塵肺并發肺結核患者外周血CD4+、CD8+T細胞計數和ADA水平改變及臨床意義*

王 維，何 杰，周 取，劉文彬

1.重慶市第六人民醫院實驗醫學中心，重慶400060；2.重慶市人文科技學院計算機工程學院，重慶 401524；3.重慶大學附屬腫瘤醫院肝膽胰腫瘤科，重慶 400030

塵肺病是由于工人長期吸入的礦物性粉塵在肺內潴留所致的以組織彌漫性纖維化為主要病變的全身性疾病，是我國發病率最高、危害最嚴重的職業病[1]。若粉塵長時間滯留在肺中，可直接或間接介導肺巨噬細胞、成纖維細胞和膠原蛋白積累，導致進行性缺血性壞死，間質纖維化和呼吸衰竭[2]。塵肺患者肺組織纖維化和大量巨噬細胞損傷等因素，為結核分枝桿菌的感染提供了有利機會，使肺結核成為塵肺病常見的并發癥，也進一步加速了塵肺患者病情發展[3-4]。有研究指出，塵肺病患者免疫細胞會延緩肺部纖維化并加速炎癥的消退，提示塵肺病患者免疫系統調節功能存在缺陷[5]。腺苷脫氫酶(ADA)在T淋巴細胞發育和分化中發揮著極其重要的作用，其活性與免疫功能密切相關，是活動性肺結核輔助性T淋巴細胞的重要標志物[6]。同時ADA對體內積液的結核感染具有一定的診斷價值。鑒于此，本文將對塵肺并發肺結核患者的外周血CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數和血清ADA水平進行特征分析，試圖通過對比研究探討其臨床意義，為塵肺并發肺結核感染的預防和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年 1 月至 2019 年11 月重慶市第六人民醫院門診及住院54例塵肺患者(塵肺組)和塵肺并發肺結核患者34例(塵肺并發肺結核組)作為研究對象，其診斷標準參照 GBZ70-2015《職業性塵肺病的診斷》和WS288-2017《肺結核診斷》標準[7-8]。排除骨折與骨質疏松、嚴重內分泌疾病和/或嚴重代謝疾病及嚴重肝、腎疾病患者。塵肺組中男39例、女15例，平均年齡為(56.9±1.9)歲；塵肺并發肺結核組中男25例、女9例，平均年齡為(59.6±2.7)歲。另選取本院體檢健康者33例作為對照組，其中男18例、女15例，平均年齡為(46.2±1.8)歲，對照組均無肺部疾患、無其他病變且各項生化、影像等檢測指標和表現均正常。

1.2方法 采集所有選入對象清晨空腹外周靜脈血6 mL，其中2 mL加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝管中,混勻后用于檢測CD4+、CD8+T細胞計數,另4 mL分離血清后檢測ADA水平。CD4+、CD8+T細胞計數檢測系統為SemiBio CD，儀器試劑均購自上海匯中細胞生物科技有限公司。細胞計數操作過程嚴格按說明書進行，主要分為稀釋血樣、孵育、洗染和計數，最后采用SemiBio CytoCounter 全自動細胞可視化檢測系統對玻片上的細胞放大成像，高速、精確掃描玻片上固定的細胞后自動定位、聚焦，根據特異性細胞標志識別并得出結果。血清ADA使用速率法在貝克曼 AU5800全自動生化分析儀進行檢測，檢測試劑采用重慶中元生物技術有限公司。

2 結 果

2.1各組CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數、CD4+/CD8+T細胞比值結果比較 塵肺組和塵肺并發肺結核組CD4+T細胞計數均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。與塵肺組相比，塵肺并發肺結核組CD4+T細胞計數明顯減少，差異具有統計學意義(P<0.05)。塵肺組和塵肺并發肺結核組CD8+T細胞計數均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。塵肺組CD8+T細胞計數高于塵肺并發肺結核組，差異有統計學意義(P<0.05)。塵肺并發肺結核組CD4+/CD8+T細胞比值均低于對照組和塵肺組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 各組CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數、CD4+/ CD8+ T細胞比值結果比較

注：NS表示兩組比較差異無統計學意義。

2.2各組ADA水平比較 對照組、塵肺組和塵肺并發肺結核組血清ADA水平分別為(11.47±3.97)U/L、(13.01 ±3.28)U/L和(20.79±4.78)U/L，塵肺并發肺結核組血清ADA水平均高于對照組和塵肺組，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖2。

圖2 各組血清ADA水平比較

2.3CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數與ADA水平相關性分析 塵肺組中CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數與血清ADA水平呈正相關(r=0.11、0.17，P=0.43、0.23)；塵肺并發肺結核組CD4+T細胞計數、CD8+T細胞計數與血清ADA水平呈負相關(r=-0.36、-0.31，P=0.03、0.07)。

3 討 論

塵肺患者因長期被粉塵刺激，氣道發生炎癥引起分泌物增加，氣道清除功能減弱，易被微生物定植和侵入。由于塵肺患者肺組織纖維化和部分免疫細胞吞噬清粉塵后裂解釋放炎癥因子等進一步加劇肺組織損傷，為結核分枝桿菌的生長繁殖創造了極好條件，使肺結核成為塵肺病常見的并發癥[3]。當塵肺并發肺結核后，結核分枝桿菌引的起免疫應答及病理改變使得病情進展迅速，病死率遠高于普通塵肺患者[3]。塵肺患者并發肺結核確診主要依賴于痰涂片、培養和病理學證據，但痰涂片、培養和病理學檢查陽性率較低，受取材等影響，易出現漏診。因此，尋找塵肺并發肺結核感染的實驗室檢測指標，及時診治，對改善患者的病情，有效控制肺結核在塵肺患者中的傳播意義重大。

肺結核的發生、發展和轉歸不僅與細菌的載量和毒力相關，而且受宿主免疫功能的影響[9-10]。宿主肺結核免疫以細胞免疫為主，也是反映宿主免疫功能的重要指標[11]。為進一步探討T淋巴細胞在塵肺并發肺結核中的作用，本研究比較了對照組、塵肺組和塵肺并發肺結核組CD4+T細胞計數和CD8+T細胞計數，與前期研究結果一致[12]，塵肺并發肺結核組CD4+T細胞計數和CD8+T細胞計數遠低于對照組和塵肺組，提示CD4+T細胞計數和CD8+T細胞計數檢測有望成為塵肺患者并發肺結核感染的輔助診斷指標。

ADA是體內參與嘌呤核苷酸代謝的酶類，主要存在于肺組織和部分淋巴細胞中[13]。在肺結核患者體內，T 淋巴細胞吞噬結核分枝桿菌后被破壞，大量ADA釋放入血，因此表現出患者受到結核分枝桿菌的感染時血清中ADA水平增加[14]。本研究發現，與對照組和塵肺組相比，塵肺并發肺結核組血中CD4+和CD8+T細胞計數都明顯減少，但ADA水平卻明顯增加，且CD4+T細胞計數與ADA水平呈負相關。本研究結果提示，動態監測塵肺患者淋巴細胞計數和ADA水平變化趨勢對并發肺結核感染的診斷具有一定的意義。

綜上所述，動態監測塵肺患者外周血T淋巴細胞和ADA水平對提示塵肺并發肺結核感染具有臨床意義。本研究的局限性在于未對各組T淋巴細胞計數和ADA水平繪制受試者工作特征曲線分析其在塵肺并發肺結核病診斷中的靈敏度和特異度。用最佳臨界值來鑒別塵肺患者是否伴發結核感染還需進一步擴大樣本量來探討。