太子參參須提取物對免疫抑制小鼠血清免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的影響

甘思言，衣偉萌，喬石，閔思明，陳賽紅，黃一帆，張炎達(dá)， 馬玉芳*

(1. 中西獸醫(yī)結(jié)合與動物保健福建省高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；2. 福建省獸醫(yī)中藥與動物保健重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建農(nóng)林大學(xué)，福建 福州 350002；3. 福建貝迪藥業(yè)有限公司，福建 寧德 355399)

太子參(Radixpseudostellariae)為石竹科植物的一種[1]，又名童參、四葉參等。最早收載于《本草拾遺》，廣泛分布于福建、內(nèi)蒙古、河北等地，福建柘榮縣有“中國太子參之鄉(xiāng)”的美稱，其太子參產(chǎn)量占全國六成以上[2]。太子參可藥食兩用，歸脾、肺經(jīng)，具有益氣、健脾等多種功效，其主要成分為多糖、皂苷、黃酮、氨基酸等[3]。研究表明，太子參具有抗應(yīng)激、增強(qiáng)免疫力、抗氧化等作用[4-5]，而其中的苷類和多糖是太子參發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用最有效的成分[6]。

太子參參須是太子參的尾根和側(cè)須，其占太子參質(zhì)量的10%～15%[7]。太子參參須與太子參的化學(xué)成分相同，區(qū)別僅在于各成分的含量不同。研究表明，太子參參須多糖的含量達(dá)4.68%[8]，總皂苷含量達(dá)0.25%[7]。但太子參參須多被丟棄，造成極大浪費(fèi)。目前關(guān)于太子參參須有效成分多糖和皂苷的藥理鮮見報(bào)道。本研究所用的太子參參須提取物(Radixpseudostellariaefibrous root extraction, RPFRE)主要成分為太子參參須多糖和皂苷，通過給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺(CY)復(fù)制免疫抑制模型小鼠，灌喂不同劑量RPFRE，檢測試驗(yàn)小鼠血清中相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)，探討RPFRE對免疫抑制小鼠抗氧化功能和免疫功能的影響，旨在為太子參參須進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

太子參參須提取物，由福建貝迪藥業(yè)有限公司惠贈；注射用環(huán)磷酰胺購于百特醫(yī)療用品貿(mào)易(上海)有限公司；總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測試盒、丙二醛(MDA)測試盒均購自南京建成生物工程研究所；免疫球蛋白IgA、IgM、IgG檢測試劑盒，補(bǔ)體C3、C4檢測試劑盒均購自浙江伊利康生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及處理

取50只清潔級KM小鼠(購自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心)，雄性，體重(20±2) g， 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，分別為空白組(CK組)、模型組(CY組)、RPFRE低、中、高劑量組(100、200、400 mg/kg)，每組10只。1～3 d，CK 組小鼠腹腔注射生理鹽水，其他組小鼠腹腔注射CY 80 mg/kg；4～17 d，CK、CY 組小鼠每日用雙蒸水灌胃，RPFRE組分別用相應(yīng)劑量的RPFRE灌胃。

1.3 血樣采集與指標(biāo)測定

于試驗(yàn)18 d時(shí)，摘除小鼠眼球并采血，分離血清，3 000 r/min離心10 min，收集上清液，-20 ℃保存。

免疫比濁法檢測免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)含量、補(bǔ)體(C3、C4)水平，比色法檢測T-AOC、羥胺法檢測SOD活性、TBA法檢測MDA含量，具體操作步驟參照試劑盒說明書。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,LSD 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 RPFRE對小鼠IgA、IgM、IgG含量的影響

RPFRE對免疫抑制小鼠IgA、IgM、IgG的影響見表1。與CK組比較，CY組小鼠IgA、IgG含量均極顯著降低(P<0.01)，IgM含量顯著降低(P<0.05)；與CY組相比，RPFRE低劑量組IgA含量顯著上升(P<0.05)， RPFRE中、高劑量組含量極顯著上升(P<0.01)，RPFRE高劑量組IgG、IgM含量，中劑量組IgG含量均顯著增加(P<0.05)。說明RPFRE能夠不同程度地促進(jìn)免疫抑制小鼠免疫球蛋白分泌。

表1 RPFRE對小鼠IgA、IgM、IgG含量的影響 mg/L

2.2 RPFRE對小鼠補(bǔ)體C3、C4水平的影響

RPFRE對免疫抑制小鼠補(bǔ)體C3、C4的影響見表2。與CK組相比，CY組小鼠C3、C4含量均極顯著降低(P<0.01)；與CY組相比，RPFRE中、高劑量組小鼠C3、C4含量升高極顯著(P<0.01)。

表2 RPFRE對小鼠補(bǔ)體C3、C4水平的影響 mg/L

2.3 RPFRE對小鼠抗氧化指標(biāo)的影響

RPFRE對免疫抑制小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響結(jié)果見表3。CY與CK組相比，CY組小鼠的T-AOC和SOD活性均明顯降低(P<0.01)，而MDA含量升高(P<0.05)。與CY組相比，RPFRE低劑量組T-AOC活力和SOD活性均明顯升高(P<0.01)；RPFRE中劑量組SOD活性升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.05)；RPFRE高劑量組的T-AOC、SOD活性均升高(P<0.01)，而MDA含量則下降(P<0.05)。

表3 RPFRE對小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

免疫球蛋白是機(jī)體重要的防御物質(zhì)，他們廣泛存在于血液、組織液和各種體液當(dāng)中，在一定程度上反映了機(jī)體的免疫功能[9]。其中，IgG是抗感染最主要的免疫球蛋白，占血清的75%～80%；IgM是循環(huán)系統(tǒng)中最大的抗體，在動物體的體液免疫中首先產(chǎn)生應(yīng)答[10-11]。補(bǔ)體C3、C4是一組存在于組織液及血清中的具有酶活性的球蛋白，可直接反映機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)功能狀態(tài)[12]。在藥學(xué)等研究領(lǐng)域，CY常用于建造免疫功能低下或免疫功能抑制狀態(tài)的動物模型。連續(xù)3 d腹腔注射80 mg/kg CY可以構(gòu)建良好的免疫抑制小鼠模型[13]。進(jìn)一步研究表明，上述劑量的CY可抑制DNA的復(fù)制、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低免疫細(xì)胞免疫功能，使機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)[14]。研究表明，海膽多糖[15]、銀杏外種皮多糖[16]、太子參莖葉多糖[17]、樟芝多糖[18]、荔枝果肉多糖[19]、水溶性紫薯多糖[20]和組培蟲草花多糖[21]能提高CY 所致免疫抑制小鼠IgA、IgG、IgM含量，黃芪多糖能夠提高CY 小鼠血清IgG、IgM含量[22]，太子參莖葉多糖能提高C3、C4含量[17]，人參皂苷Rg3能提高CY 所致免疫抑制小鼠IgG含量[23]。本研究結(jié)果顯示，高劑量RPFRE能提高小鼠血清IgM、IgG、IgA含量，RPFRE各劑量組均能提高補(bǔ)體水平。表明RPFRE能提高免疫低下小鼠的體液免疫功能。

正常情況下，生物體內(nèi)的氧自由基(ROS)處于動態(tài)平衡[24]。但在疾病或某些因素的作用下，抗氧化系統(tǒng)發(fā)生紊亂，ROS 代謝平衡失調(diào)，導(dǎo)致生物膜和大分子物質(zhì)受到損傷[25]。T-AOC 是機(jī)體內(nèi)各種抗氧化酶的活性的綜合體現(xiàn)，是機(jī)體總的抗氧化能力；SOD 是生物機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的一種可以保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整和功能健全的酶，MDA 是機(jī)體的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，間接反應(yīng)氧自由基對細(xì)胞損傷的程度[26]；而CY 能通過抑制機(jī)體免疫功能，使得機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化狀態(tài)向氧化方向偏斜，誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激[27]。CY 還會增加小鼠血清中ROS的含量，降低T-AOC 含量，造成氧化還原系統(tǒng)失衡[28-29]。研究表明，抗氧化劑可以保持細(xì)胞膜的完整性，有利于免疫細(xì)胞發(fā)揮正常的免疫功能[30]；而植物多糖和皂苷成分可以通過活化抗氧化轉(zhuǎn)錄因子，激活信號通路，上調(diào)抗氧化酶表達(dá)，中和過量的ROS來達(dá)到抗氧化的目的[31-32]。研究表明，赤靈芝多糖能提高免疫抑制小鼠血清和肝臟組織中GSH-Px、SOD、T-AOC水平，降低MDA 的含量[33]；蟲草花多糖和黃梨渣多糖能提高CY小鼠的心、肝、腎組織中GSH-Px、SOD、T-AOC水平和降低MDA的含量[22，33]；人參皂苷Rg3能提高CY所致氧化應(yīng)激小鼠血清CAT、SOD活性，降低MDA含量[34]。本研究結(jié)果顯示，CY組小鼠的T-AOC、SOD活性降低，MDA含量升高；給予RPFRE后，T-AOC含量和SOD活性升高，MDA含量降低，表明RPFRE能提高免疫低下小鼠抗氧化功能。

綜上，RPFRE能提高CY所致免疫低下小鼠的體液免疫功能和抗氧化功能，究其原因，可能與RPFRE所含的多糖和皂苷相關(guān)，關(guān)于太子參參須多糖、皂苷單獨(dú)或聯(lián)合對免疫低下小鼠免疫功能和抗氧化功能影響有待于進(jìn)一步深入研究。