規模化種豬場豬瘟血清抗體水平變化規律的分析

馬祥，戴鏡紅，何雄江，康樺華

(1. 廣東省農業科學院動物衛生研究所,農業農村部獸藥與診斷學科群廣東科學觀測實驗站,廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東 廣州 510640；2. 北京愛德士元亨生物科技有限公司，北京 100301；3. 廣州市番禺區動物防疫監督所，廣東 廣州 511400)

豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起豬的一種高度接觸性傳染病，被OIE列為通報疫病。因其發病率和死亡率高，流行廣泛，引起世界養豬業的極大關注[1]。近年，隨著豬瘟病毒在豬場及環境中長期存在，其耐受性變化及重組事件的發生使流行特點逐步由原來的大流行轉變為散發性和周期性流行，另一方面病毒臨床表現型也出現了如溫和型、非典型及無名高熱綜合征等特點[2-3]。豬瘟的防控工作任務繁重，發病機制、疫苗開發、有效疫苗評價手段仍是豬病專家們研究的重要方向。種豬和后備豬是豬瘟凈化中須高度重視的管理對象，規模化種豬場的凈化是逐步控制豬瘟并實現豬瘟凈化計劃的重要途徑[4-5]；豬群的豬瘟抗體水平維持在一定水平且整齊，是達到凈化的關鍵環節，是對豬群健康與否的關鍵評估指標[6]。

本研究以兩個生產業績較好的規模化種豬場為對象，通過連續數年的豬瘟抗體監測，并通過評估豬群體免疫合格率、離散度進一步分析總結免疫后抗體變化規律，同時結合豬場生產狀況，總結并驗證在豬瘟疫苗免疫效果良好狀態下，豬瘟抗體阻斷率、離散度及抗體值區間等有效指標，形成評價豬瘟疫苗免疫效果的判定標準。據此，通過免疫方案優化及生物安全管理等措施明顯降低豬瘟群體發生率。通過案例分析為規模化種豬場提供豬瘟控制方案，同時為豬瘟防控提供一定臨床參考。

1 材料與方法

1.1 血樣的采集及處理

前腔靜脈采血。分別采集不同豬場不同時間豬的血液，每份血樣采集3～5 mL，裝于離心管中，編號，靜置30 min。待血清析出后，干冰冷藏送至實驗室，離心分離血清，備用。

1.2 豬場背景

選取2個生產業績良好的種豬場：A場有2 400頭存欄母豬，B場有4 000頭存欄母豬，為控制凈化場；豬場A、B場的免疫與采樣背景見表1。

表1 豬場免疫背景評估采樣表

1.3 檢測試劑盒

HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒的生產廠家為美國愛德士生物科技有限公司(IDEXX Laboratories, Inc.)，試劑盒批號：B021, -4 ℃保存。

1.4 試驗方法

豬瘟抗體ELISA檢測方法參照HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒的說明書操作。

有效性判定標準：設標準陽性孔和標準陰性孔，陰性對照孔平均OD450高于0.50，陽性對照孔阻斷率高于50%。

1.5 抗體水平監測分析方法

1.5.1 A豬場抗體水平檢測

采用ELISA方法對不同生產階段豬、選取不同時間段開展豬瘟抗體檢測，結合生產指標業績情況，分析CSFV抗體阻斷率、離散度等指標變化情況。具體采集樣品的背景如表2。

表2 2014年B豬場監測采樣情況表

表2 A豬場CSFV抗體檢測樣本背景情況表

1.5.2 B豬場抗體水平檢測

選取B豬場中一條開展豬瘟控制試驗的生產線。該條生產線豬瘟疫苗采取普免策略(3次/年，免疫間隔時間4個月)，含種豬500頭。控制方案如下：首先用購置的HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒對生產線上所有豬進行豬瘟抗體測定。根據測定結果分類處理，對于阻斷率低于40%的豬進行隔離，并常規劑量補充免疫1次，6周后同樣的方法測定抗體，對于抗體陽性豬歸群處理，陰性豬只采取完全隔離或者淘汰。距上次測定3個月后，同樣的方法對整條線種豬群再處理1次。執行控制方案持續2年時間(2013年至2014年)。

2 結果與分析

2.1 A豬場2011年至2012年豬瘟抗體水平監測結果

對A豬場2011年CSF抗體水平進行分析，分析結果如表3所示。A豬場種豬群在免疫3～4周后CSF抗體平均阻斷率介于63.61%～71.24%。而哺乳母豬在長達4個月的免疫間隔期下抗體呈陰性，母源抗體的干擾使哺乳仔豬陽性率達50%。

表3 A豬場CSF抗體陽性率、離散度和平均值 %

2012年，種豬群在免疫后6～8周后CSF抗體平均阻斷率可達71%，離散度CV值約為27%，結果見表4。

表4 A豬場2012年CSF抗體陽性率、離散度和平均值 %

A豬場2011年至2012年生產業績數據見表5。該場的配種分娩率均在90%以上，成活率也在91%以上，豬場的種豬群生產業績良好。結合豬瘟抗體變化規律，該豬群在免疫后平均阻斷率普遍高于50%，同時離散度CV值低于40%，證實該場的豬瘟免疫效果良好。

2.2 B豬場2013年至2014年豬瘟抗體監測結果

2.2.1 B豬場2013年豬瘟抗體檢測結果

如表6所示，B豬場生產線通過實施CSF控制計劃后，不同種豬群的抗體陽性率平均值均高于85%，平均離散度達8.19%，其中B豬場種豬群的CSF抗體陽性率平均值為89.79%，離散度為7.49%。因此，該場種豬群豬瘟疫苗免疫效果在CSF控制策略下表現良好。

表6 B豬場2013年豬瘟抗體陽性率、離散度和平均值

2.2.2 B豬場CSF控制前后生產性能比較

比較2012年和2013年豬群的生產性能，結果如表7所示。豬瘟控制計劃使豬場窩均產活仔數增加了0.8頭，增長了8.2%。斷奶前仔豬平均死亡率下降2%，母豬每年提供上市的豬增加近3%。綜合評估，生產性能提高較大。

表7 B豬場2012和2013年生產性能一覽表

2.2.3 B豬場2014年豬瘟抗體檢測結果分析

如表8所示，2014年該場群體CSF抗體陽性率平均值為60.86%，離散度平均值為35.67%。其中在普免4周后和8周后母豬群均獲得較高的抗體水平(抗體平均值分別為78.4%和73.93%)，對應抗體離散度分別為17.32%和21.62%；在普免后4～6周和8～10周生長豬和肥育豬均獲得較高的抗體水平(抗體平均值分別為68%和69.88%)，對應抗體離散度分別為15.23%和18.47%；哺乳仔豬通過母源抗體獲得較好的保護率；各類豬群均呈現較高的抗體水平。豬場在實施豬瘟控制計劃1年后，其群體的豬瘟抗體值仍高于70%，同時商品豬在二免后6周高于65%，且種豬群和商品豬群的CSF抗體離散度CV值均低于20%。

表8 B豬場2014年豬瘟抗體陽性率、離散度、平均值結果

3 討論

本研究以2個規模化種豬場為對象，4年連續監測豬瘟抗體值及生產業績數據。通過分析數據發現，在豬群抗體檢測結果判定中群體免疫合格率和抗體離散度是重要的衡量指標，豬群免疫效果良好的標準為豬瘟抗體的平均阻斷率高于50%，同時離散度CV值低于25%；此外，2個豬場豬瘟病原檢測結果均為陰性；通過開展豬繁殖與呼吸道綜合征以及豬偽狂犬病的免疫監測，種豬群在4年期間均沒有豬繁殖與呼吸道綜合征的流行或發病，豬偽狂犬病抗原維持陰性，這從另一個角度說明，豬群豬瘟抗體可以作為豬群健康的參考指標之一，豬群的健康提高了豬對疫病的抵抗力，降低了豬場感染其他疾病的風險。

豬瘟控制凈化場B培育健康種群的成功經驗提示，種豬和后備豬群的凈化是關鍵因素。分析其數據，可知該場通過控制方案后，豬瘟抗體陽性率雖然在一定范圍內波動，但有明顯提高，其數值以及抗體離散度都趨于穩定(平均抗體陽性率高于85%，離散度低至4.35%)，可見豬瘟控制計劃的有效性；進一步推測該場豬瘟綜合防控的關鍵是建立在后備和種豬豬群的凈化完成健康種群的培育。其中對規模化豬場中豬瘟進行控制的有效方法是從源頭上對種豬群實施凈化。具體的凈化措施包括如下幾方面：首先要堅持對種豬群和后備豬群約半年期的無差別病原篩查，結合豬瘟阻斷率的高低判斷抗體免疫效果，據此采取不同的措施，包括對低于40%的豬進行隔離。通過加強免疫并配以觀察和馴化，再經抗體檢測，評估進入種豬群的可能性，最終使豬瘟抗體值處于一定的標準區間，達到豬群穩定的目的。豬場通過3到5個凈化流程實現豬瘟病毒帶毒率從30%降至低于1%。

相對于血清學抗體效價(尤其是ELISA)，豬瘟抗體中和效價更能反映出疫苗對豬的保護能力，但中和抗體檢測方法相對繁瑣難以推廣，所以通過評估二者的相關性以期用豬瘟ELISA方法代替中和抗體檢測方法并用于預估疫苗保護力是有效的途徑[7]。已有研究對豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒(IDEXX)進行檢測抗體效價和常規中和抗體效價相關性進行評估，相關系數可達0.863，說明在一定程度上可以反映出豬群的豬瘟抗體水平，并用于評估豬群對豬瘟的抵抗力[8]。分析主要原因是E蛋白可誘導機體產生中和抗體，同時可激發豬體對豬瘟病毒產生抵抗性免疫應答，而該試劑盒包被抗原為E蛋白。評估豬群對豬瘟的抵抗力，在中和抗體滴度不低于1∶32時認為抗體合格，對應采用HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟抗體的抗體阻斷率50%。因此，該試劑盒可用于豬群的豬瘟抗體水平檢測及豬群對豬瘟的抵抗力評估[9-10]。綜上所述，在規模化豬場豬瘟的控制過程中，由于豬瘟抗體值反映了豬體對豬瘟病毒的易感性，所以豬瘟疫苗免疫成敗的關鍵是針對性地監測豬群免疫抗體，并確定科學的免疫適宜期。同時，針對豬瘟野毒感染風險與豬群豬瘟疫苗免疫合格率及抗體離散度的對應關系的問題至今未見深入的研究報道，在未來一段時間，它仍是一個值得探討的問題。多數專家堅持認為，群體免疫保護率達到85%是防控豬瘟的關鍵[11]。同時，商品豬豬瘟抗體離散度在25%，而種豬群需低于20%。對于大部分規模化養豬場，由于擁有先進的管理水平和專業的技術人員，以及相對完備的實驗室診斷技術平臺，有能力對豬場群體的豬瘟抗體水平開展長期或階段性的監測，據此及時調整其免疫程序，控制豬瘟的群體免疫合格率在90%以上，離散度在20%以內。