RhD陰性獻血者鑒定結果分析

祝曉琴，鄧永福

眉山市中心血站， 四川眉山 620010

Rh血型系統是輸血醫學中僅次于ABO系統的第二大血型系統，Rh血型系統常見的抗原有D、C、c、E、e 5種，使用相應的抗D、抗C、抗c、抗E和抗e 5種血型試劑可以鑒定這些抗原。臨床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最強的抗原，也是最具有臨床意義的抗原，故一般只作D抗原鑒定，凡帶有D抗原者稱為Rh陽性，不帶D抗原者稱為Rh陰性。中國漢族人群中Rh陽性比例約為99.7%，Rh陰性比例0.2%～0.4%[1]。根據紅細胞表面D抗原的數量和質量不同及抗原性不同，將D抗原分為5種：(1)正常D，常見的D抗原。(2)弱D，D抗原數量減少，質量無變化。(3)部分D(表位不完全型D)，D抗原數量基本正常，但是缺失正常D抗原上部分抗原表位(質量減少)。(4)Del表型(表位不完全型弱D)，D抗原數量減少，缺失部分D抗原決定簇(質量減少)。(5)增強D，D抗原數量大量增多，抗原性極大增加。弱D、部分D、Del表型由于抗原數量或質量減少，不能用常規血清學方法檢出,需要通過間接抗人球蛋白試驗(IAT)、吸收放散或基因檢測方法證實其紅細胞膜上D抗原的存在。如果獻血者是弱D、部分D或Del表型，其血液輸給Rh陰性受血者，可能刺激受血者產生抗D抗體，導致受血者再次輸入弱D、部分D或Del表型血液時發生溶血性輸血反應。為了解本中心血站確認為RhD陰性的獻血者中，弱D、部分D、Del表型的比例，研究者作了進一步的鑒定和分析，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2003-2009年本中心血站確認為RhD陰性，愿意接受進一步鑒定的獻血者50例作為研究對象。

1.2主要試劑 RhD(IgM)血型定型試劑(上海血液生物醫藥有限責任公司)、RhD (IgG)血型定型試劑(北京金豪制藥股份有限公司)、抗D(IgM+IgG)血型定型試劑(英國Millipore公司)、抗人球蛋白試劑(IgG)檢測試劑(上海血液生物醫藥有限責任公司)。

1.3方法

1.3.1檢測方法 RhD血型常規檢測采用平板法，將檢測為RhD陰性的標本進行確認，確認采用試管法，用2種不同廠家生產的抗D試劑進行IAT，判讀并記錄實驗結果，所有操作嚴格按照試劑使用說明書進行。

1.3.2進一步鑒定方法 在中國醫學科學院北京協和醫學院輸血研究所進行鑒定。(1)血清學試驗：使用抗D(IgM+IgG)試劑進行鹽水法篩選RhD陰性標本；篩選為陰性的標本采用IAT進行弱D或部分D鑒定；IAT試驗采用人源性血清(中國醫學科學院輸血研究所、上海血液生物醫藥有限責任公司)和混合單克隆抗D[Rh1，批號:430000(DIAGAST)]；再使用人源抗D血清對剩余標本進行吸收放散試驗以檢測Del表型。初篩陰性標本采用血清學常規試管法做RhD表型鑒定，抗E(20090105)、抗e(00700001)、抗C(20070113)和抗c(00800002)(上海血液生物醫藥有限責任公司)。(2)基因組DNA制備：采用TIANGEN基因組DNA提取試劑盒,從乙二胺四乙酸抗凝的外周全血中制備基因組DNA,嚴格按照試劑說明書進行操作。(3)RhD的序列特異引物-聚合酶鏈反應(PCR-SSP)法基因分型：對IAT確定為弱D或部分D的陽性標本進行RhD 10個外顯子的檢測,采用10對針對RhD基因外顯子及側翼序列的PCR-SSP引物,特異擴增RhD的10個外顯子(測序PCR)，方法參照文獻[2]。

2 結 果

50例RhD陰性獻血者標本經IAT、吸收放散試驗和RhD基因分型檢測，檢測結果顯示，50例RhD陰性獻血者中檢出弱D、Del表型共17例，占34%。其中弱D 4例，占8%；Del表型13例，占26%。RhD陰性33例，占66%，其中Exon1-10全缺失29例，Exon3-9全缺失4例。見表1。

表1 50例RhD陰性獻血者鑒定結果

3 討 論

《全國臨床檢驗操作規程》中Rh血型鑒定，當獻血者初篩檢測為陰性時需進一步進行Rh陰性確認試驗，以排除弱D，但是如果檢測的是患者標本，則可不必再確認。弱D型鑒定采用的是試管法IAT，Del需通過更加敏感的吸收放散技術才能檢測到。中國人RhD陰性群體中10%～30%的個體是Del表型，這類表型的個體在受到D抗原免疫刺激時，幾乎不產生應答[3]。在臨床輸血中弱D型個體輸注RhD陽性紅細胞后可產生抗D抗體，所以受血者(患者)為弱D型，作Rh陰性論，應輸注Rh陰性血液；供血者(獻血者)為弱D型者，應作Rh陽性論，不應當輸血給Rh陰性的受血者[1]。

對血站已確認為RhD陰性的人群中，檢出弱D、部分D、Del表型早已有報道，只是檢出比例各方報道不同[3]。本研究50例確認試驗為RhD陰性的血液中檢出弱D、部分D比例、Del表型比例低于海南地區[4]，高于湖北[5]、云南[6]、安徽地區[7]。

弱D、部分D、Del表型的檢測在臨床輸血中具有比較重要的意義，弱D、部分D、Del表型只是紅細胞表面D抗原數量或質量減少，但是紅細胞表面仍然存在D抗原，仍具有一定的免疫原性。當Rh陰性受血者輸注弱D、部分D、Del表型血液后，可能會刺激受血者產生抗D抗體；受血者再次輸注RhD陽性紅細胞、弱D、部分D、Del表型血液時，可能會發生溶血性輸血反應，或者導致女性受血者懷孕時流產、新生兒溶血病等，給患者帶來輸血安全隱患[8]。

《血站技術操作規程》(2019版)規定，RhD陰性的結果應經過確認試驗，但并沒有指出確認試驗應采用的方法[9]。由于血站檢出技術和方法等原因，經過RhD陰性確認實驗，仍然有一定比例的弱D、部分D、Del表型血液無法檢出。對于一般的中心血站，使用抗C分型和吸收放散試驗鑒定可操作性比較強，但還需要相關數據研究和技術規范的支持。本鑒定結果分析提示，由于試劑、操作、方法等原因，血站提供給臨床的RhD陰性血液中仍有弱D、部分D和Del。