Linc00152在人肝細胞癌組織中的表達及與患者預后的關系

唐世磊 李宏武

中國醫科大學附屬第四醫院第三普通外科 （遼寧 沈陽，201508）

肝細胞肝癌（LIHC）占原發性肝癌的85%以上，是我國第4位常見的惡性腫瘤，其發病率高，預后差。LIHC惡性程度較高，多數患者發現時已為進展期［1］，手術根治成功率及生存率普遍較低。因此，探索影響LIHC患者預后的潛在治療靶點或分子機制對改善患者預后有重要價值。長鏈非編碼RNA（Lnc RNA）是長度超過200個核苷酸的內源性小RNA，其不具備蛋白質編碼功能，但越來越多的研究顯示，IncRNAs與多種腫瘤的發生、發展、轉移密切相關［2］。近來研究發現Linc00152作為IncTNAs中的成員之一，具有參與調控細胞骨架改變的潛在功能，且在多種癌組織中表達顯著上調［3］。本研究分別檢測Linc00152在LIHC癌與癌旁組織中的表達情況，并分析其與臨床病理特征及與患者預后的關系，以探索Linc00152在LIHC中的功能，并探討其作為肝癌潛在治療靶點的可行性。

1 資料與方法

1.1 人體組織標本 80例人LIHC組織及其配對的癌旁組織由2012年1月至2014年1月于中國醫科大學腫瘤醫院確診為LIHC經手術治療并經患者簽署知情同意書后取得。以80例患者肝癌組織中Linc00152相對表達量的中位數（19.87）為分界線，其表達量≥19.87的患者40例，為高表達組；表達量＜19.87的患者40例為低表達組。兩組患者術前均未接受化療及放療。80例患者中，男50例，女30例；年齡37～76歲，中位年齡62歲，其中≤60歲44例，＞60歲36例；腫瘤直徑≤3 cm 50例，＞3cm 30例；術中或術后病理提示有淋巴結轉移者14例，無淋巴結轉移者66例。按國際抗癌聯盟（UICC）分期標準［4］進行分期：Ⅰ期＋Ⅱ期50例，Ⅲ期＋Ⅳ期30例。同時取癌旁組織標本（距離腫瘤＞2 cm）作為對照。肝癌組織及癌旁組織標本切除后，立即應用液氮快速冷凍儲存以供實時熒光定量PCR檢測。組織病理學評估均由兩位高年資病理醫生獨立觀察，確診為LIHC并復查無誤。所有標本檢測均經患者及其家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 RNA的提取和實時熒光定量PCR檢測 用Trizol試劑提取組織總RNA，根據試劑盒說明書步驟進行實時熒光定量PCR檢測。反轉錄反應為20μl反應體系，反應條件為90°10 min，95°15 s，60°1min，40個循環。采用相對定量法，測定目的基因、GAPDH的PCR產物的Ct值，以2-ΔΔCt計算目的基因相對表達量，每例設3個復孔，實驗重復3次。Lnc00152基因的上游引物序列為：5’-AAAATCACGACTCAGCCCCCC-3’；Inc00152基因的下游引物序列為：5’-AATGGGAAACCGACCAGACC-3’；GAPDH基因的上游游引物序列為；5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3；GAPDH基因的下游引物序列為：5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。

1.3 TCGA數據庫 通過GEPIA［5］（http：／／gepia.cancer-pku.cn）獲取TCGA 數據庫中LIHC的RNA 表達數據并分析Linc00152的表達與無生病生存時間（DFS）、總有生存期（OS）的關系。

1.4 統計學方法 數據采用SPSS 17.0統計軟件和GEPIA生存分析功能。Linc00152表達水平與各臨床病理參數關系分析采用χ2檢驗；Linc00152表達與肝癌患者OS、DFS之間的關系采用Kaplan-Meier法分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Linc00152在LIHC癌和癌旁組織中的表達情況 見圖1。

2.2 肝癌組織中Linc00152高、低表達兩組患者臨床各參數比較情況 見表1。

表1 兩組患者臨床參數比較 （例）

2.3 Linc00152在正常肝組織（距癌腫5cm以上）和肝癌組織中的表達情況 見圖2。

2.4 Linc00152在肝癌不同分期的表達情況 見圖3。

2.5 兩組患者OS與DFS比較 見表2。

表2 兩組患者OS與DFS比較 （例）

3 討論

近來隨著基因測序計數和生物信息學的迅速發展，越來越多的LncRNA被發現與惡性腫瘤的發生發展相關［6］。盡管有很大一部分LncRNA被測序和命名，僅有一少部分LncRNA有功能，且有功能的LncRNA分子機制大多需要進一步驗證，因此，就現有研究來看，探究LncRNA對預后評估的應用價值具有可靠性。

Linc00152也稱細胞骨架調節因子（CRTOR），最初在研究肝癌的發生過程中被發現，具有調控基因表達的功能，在多種癌癥中起關鍵的促癌作用［7，8］。Linc00152因在多種腫瘤中存在異常表達，因此倍受重視［9，10］。

在本研究中，我們首先通過大體標本分析了LIHC癌與癌旁組織中Linc00152的表達情況，發現Linc00152在LIHC癌組織中的表達比較在癌旁組織中的表達明顯上調，這與Linc00152在胃癌、結腸癌、腎細胞癌等癌組織中表達明顯高于癌旁組織的研究結果一致［12］。此外，我們通過TCGA數據庫分析一方面驗證了Linc00152在LIHC中高表達的情況，還進一步發現Linc00152不僅在不同分析LIHC中相對表達量存在顯著差異，而且Linc00152的高表達與LIHC患者預后呈顯著相關性。有細胞機制方面的研究從細胞分子水平驗證了Linc00152對肺癌、腎細胞癌、肝癌等腫瘤惡性生物學行為的促進影響［13-15］。IncRNA的促腫瘤作用可能通過IncRNA-miRNA相關的ceRNA機制或IncRNA-蛋白質相互作用機制實現［16］，這仍是目前國內外研究的熱點。

綜上所述，Linc00152的高表達預示LIHC患者預后較差，Linc00152可能是LIHC預后檢測的分子標志物及治療的潛在分子靶點，但其具體作用機制還需要進一步深入研究。