西雙版納勐海縣育齡人群血常規及地中海貧血現狀分析

趙婷婷，胡艷麗，胡 滔，黃 羽，張 杰

（1） 昆明理工大學醫學院；2） 昆明醫科大學直屬單位黨委，云南昆明 650500；3） 云南省第三人民醫院檢驗科，云南昆明 650011；4） 西雙版納勐海縣婦幼保健院檢驗科，云南勐海 666200；5） 昆明理工大學附屬云南省第一人民醫院醫學遺傳科，云南省出生缺陷與遺傳病研究重點實驗室，云南昆明 650032）

地中海貧血（簡稱“地貧”） 是由珠蛋白基因缺失或突變導致肽鏈合成障礙而引起的單基因遺傳病，全世界地貧基因攜帶者約3.5 億人[1]。按照受累珠蛋白基因類型把地貧分為α-地貧、β-地貧、δ-地貧等幾種類型。地貧主要分布在地中海沿岸地區、非洲、印度次大陸、東南亞、中東和中國南方。地貧在我國廣東[2]、廣西[3]、貴州[4]、云南[5]、海南[6]較為高發。少數民族如傣族[7]、壯族[8]、黎族[9]是地貧高發的民族。云南省是我國民族種類最多的省份，也是地貧高發區域，云南省傣族人群的地貧攜帶率高達40%以上[10]。

西雙版納勐海縣位于云南省西南部，與緬甸接壤，是云南省地貧篩查陽性率較高的州市之一[11]。西雙版納勐海縣境內居住著傣族、哈尼族、拉祜族、布朗族、漢族、彝族、回族、佤族、白族、苗族、壯族、景頗族等25 個民族，其中傣、哈尼、拉祜、布朗是當地的四大主體民族。對該地區進行地貧流行情況，地貧突變的臨床血液學特征的研究，了解該地區育齡人群地貧的分布與特征，能對今后在該地區開展地貧防控項目奠定一定的基礎。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2014 年1 月至2019 年9 月期間在云南省西雙版納勐海縣婦幼保健院參與地貧防控項目的育齡人群共3 198 例為研究對象。受檢者為有生育計劃的婚檢夫婦或早孕期孕婦，來自于勐海縣下轄的六個鎮。受檢者的年齡在20～60 歲，統計人群的籍貫及民族信息。受檢者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血常規檢測與外周血DNA 提取 采用EDTA 抗凝劑真空采血管抽取患者外周血血樣3 mL，用Sysmex XE-5000 全自動血液細胞分析儀（日本Sysmex 公司） 進行血常規檢測，主要觀察的參數分別為紅細胞血紅蛋白量（hemoglobin，HGB）、平均紅細胞血紅蛋白量（meancorpuscular hemoglobin，MCH）、平均紅細胞體積（mean corpuscular volume，MCV）。正常參考值范圍：HGB：110～150 g/L，MCV：82～95 fl，MCH：27～31 pg，以MCV ＜80 fl 或MCH ＜27 pg 為篩查陽性標準（MCV 或MCH 單陽即為篩查陽性）。地貧的血液學表型陽性的檢測對象，使用外周血DNA 提取試劑盒進行全血基因組DNA 提取。

1.2.2 地貧基因檢測 采用非缺失型α-地貧基因檢測試劑盒檢測中國人群中常見的三種非缺失型α-地貧突變位點:αCSα、αQSα、αWSα。采用α-地貧基因檢測試劑盒（Gap-PCR 法） 檢測α-地貧常見的4 種缺失類型：東南亞缺失型（--SEA）、右側缺失型（-α3.7）、左側缺失型（-α4.2） 和泰國缺失型（--THAI）。采用β-地貧基因檢測試劑盒檢測17 種較為常見的β-地貧基因突變位點[12]。

1.3 統計學處理

利用GraphPad Prism 7.0 軟件進行數據分析，不同計數資料用%表示，計數數據水平均值和標準差，采用方差分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 民族與籍貫信息

研究對象為接受檢測的育齡人群，總數為3 198 例，籍貫為西雙版納3 196 例，包括傣族1 723 例、漢族627 例、哈尼族357 例、布朗族229 例、拉祜族178 例、彝族29 例、回族16 例、白族11 例、佤族10 例、苗族7 例、壯族6 例、布依族1 例、土家族1 例、蒙古族1 例。外籍2 例，包括老撾老龍族1 例和緬甸緬族1 例。

2.2 地中海貧血的基因檢測結果

在3 198 例受檢者中，血常規篩查陽性744例，占比23.26%（744/3 198）。篩查陽性病例行基因診斷，共確診148 例為地貧基因攜帶者，地貧確診陽性率為4.63%（148/3 198）。其中陽性檢出率最高的民族是傣族（7.66%，132/1 723），其次是漢族（1.59%，10/627）、拉祜族（1.69%，3/178）、哈尼族（0.56%，2/357）、布朗族（0.44%，1/129），見表1。共檢出共有12 種地貧突變類型，地貧基因突變類型及構成比見表2。其中，α-地貧的基因攜帶者93 例，--SEA（57.39%，66/115）最為常見，其次為-α3.7（29.57%，34/115）。β-地貧的基因攜帶者43 例，最常見的類型為CD26（G＞A） （40.00%，22/55），CD17 （A＞T）（30.91%，17/55），CD41-42 （-TTCT） （20.00%，11/55），α-地貧合并β-地貧12 例。對于α-地貧的血常規特征而言，--SEA較-α3.7型，其HGB 相對較低；--SEA較-α3.7型、-α4.2和αCSα型，其MCH 均相對較低，見表3。對于β-地貧而言，CD17 （A＞T） 較CD26 （G＞A），其MCV 及MCH 相對較低；CD41-42 （-TTCT） 較CD26（G＞A），其MCH 相對較低，見表4，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

地中海貧血是我國南方各省份影響最大發病率最高的遺傳病之一，α-和β-地貧是最常見，同時也是危害性最大的兩種類型。α-地貧分為由α-珠蛋白基因缺失引起的缺失型α-地貧和由α-珠蛋白基因點突變（αT） 引起的非缺失型α-地貧兩種類型，其中主要以缺失型α-地貧為主。α-珠蛋白基因位于16 號染色體上，其功能基因上有兩個高度同源的α-珠蛋白基因α2 和α1。β-地貧主要是由于β-珠蛋白基因發生了點突變造成的，其他少數是由基因缺失引起。血常規檢測地貧會出現小細胞低色素貧血改變，血紅蛋白電泳檢測地貧會有Hb A2 數值異常。傳統的方法使用血紅蛋白電泳和血常規作為地貧篩查的標準，血常規以MCV ＜80 fl 或MCH ＜27 pg 為篩查陽性標準，血紅蛋白電泳儀器費用較高，難以在基層普及。本研究主要探討使用血常規篩查地貧的適用性和準確性，為基層醫療單位對地貧疾病妊娠提供實驗室依據。

西雙版納勐海縣是少數民族聚居地區，該地區有25 個民族。筆者的結果顯示，地貧在傣族、漢族、哈尼族、拉祜族、布朗族這5 個民族中檢出。地貧以傣族最為常見，推測其原因，一是傣族是當地的主要民族，人口相對較多，二是傣族人群中地貧攜帶率較高[13]。哈尼族、拉祜族、布朗族也有地貧攜帶者，其人數較少，可能因為參與篩查的人數較少，擴大人數后才能得出更為準確的攜帶率情況。少數民族群眾地貧防控意識不夠，今后需要進一步宣教。

本次調查研究使用的傳統血常規篩查方法，α-地貧的基因突變類型以--SEA最為常見，β-地貧的突變類型以CD26 （G ＞A） 最為常見，該結果與云南省早前使用傳統方法的研究相類似[14]。然而，賀靜等[10]人使用新的二代測序進行篩查的結果卻顯示西雙版納地區常見的地貧類型為-α3.7，β-地貧常見的突變類型是CD26 （G＞A）。-α3.7型為靜止型α-地貧類型，只涉及一個α-珠蛋白的缺失，血液學檢測不一定出現明顯的小細胞低色素改變，單純采用血常規進行分析會導致出現漏診的情況；--SEA缺失型α-地貧涉及兩個α-珠蛋白的缺失，血常規分析能檢測出小細胞低色素貧血改變。選擇不同的篩查方法會得出不同的α-地貧構成比的結果，提示地貧會有漏診的可能。-α3.7攜帶者自身沒有明顯臨床癥狀，但是若合并--SEA（-α3.7/--SEA） 則為中間型的雙重雜合突變地貧，患者可能出現輕度到重度不同程度的貧血，因此對-α3.7型等靜止型地貧不能僅僅進行血常規分析。建議在地貧高發地區，基層醫院在對檢測結果存疑的情況下，應該選擇更為準確的方法如二代測序進行驗證。

表1 各民族不同地貧類型的陽性檢出率（n）Tab.1 Positive detection rate of different types of thalassaemia in ethnic groups （n）

表2 地貧基因突變類型例數及構成比Tab.2 Number and composition ratio of mutation types of thalassaemia genes

表3 α-地貧基因突變類型的血液學參數比較（±s）Tab.3 Comparison of hematological parameters of α-thalassemia gene mutation types （±s）

表3 α-地貧基因突變類型的血液學參數比較（±s）Tab.3 Comparison of hematological parameters of α-thalassemia gene mutation types （±s）

與--SEA 比較，*P＜0.05。

表4 β-地貧基因突變類型的血液學參數比較（±s）Tab.4 Comparison of hematological parameters of β-thalassemia gene mutation types （±s）

表4 β-地貧基因突變類型的血液學參數比較（±s）Tab.4 Comparison of hematological parameters of β-thalassemia gene mutation types （±s）

與同組CD26(G＞A)比較，*P＜0.05。

從各種地貧突變類型的血液學特征上分析，α-地貧攜帶者中，--SEA型的貧血癥狀較為明顯，-α4.2型貧血癥狀較輕，多為無癥狀的攜帶者。β-地貧貧血癥狀最為明顯的是CD17 （A＞T），CD17（A ＞T） 突變為終止密碼子，導致蛋白功能丟失，對血紅蛋白影響較大。β-地貧貧血癥狀最輕的是CD26 （G ＞A），雜合突變多為無癥狀的攜帶者。α-地貧合并β-地貧可以重新獲得珠蛋白表達的平衡，一般不會導致貧血癥狀的加重；夫妻雙方若一方α-地貧，另一份為β-地貧，理論上胎兒不會出現中重度地貧，可以不建議行胎兒產前診斷。從本研究的12 例α-地貧合并β-地貧病例來看，無一出現中重度貧血的癥狀，也部分支持上述觀點。

目前臨床主要通過血常規和血紅蛋白電泳對患者進行地貧篩查，沒有血紅蛋白電泳數據支持，且傳統的這兩種方法都存在一定的漏檢率，故勐海縣育齡人群地貧實際的攜帶率應比本研究的地貧陽性檢出率（4.63%） 要高。本研究在西雙版納勐海縣育齡人群進行地貧流行病學的調查研究，對降低本地區中重度地貧患兒出生有一定的指導意義，也有助于進一步完善該地區實驗室的地貧篩查指標，為地貧臨床遺傳咨詢提供可靠的理論依據。