HPLC切換波長法同時測定桑菊消腫貼膏中7種成分含量

孟瑞超，程江雪，劉貝佳，郭東艷，史亞軍，張小飛，鄒俊波

論著·中藥研究與開發(fā)

HPLC切換波長法同時測定桑菊消腫貼膏中7種成分含量

孟瑞超1，程江雪1，2，劉貝佳1，郭東艷1，2，史亞軍1，2，張小飛1，2，鄒俊波1，2

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046；2.陜西省中藥基礎(chǔ)與新藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 咸陽 712046

采用反相高效液相色譜切換波長法建立同時測定桑菊消腫貼膏中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷和丹皮酚7種成分含量的方法。采用WondaCract ODS-2色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-0.5%磷酸水＋0.1 moL/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.8 mL/min，柱溫40 ℃，檢測波長分別為210 nm（綠原酸）、230 nm（芍藥苷）、325 nm（阿魏酸）、344 nm（蘆丁、異槲皮苷）、351 nm（木犀草苷）、275 nm（丹皮酚）。綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷和丹皮酚的質(zhì)量濃度分別在0.057 8～2.888 0 μg（＝0.999 9）、0.096 4～4.820 0 μg（＝0.999 8）、0.028 2～1.410 0 μg（＝0.999 5）、0.045 8～2.284 0 μg（＝0.999 5）、0.052 6～2.633 0 μg（＝0.999 6）、0.015 4～0.768 0 μg（＝0.999 6）、0.030 6～1.526 0 μg（＝0.999 5）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，儀器精密度及樣品穩(wěn)定性均良好，平均回收率依次為96.29%（RSD＝1.84%）、97.23%（RSD＝1.02%）、97.72%（RSD＝1.82%）、100.47%（RSD＝1.27%）、100.10%（RSD＝1.26%）、99.40%（RSD＝2.90%）、99.87%（RSD＝2.98%）。本研究建立的測定方法準(zhǔn)確可靠、操作簡便、重復(fù)性好，可用于桑菊消腫貼膏中7種成分的含量測定。

桑菊消腫貼膏；高效液相色譜法；含量測定；綠原酸；芍藥苷；阿魏酸；蘆丁；異槲皮苷；木犀草苷；丹皮酚

桑菊消腫方是陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，由桑葉、野菊花、決明子、赤芍、當(dāng)歸、枸杞子組成，具有清熱、利水、解毒、明目功效，用于治療肝氣郁結(jié)、肝膽火熾、陰虛陽亢所致目赤腫痛、頭目眩暈等，也可用于治療急慢性閉角型青光眼。文獻(xiàn)報道血瘀證及白細(xì)胞介素（IL）-1、腫瘤壞死因子（TNF）-α等炎癥因子與青光眼有關(guān)[1-2]。現(xiàn)代藥理研究表明，眼壓每降低1.0 mm Hg，視神經(jīng)損害的風(fēng)險可降低10%[3]。本課題組前期將桑菊消腫方制備成凝膠貼膏劑并經(jīng)皮給藥，結(jié)果顯示其對水負(fù)荷法建立的高眼壓模型家兔的眼壓具有明顯改善作用。桑葉、野菊花為方中君藥。桑葉主要化學(xué)成分包括黃酮類化合物如異槲皮苷等，桑葉乙醇提取物對小鼠巴豆油致耳腫脹顯示一定的抗炎活性，且對角叉菜膠致足浮腫具有明顯的抑制作用[4-6]；野菊花主要成分黃酮類和苯丙素類化合物，如木犀草苷、綠原酸等，野菊花總黃酮可通過降低宮頸炎SD大鼠體內(nèi)TNF-α等炎癥因子水平減輕其炎癥反應(yīng)，其主要成分綠原酸具有明確的抗炎作用[7-8]。決明子、赤芍為方中臣藥。決明子水煎劑對視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)與功能具有明顯的改善和促進(jìn)作用，對視神經(jīng)有保護(hù)作用，可防治眼結(jié)膜炎、青光眼等疾病[9]；赤芍主要活性成分芍藥苷具有明確的活血作用，且可抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β上調(diào)，抑制β-抑制蛋白2抗體的表達(dá)，降低炎癥因子水平[10-12]。當(dāng)歸、枸杞子為方中佐藥。當(dāng)歸對實(shí)驗(yàn)性高眼壓所致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡具有明確的抑制作用，其主要活性成分阿魏酸具有補(bǔ)血活血、抗炎作用[13-14]；枸杞子保肝明目，枸杞多糖對糖尿病視網(wǎng)膜病變具有抗炎作用[15]。本研究采用HPLC切換波長法，以具有活血及抗炎作用的綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷及丹皮酚為指標(biāo)，建立桑菊消腫貼膏含量測定方法，以更好地控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

U3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），KH-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），ISO9001十萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

藥物飲片均購自陜西興盛德藥業(yè)有限責(zé)任公司，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室程虎印副教授鑒定，野菊花（產(chǎn)地安徽）為菊科植物野菊L.的干燥頭狀花序，枸杞子（產(chǎn)地寧夏）為茄科植物寧夏枸杞L.的干燥成熟果實(shí)，決明子（產(chǎn)地安徽）為豆科植物決明L.的干燥成熟種子，桑葉（產(chǎn)地四川）為桑科植物桑L.的干燥葉，赤芍（產(chǎn)地山西）為毛茛科植物芍藥Pall.的干燥根，當(dāng)歸（產(chǎn)地甘肅）為傘形科植物當(dāng)歸（Oliv.）Diels的干燥根。對照品綠原酸（批號Y24J7K16726，純度≥98%）、芍藥苷（批號X12A8C33672，純度≥98%）、阿魏酸（批號H27J7L16718，純度≥98%）、蘆丁（批號Y16M9S61523，純度≥98%）、異槲皮苷（批號P28S8F45095，純度≥98%）、木犀草苷（批號Y26A9H59973，純度≥98%）、丹皮酚（批號Y27F7Y17002，純度≥98%），上海源葉生物科技有限公司。甲醇、乙腈為色譜純（Fisher公司），水為純凈水（娃哈哈集團(tuán)有限公司），其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備

分別精密稱取綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚對照品適量，置5 mL容量瓶中，分別加甲醇適量，超聲溶解并稀釋至刻度，得濃度分別為綠原酸1.44 mg/mL、芍藥苷2.41 mg/mL、阿魏酸1.41 mg/mL、蘆丁1.14 g/mL、異槲皮苷3.95 g/mL、木犀草苷0.38 g/mL、丹皮酚2.29 g/mL的對照品溶液，置-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 供試品溶液制備

取處方量藥物，加10倍量水回流提取2次，每次2 h，將藥液濃縮為相當(dāng)于原藥材1 g/mL的浸膏；取處方量明膠、阿拉伯膠和西黃蓍膠，加水溶解，并向其中加入處方量的吐溫80和甘油，混合均勻；依次向其中加入Al（OH）3、檸檬酸及二氧化鈦，混勻，得基質(zhì)；在50 ℃水浴恒溫加熱條件下，將上述浸膏與基質(zhì)以1∶1比例攪拌混勻，趁熱涂布于無紡布上，放至室溫后與聚乙烯薄膜進(jìn)行壓制，即得。

取上述桑菊消腫貼膏，除去蓋襯，刮取含藥基質(zhì)約3.0 g，精密稱定1.0 g，精密加入2倍硅藻土，研磨，使凝膠分散均勻，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30 mL，超聲提取（功率100 W，頻率60 kHz）30 min，放至室溫，精密稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)充減失的質(zhì)量，振搖使分散均勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對照溶液制備

制備不含藥物提取物的凝膠貼膏，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.4 色譜條件

色譜柱為WondaCract ODS-2（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相A為乙腈、B為0.5%磷酸水與0.1 moL/L磷酸二氫鈉按1∶1比例混合，梯度洗脫（0～80 min，12%→13%A；80～90 min，13%→65%A；90～100 min，65%→65%A），流速0.8 mL/min，柱溫40 ℃，檢測波長分別為210 nm（0～20 min，綠原酸）、230 nm（20～35 min，芍藥苷）、325 nm（35～50 min，阿魏酸）、344 nm（50～80 min，蘆丁、異槲皮苷）、351 nm（80～90 min，木犀草苷）和275 nm（90～100 min，丹皮酚）。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取“2.1”項(xiàng)下對照品溶液各1 mL，置同一10 mL量瓶中，搖勻，稀釋至刻度，得混合對照品溶液。分別精密移取上述混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各20 μL，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定。結(jié)果表明，該方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

2.5.2 線性關(guān)系考察

精密量取“2.5.1”項(xiàng)下混合對照品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成系列混合對照品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，以色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚的回歸方程及線性范圍，見表1。

2.5.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.5.1”項(xiàng)下混合對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚峰面積RSD分別為0.61%、0.61%、0.57%、0.63%、0.39%、0.82%、0.11%，表明儀器精密度良好。

注：A.混合對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.綠原酸；2.芍藥苷；3.阿魏酸；4.蘆丁；5.異槲皮苷；6.木犀草苷；7.丹皮酚

表1 7種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

成分 回歸方程相關(guān)系數(shù)線性范圍/μg 綠原酸Y＝229.19X－0.151 50.999 90.057 8～2.888 0 芍藥苷Y＝149.08X－0.083 70.999 80.096 4～4.820 0 阿魏酸Y＝339.7X－0.0350.999 50.028 2～1.410 0 蘆丁Y＝201.01X－0.541 10.999 50.045 8～2.284 0 異槲皮苷Y＝301.6X－0.440 90.999 60.052 6～2.633 0 木犀草苷Y＝256.57X－0.226 80.999 60.015 4～0.768 0 丹皮酚Y＝694.83X－0.724 80.999 50.030 6～1.526 0

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h注入高效液相色譜儀，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件，測定峰面積。結(jié)果綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚峰面積RSD分別為1.80%、1.31%、1.56%、1.78%、1.38%、1.38%、1.21%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算各成分含量及RSD。結(jié)果樣品中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚含量分別為0.562 3、4.152 2、0.042 4、0.145 6、0.076 6、0.038 5、0.047 2 mg/g，RSD分別為0.92%、0.85%、2.34%、1.90%、2.12%、1.93%、2.48%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取1.0 g同一批次桑菊消腫貼膏，分別按各成分質(zhì)量濃度的150%、100%、50%精密加入“2.1”項(xiàng)下各對照品溶液，各3份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，結(jié)果綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚的平均回收率分別為96.29%、97.23%、97.72%、100.47%、100.10%、99.40%、99.87%，RSD分別為1.84%、1.02%、1.82%、1.27%、1.26%、2.90%、2.98%，見表2～表8。

表2 綠原酸加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.050.561 00.281 60.837 298.0896.291.84 1.110.564 60.281 60.839 797.70 1.060.560 30.281 60.836 598.07 1.010.550 10.563 21.087 795.45 1.040.566 40.563 21.089 992.94 1.050.569 90.563 21.093 394.53 1.080.571 20.837 51.376 296.12 1.130.575 50.837 51.380 596.12 1.070.561 80.837 51.379 197.59

表3 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.054.124 52.048 5 6.108 796.8697.231.02 1.094.126 22.048 5 6.107 396.71 1.074.105 72.048 5 6.096 996.52 1.124.206 94.097 0 8.089 795.99 1.084.145 94.097 0 8.103 896.60 1.054.125 24.097 0 8.097 996.97 1.104.126 46.145 510.204 198.90 1.064.165 56.145 510.199 698.19 1.034.144 76.145 510.189 798.36

表4 阿魏酸加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 0.930.041 70.021 20.062 296.7097.721.82 1.010.043 70.021 20.063 995.45 0.960.040 70.021 20.060 894.80 0.910.041 30.042 30.082 898.01 0.930.041 50.042 30.083 799.75 0.980.042 80.042 30.084 197.69 0.920.039 80.063 50.102 598.78 0.940.041 10.063 50.103 698.36 0.970.040 90.063 50.104 499.94

表5 蘆丁加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.050.153 60.074 20.228 9101.21100.471.27 1.060.149 40.074 20.223 1 99.29 1.040.148 80.074 20.223 7100.95 1.010.147 10.148 50.294 5 99.23 1.050.153 00.148 50.298 9 98.27 1.100.150 30.148 50.300 4101.11 1.070.155 90.222 70.379 8100.55 1.030.150 10.222 70.375 7101.32 1.090.151 50.222 70.379 3102.28

表6 異槲皮苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.010.079 10.039 50.118 5 99.75100.101.26 1.020.079 80.039 50.120 1102.02 0.980.079 70.039 50.118 9 99.21 1.000.081 30.079 00.158 9 98.18 0.990.081 00.079 00.160 3100.35 0.960.080 10.079 00.158 5 99.26 0.970.078 90.118 50.198 3100.76 0.950.077 30.118 50.197 9101.79 0.990.080 50.118 50.198 5 99.56

表7 木犀草苷加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.010.037 70.019 20.057 1101.0499.402.90 1.070.039 80.019 20.058 3 96.27 1.050.039 30.019 20.057 7 95.83 0.990.038 50.038 40.076 8 99.64 1.030.038 30.038 40.077 1100.97 1.010.037 60.038 40.074 8 96.92 1.060.039 40.057 60.099 4104.09 1.020.038 00.057 60.094 1 97.47 1.030.038 90.057 60.097 8102.21

表8 丹皮酚加樣回收率試驗(yàn)

取樣量 /g樣品中 含量/mg加入量 /mg測得量 /mg回收率 /%平均回 收率/%RSD /% 1.070.047 70.022 90.071 9105.6899.872.98 1.050.046 90.022 90.069 6 99.10 1.010.045 40.022 90.068 8102.21 1.060.047 40.045 80.093 5100.74 1.080.047 00.045 80.091 1 96.36 1.100.046 40.045 80.091 7 98.97 1.040.046 20.068 70.115 8101.38 1.020.045 70.068 70.112 1 96.58 1.050.045 90.068 70.113 1 97.81

2.6 樣品含量測定

取3批桑菊消腫貼膏，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算樣品中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷、丹皮酚的含量，結(jié)果見表9。

表9 3批桑菊消腫貼膏中7種成分含量測定結(jié)果（mg/g，n＝3）

成分201812312019011020190114均值 綠原酸0.573 10.557 60.561 20.564 0 芍藥苷4.104 94.165 04.204 54.158 1 阿魏酸0.041 80.042 80.043 70.042 8 蘆丁0.147 00.149 30.148 00.148 1 異槲皮苷0.077 60.077 70.079 00.078 1 木犀草苷0.037 70.039 50.037 90.038 4 丹皮酚0.046 40.049 90.047 90.048 1

3 討論

本研究建立了桑菊消腫貼膏中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷和丹皮酚7種成分的含量測定方法，方法學(xué)考察結(jié)果表明，儀器精密度良好，方法重復(fù)性好，供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果可靠，操作簡便，能夠準(zhǔn)確測定桑菊消腫貼膏中上述7種成分的含量，可為桑菊消腫貼膏的質(zhì)量控制提供基礎(chǔ)。

桑菊消腫貼膏處方藥物成分種類較多，為便于制劑的質(zhì)量控制，本研究在前期文獻(xiàn)調(diào)查基礎(chǔ)上，選擇了明確具有消腫作用的7種成分作為指標(biāo)測定其含量。試驗(yàn)采用紫外分光光度計(jì)對各成分進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果顯示，綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、木犀草苷和丹皮酚分別在波長210、230、325、350、275 nm處有最大吸收，蘆丁和異槲皮苷在波長344 nm處有最大吸收，為提高測定的靈敏度和準(zhǔn)確性，本研究采用變換波長法檢測上述7種成分。

為確保7種成分的有效分離，本研究采用梯度洗脫，前期考察了不同流動相系統(tǒng)（0.1%、0.2%、0.5%磷酸水溶液，0.1、0.2、0.5 mol/L的磷酸二氫鈉水溶液）及不同梯度對各成分分離的影響，最終確定以乙腈（A）-0.5%磷酸水與0.1 mol/L磷酸二氫鈉1∶1混合（B）作為流動相進(jìn)行梯度洗脫。在優(yōu)選的梯度條件下，由于異槲皮苷與木犀草苷的分離度不好，因此，進(jìn)一步考察了不同柱溫（25、30、35、40 ℃）對成分分離的影響，結(jié)果表明，當(dāng)柱溫為40 ℃時，保留時間適中，陰性對照無干擾，分離度良好，峰形對稱。

在供試品溶液的制備中，對不同提取時間（10、30、45 min）和提取頻率（40、60、80、100 Hz）對提取率的影響進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，提取30 min的提取率大于提取10 min，而與45 min差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；提取頻率為60 Hz時提取率較40 Hz高，而與80 Hz和100 Hz差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，最終確定為頻率60 Hz超聲提取30 min。該方法簡便，可行性高，可作為桑菊消腫貼膏供試品溶液制備方法。

本研究測得每片桑菊消腫貼膏中綠原酸、芍藥苷、阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷、木犀草苷和丹皮酚的平均含量分別為1.692 0、12.474 3、0.128 4、0.444 3、0.234 3、0.115 2、0.144 3 mg。桑菊消腫貼膏中上述7種成分的最低含量限度應(yīng)結(jié)合原藥材產(chǎn)地、采收期、生長年限的影響進(jìn)行綜合考慮，并通過進(jìn)一步的藥效學(xué)試驗(yàn)確定。

[1] 任澤欽.青光眼局部降眼壓藥專家共識和一線藥物的發(fā)展[J].眼科, 2012,21(1)：11-13.

[2] 蔣鵬飛,沈志華,周亞莎,等.活血化瘀中藥在青光眼中的應(yīng)用進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥,2019,50(2)：68-71.

[3] LESKE M C, HEIJL A, HUSSEIN M, et al. Factors for glaucoma progression and the effect of treatment：the early manifest glaucomatrial[J]. Archives of Ophthalmology,2003,121：48-56.

[4] JEONG J W, LEE H H, LEE K W, et al. Mori folium inhibits interleukin-1β-induced expression of matrix metalloproteinases and inflammatory mediators by suppressing the activation of NF-κB and p38MAPK in SW1353 human chondrocytes[J]. International Journal of Molecular Medicine,2016,37(2)：452-460.

[5] 李銀.桑葉的抗炎抑菌活性部位化學(xué)成分研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué),2003.

[6] 陳福君,林一星,許春泉,等.桑的藥理研究(Ⅱ)——桑葉、桑枝、桑白皮抗炎藥理作用的初步比較研究[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,1995,12(3)：222-224.

[7] 易玲,易莉,汪良.野菊花總黃酮對宮頸炎模型大鼠IL-Iβ、PGE2和TNF-α表達(dá)的影響[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,15(5)：24.

[8] 鄭璐璐,張貴君,王晶娟,等.野菊花藥效組分抗炎的生物效應(yīng)研究[J].天津中醫(yī)藥,2011,28(3)：251-253.

[9] 王琳,吳宗梅,李升和.決明子水煎劑對大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)的影響[J].中國畜牧業(yè),2016(6)：56-58.

[10] GUO R B, WANG G F, ZHAO A P, et al. Paeoniflorin protects against ischemia-induced brain damages in rats via inhibiting MAPKs/ NF-кB-mediated inflammatory responses[J]. PLoS One,2012,7(11)：e49701.

[11] WU H X, CHEN J Y, WANG Q T, et al. Expression and function of β-arrestin 2 stimulated by IL-1β in human broblast-like synoviocytes and the effect of paeoniflorin[J]. Int Immunopharmacol,2012,12(4)：701-706.

[12] 周婷,趙福濤,王漢偉,等.芍藥苷對膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎模型的治療作用及機(jī)制[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(5)：2047-2050.

[13] 鄭慧芬.當(dāng)歸補(bǔ)血湯抑制慢性青光眼大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2006,8(5)：41-42.

[14] 吳建良,沈敏敏,楊水新,等.阿魏酸對小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)的抑制作用[J].中國藥理學(xué)通報,2015,31(1)：97-102.

[15] 張慧西,薛凱,高偉,等.枸杞多糖對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜內(nèi)血管新生及氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)的抑制作用[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2016, 22(20)：2365-2368.

Simultaneous Determination of Seven Components inGel Plaster by HPLC Wavelength Switching Method

MENG Ruichao1, CHENG Jiangxue1,2, LIU Beijia1, GUO Dongyan1,2, SHI Yajun1,2, ZHANG Xiaofei1,2, ZOU Junbo1,2

To establish a wavelength switching method for simultaneous determination of chlorogenic acid, paeoniflorin, ferulic acid, rutin, isoquercitrin, luteoloside, and paeonol inGel Plaster.The WondaCract ODS-2 chromatographic column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was used for the separation, with gradient elution. The mobile phase was acetonitrile and 0.5% phosphoric acid solution with 0.1 moL/L sodium dihydrogen phosphate at a flow rate of 0.8 mL/min. The column temperature was 40 ℃. The detection wavelength was set at 210 nm (chlorogenic acid), 230 nm (paeoniflorin), 325 nm (ferulic acid), 344 nm (rutin and isoquercitrin), 351 nm (luteoloside), and 275 nm (paeonol), respectively.The method achieved a good linearity in the liner ranges of 0.057 8?2.888 0 μg for chlorogenic acid (=0.999 9), 0.096 4?4.820 0 μg for paeoniflorin (=0.999 8), 0.028 2?1.410 0 μg for ferulic acid (=0.999 5), 0.045 8?2.284 0 μg for rutin (=0.999 5), 0.052 6?2.633 0 μg for isoquercitrin (=0.999 6), 0.015 4?0.768 0 μg for luteoloside (=0.999 6), and 0.030 6?1.526 0 μg for paeonol (=0.999 5). Degrees of precision of instrument and the stability of samples were good. The average recovery rates were 96.29% (RSD=1.84%), 97.23% (RSD=1.02%), 97.72% (RSD=1.82%), 100.47% (RSD=1.27%), 100.10% (RSD=1.26%), 99.40% (RSD=2.90%), and 99.87% (RSD=2.98%), respectively.The method established in this study is accurate, convenient and reproducible, which can be used for the content determination of seven components inGel Plaster.

Gel Plaster; HPLC; content determination; chlorogenic acid; paeoniflorin; ferulic acid; rutin; isoquercitrin; luteoloside; paeonol

R284.1

A

1005-5304(2020)08-0073-06

10.3969/j.issn.1005-5304.201910028

陜西省教育廳專項(xiàng)科研計(jì)劃（18JK0231）；國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（201710716015）；陜西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)科創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目（2019-YL11）

程江雪，E-mail：cjx511@sntcm.edu.cn

（2019-10-05）

（2019-11-11；編輯：陳靜）