黃芩苷對糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎癥因子水平及游離脂肪酸代謝的影響

范景輝 姚慧欣 尹松鶴 趙玉梅

[摘要] 目的 探討黃芩苷對糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎癥因子水平及游離脂肪酸代謝的影響。 方法 選擇健康雄性Wistar大鼠30只作為研究對象。造模成功后，采取隨機數字表法分為模型組和黃芩苷組兩組，每組15只。模型組不加以治療干預，黃芩苷組采取黃芩苷進行治療。飼養12周后處死，檢查和比較兩組大鼠leptin、FFA、炎癥因子水平以及與FFA代謝相關血液指標。 結果 黃芩苷組大鼠leptin和FFA檢測結果分別為（1.51±0.34）g/mL和（111.72±9.28）μmol/g，均低于模型組的（2.19±0.30）g/mL和（198.34±20.18）μmol/g。在炎癥因子水平檢測結果方面，黃芩苷組IL-6、IL-18和TNF-α檢測結果分別為（0.25±0.08）ng/mL、（0.35±0.10）ng/mL和（2.58±0.74）ng/mL，均低于模型組的（0.50±0.12） ng/mL、（0.57±0.13）ng/mL和（5.20±1.13）ng/mL。在與FFA代謝相關血液指標檢測結果方面，黃芩苷組MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS檢測結果分別為（2.34±0.79）mmol/L、（10.17±1.76）mmol/L和（9.79±1.00）mmol/L，均低于模型組的（3.62±0.77）mmol/L、（17.27±2.32）mmol/L和（17.15±1.51）mmol/L。差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論 黃芩苷有效提高了糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的治療效果。

[關鍵詞] 黃芩苷;糖尿病;非酒精脂肪肝;大鼠;瘦素;炎癥因子水平;游離脂肪酸

[中圖分類號] R285.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）16-0032-03

Effects of baicalin on the level of leptin，inflammatory factors and free fatty acid metabolism in the rats with diabetes mellitus complicated with nonalcoholic fatty liver disease

FAN Jinghui1? ?YAO Huixin2? ?YIN Songhe3? ?ZHAO Yumei1

1.Department of Pharmacy， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Mudanjiang? ?157000， China;2.Department of Continuing Education， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College， Mudanjiang? ?157000， China; 3.Food and Drug Inspection Center of Mudanjiang City in Heilongjiang Province， Mudanjiang? ?157000， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of baicalin on the level of leptin， inflammatory factors and free fatty acid（FFA） metabolism in the rats with diabetes mellitus（DM） complicated with nonalcoholic fatty liver disease （NAFLD）. Methods 30 healthy male Wistar rats were selected as the subjects of research. After successful modeling，the rats were divided into the model group and the baicalin group through the random number table method with 15 rats in each group. The model group was received no treatment intervention， while the baicalin group was received baicalin for treatment. After 12 weeks of feeding， the rats in both the two groups were killed， and the level of leptin， FFA， and inflammatory factors as well as blood indexes related to FFA metabolism were examined and compared between the two groups. Results The leptin and FFA detection results in the baicalin group were （1.51±0.34）g/mL and （111.72±9.28） μmol/g respectively， which were lower than the （2.19±0.30）g/mL and （198.34±20.18） μmol/g in the model group. In terms of detection results of the level of inflammatory factors， the detection results of IL-6， IL-18 and TNF-α in the baicalin group were （0.25±0.08）ng/mL， （0.35±0.10）ng/mL and （2.58±0.74） ng/mL respectively， which were lower than the （0.50±0.12） ng/mL，（0.57±0.13） ng/mL and （5.20±1.13） ng/mL in the model group. In terms of detection results of blood indexes related to FFA metabolism， the detection results of MALONYL-CoA，ACCa-se and FAS in the baicalin group were （2.34±0.79）mmol/L，（10.17±1.76）mmol/L and （9.79±1.00） mmol/L respectively， which were respectively lower than the （3.62±0.77） mmol/L，（17.27±2.32） mmol/L and （17.15±1.51） mmol/L in the model group. The differences were statistically significant（P<0.05） in all the above comparisons. Conclusion Baicalin has effectively improved the therapeutic effect on the rats with DM complicated with NAFLD.

[Key words] Baicalin; Diabetes mellitus; Nonalcoholic fatty liver disease; Rat; Leptin; Level of inflammatory factors; Free fatty acid

據流行病學統計，在普通人群中，非酒精性脂肪肝的發病率約為5%，而在糖尿病患者中，非酒精性脂肪肝的發病率高達21%～78%，由此可見，在糖尿病患者群體中，非酒精性脂肪肝的發病率較高。由于受到血糖異常情況的影響，嚴重降低了糖尿病患者的生活質量，當合并非酒精性脂肪肝后，會進一步損傷患者的肝功能，從而增加患者整體的治療和康復難度[1，2]。而目前受到醫學發展的制約，對此類患者的相關醫學研究較少，治療方法較為有限。在此背景下，我院以糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠為研究對象，造模成功后采取黃芩苷對大鼠進行治療干預。黃芩苷是中藥黃芩提取出的一種活性成分，具有良好的抑菌、利尿、抗炎和降膽固醇的作用。近年來，隨著醫學技術的發展，白慶云[3]證實，黃芩苷還具有良好的保護肝臟效果。以此為出發點，探討黃芩苷對糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎癥因子水平及游離脂肪酸代謝的影響，為臨床治療工作的開展提供借鑒和參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇健康雄性Wistar大鼠30只作為研究對象[北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號SCXK（京）2015-0001]，6周齡，體重140～160 g，平均（152.23±5.23）g，SPF級。Wistar大鼠均購自北京維通麗華實驗動物有限公司。經我院實驗動物倫理委員會批準實施。大鼠由牡丹江醫學院動物實驗中心飼養，室溫（22±1）℃，相對濕度50%～70%，按正常晝夜節律調整照明時間。

1.2 方法

1.2.1 試劑和設備? 黃芩苷和鏈脲佐菌素分別購自南京青澤醫藥科技開發有限公司和美國 Sigma公司，戊巴比妥鈉購自成都都格雷西亞化學技術有限公司。瘦素（leptin）和游離脂肪酸（FFA）采用酶聯免疫吸附實驗法，試劑盒購自北京奇松生物科技有限公司。在炎癥因子水平檢測方面，白介素-6（IL-6）、白介素-18（IL-18）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）均采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附實驗法，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。在與FFA代謝相關血液指標檢測方面[4]，脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰輔酶A羧化酶（ACCa-se）和丙二酰輔酶A（MALONYL-CoA）同樣采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附實驗法，試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司。以上均采用日本Olympus Au2700全自動生化分析儀檢測。

1.2.2 模型誘導? 將30只Wistar大鼠均順應性3 d后，給予高脂飼料喂養。高脂飼料總熱量為18.7 Kj/g，其中碳水化合物占30.04%、脂肪占55.37%、蛋白質占14.59%。連續飼養5周后，按每克大鼠體重35 μg的比例，腹腔注射鏈脲佐菌素。3 d后，檢測大鼠空腹血糖數值，若檢測結果>11.1 mmol/L，表示造模成功[5-7]。然后采取隨機數字表法，將大鼠分為模型組和黃芩苷組。測量大鼠體重，模型組按10 mL/（k·d）比例給予生理鹽水灌胃。黃芩苷組給予黃芩苷干預。參照唐彬等[8]對脂肪肝模型大鼠的用藥劑量，即按30 mg/（kg·d），將黃芩苷融入與模型組等量的生理鹽水中，為大鼠進行灌胃治療。

1.2.3 標本采集? 兩組大鼠連續飼養12周后，按每4克大鼠體重3 mL的比例，注射濃度為2%的戊巴比妥鈉對大鼠進行麻醉。打開腹腔，從大鼠下腔靜脈取血。低溫條件下離心處理15 min后，進行相關指標的檢測。

1.3 觀察指標

觀察指標包括leptin和FFA檢測結果;炎癥因子水平檢測結果，包括IL-6、IL-18和TNF-α等;與FFA代謝相關血液指標檢測結果，包括MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS等。

1.4 統計學方法

采用SPSS20.0統計學軟件處理結果。計量資料以（x±s）表示，多組間比較行單因素方差分析，兩兩比較行t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組leptin和FFA檢測結果比較

見表1。黃芩苷組大鼠leptin和FFA檢測結果低于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。

2.2 兩組炎癥因子水平檢測比較

見表2。黃芩苷組大鼠IL-6、IL-18和TNF-α檢測結果低于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。

2.3 兩組與FFA代謝相關血液指標檢測比較

見表3。黃芩苷組大鼠MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS檢測結果低于模型組，差異均有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

在糖尿病合并非酒精性脂肪肝的臨床治療研究上，多以西醫治療為主，如利拉魯肽和吡格列酮等[9]，雖然可改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者的相關檢測指標，但由于糖尿病非酒精脂肪肝的治療是一個長期的治療過程，往往會逐漸增加肝、腎等臟器的工作負擔，且有一定的毒副作用，因此，尚無有效的治療措施和方法[10-12]。近年來，隨著我國傳統醫學的發展，中醫應用日益廣泛。以黃芩苷為例，黃芩苷是從雙子葉唇形科植物黃芩的干燥根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，黃色結晶，加醋酸鉛試液發生橘黃色沉淀[13]。其本身就有較強的抑菌、利尿、抗炎和降膽固醇等作用。隨著其相關研究的逐步深入，尤其在以大鼠為研究實驗對象，經大量的實驗研究證實，黃芩苷更多的藥用價值被不斷的挖掘和發現[14]。

唐彬等[8]應用黃芩苷對高脂-脂肪肝模型大鼠進行干預。治療干預后，本組大鼠的TNF-α和IL-6等炎癥因子水平均明顯改善。劉長山等[13]選擇2型糖尿病大鼠為對象，造模成功后采取黃芩苷進行治療。有效降低了大鼠瘦素等指標的檢測結果。李紅山等[15]通過實驗研究證實，黃芩苷對脂肪肝大鼠游離脂肪酸的代謝具有良好的抑制作用，如FFA、AMPK和ACCa-se等指標控制情況較為理想。

黃芩苷作用于大鼠后，對其瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等指標均具有良好的改善作用。在檢驗醫學技術高速發展的背景下，越來越多的臨床資料證實，瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等指標，與非酒精性脂肪肝的發生和發展具有明顯的對應關系。如在瘦素方面，正常情況下，瘦素可使甘油三酯存儲在脂肪細胞中，具有調整非脂細胞的甘油三酯含量的作用。但當瘦素作用出現障礙時，會影響以上過程，導致甘油三酯在肝臟中不斷聚集，從而導致非酒精性脂肪肝的發生;在炎癥因子方面，如以IL-6為例，體內生成IL-6增多后，會抑制磷脂酰肌醇、葡萄糖轉運蛋白4和胰島素受體底物的表達，使胰島素受體后信號轉導異常，發生胰島素抵抗。胰島素抵抗后，帶來的直接結果如甘油三酯聚集和游離脂肪酸增多等，以上均是非酒精性脂肪肝的危險因素;在游離脂肪酸方面，血液中的游離脂肪酸是含C10以下的脂肪酸。游離脂肪酸升高后，超出肝臟細胞的攝取范圍，會促使其合成甘油三酯，從而發病。根據劉長山等[13]的研究結果，黃芩苷具有調節大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸的作用。因此結合以上實驗成果和治療經驗，我院將黃芩苷應用于糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠的實驗研究中。試驗后發現，與未進行藥物干預的模型組大鼠比較，黃芩苷組大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等檢驗結果均優于后者，與劉長山等[13]的研究結果基本一致，證實了黃芩苷對糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠具有較為理想的治療效果。

綜上所述，黃芩苷可以有效降低糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸的水平。希望進一步加強深入的研究和推廣，為黃芩苷的臨床應用打下良好基礎。

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（收稿日期：2020-02-05）