目前取材通常用的刷子刷和本研究夾取疣體皮損，若采集皮損的面積深度不同都有可能導(dǎo)致HPV 基因型不同，故也可因取材不充分而導(dǎo)致某HPV 基因型漏檢的可能。⑤檢測方法本身決定，不可靠和重復(fù)性不夠的方法會導(dǎo)致不同部位假陽性，本組采用的是反向分子雜交技術(shù)，具有快速、靈敏度高和特異性好且一份標本可同時檢測23種HPV 基因型別的優(yōu)點。⑥還受其它因素影響，如年齡、地域及性習(xí)慣等因素[8]，病程和性別因素均影響HPV 感染型別分布[9]。

綜上所述，多發(fā)皮損CA 患者某一處部位皮損的HPV 基因型可能不完全代表此患者HPV 感染型別，臨床上僅采集一處皮損進行檢測可能有HPV型別漏檢，如果漏檢的是高危型，就不能更好地對高風險人群進行風險分層管理，有文獻報道含有高危型多重病毒亞型的混合性感染，對病變的發(fā)生與發(fā)展可能有累加和輔助作用[10]，臨床上應(yīng)引起重視，必要時可考慮多部位取材[11]，如反復(fù)復(fù)發(fā)的患者。目前臨床上針對多發(fā)皮損CA 患者并未有特殊治療，大多還是按常規(guī)處理，西京醫(yī)院皮膚科主要是采用物理方法加上光動力療法，之后加強隨訪，但也有部分醫(yī)院會將高危型與低危型感染區(qū)別開來進行個體化治療。