精子形態異常與體外受精移植周期助孕結局及新生兒畸形率的相關性分析

劉利敏， 吳志煥， 柯潔榮， 高彩鳳， 李敦高

(1.廣東省惠州市中心人民醫院生殖醫學中心， 廣東 惠 州 516000 2.河北工程技術學院， 河北 石家莊 050091)

近年來, 不孕不育癥已成為全球性的問題。不孕癥發病率約為10～15%，其中男性因素約占40%[1]。精子形態檢查是評估男性生育力的關鍵指標。精子形態與精子運動能力、穿透宮頸粘液的能力、頂體反應過程、穿透卵母細胞透明帶的能力密切相關。精子畸形率增高會延長自然受孕時間，也會增加自然流產的幾率[2]。而針對精子形態異常在體外受精移植周期助孕周期中對妊娠及妊娠結局的影響存在爭議，有研究報道精子形態異常會降低受精率，甚至完全不受精，部分精子形態畸形的患者通過輔助生殖技術可以成功受孕[3]，而在另一項研究中，精子形態異常對輔助助孕的妊娠率、抱嬰率及出生畸形率等均無顯著影響[4]。因此，本研究通過回顧性分析精子形態異常患者在本生殖醫學中心就診數據，評估精子形態異常在體外受精移植周期中的臨床妊娠率、早期流產率、抱嬰率、新生兒出生缺陷率等指標，評估精子形態異常對體外受精移植周期生殖結局的作用，為輔助生殖的安全性提供依據。

1 資料與方法

1.1研究對象:通過回顧性分析2013年1月至2020年1月在本生殖醫學中心首次做體外受精移植周期助孕期間的結果，共1820例。排除任何女方不孕的因素，包括年齡>38歲、卵巢功能不良、多囊卵巢綜合征、高泌乳素血癥、子宮內膜異位癥，遺傳性疾病家族史及先天性生殖道發育不全等。

1.2精液形態分析:在不孕癥的初步咨詢中，男性在禁欲2～7d后通過手淫法收集精液樣本，并評估了精子形態。精液的采集、處理及分析過程均依據WHO5相關標準，在輔助助孕周期之前至少對2個精液樣品進行了精子形態學評估。至少評估了200個精子，以達到可接受的低采樣誤差。以改良巴氏染色法染色后，進行精子形態玻片的制備，并嚴格按照WHO第五版精子形態分類進行閱片，為避免主觀性，閱片結果采用雙人復核的方式進行。根據精子形態分析結果分為三組，分別為<1.0%、1.0%～4.0%及>4.0%。

1.3促排卵方案:根據個體差異采取不同的方案，有卵泡期長方案、長效長方案、拮抗劑、微刺激方案，B超和血激素(E2、p、LH)測定檢測卵泡發育，當主導卵泡≥18mm，肌注HCG5000～10000IU，36h后經陰道取卵。

1.4精液處理:取卵日收集精液以CASA進行常規分析，根據精子濃度和活力選擇不同的處理方法(密度梯度或上游法)處理精液，使用瑞典Vitrolife公司提供的密度梯度分離試劑盒進行梯度離心，調整前向運動精子濃度調整至2.0～10×106/mL，低于2.0×106/mL的精液樣本，直接用于ICSI。

1.5體外受精:采用集中受精法進行體外受精，在1mL受精皿中受精，精子最終濃度為0.2×106/mL。受精皿置于5% CO2、37℃培養箱中培養。

1.6胚胎培養及移植:加精后4～6h部分體外受精(in vitro fertilization, IVF)周期進行早脫顆粒細胞，觀察2極體情況，必要時做早期補救卵泡漿內單精子注射(rescue intracytoplasmic sperm injection, RICSI)。加精后16～20h(即胚胎培養Day1)觀察受精情況。卵母細胞內可見2原核(2PN)表示正常受精，并于72h后(即胚胎培養Day3)觀察胚胎發育情況。Day3，實驗室選擇優質卵裂胚移植入女方不孕患者子宮。備注：優質卵裂胚標準：將D1為2PN，第3天卵裂球數介于7～9之間的胚胎和碎片評分為1級或2級的胚胎為優質胚胎。

1.7妊娠結局隨訪:移植胚胎后14日測血清人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)，測血β-HCG后兩周B超見孕囊、胚芽及原始心血管搏動者為臨床妊娠。經超聲確診臨床妊娠后保持電話隨訪，以獲取有關活產和出生異常的信息。

2 結 果

2.1患者一般資料:正常形態精子百分率<1.0%、1.0～4.0%及>4.0%的分別有145、726及949例，通過對患者一般資料對比發現，女方年齡、基礎FSH及體重指數等女方基本資料無顯著性差異(P>0.05)，男方患者年齡及患不孕癥年數亦未見明顯差異(P>0.05)，詳見表1。

表1 三組患者的一般資料

2.2正常形態精子百分率對輔助助孕結局的影響:結果表明，三組患者的臨床妊娠率分別為44.83%、48.90%及49.21%，抱嬰率分別為35.86%、42.98%及43.52%，自然流產率分別為8.97%、5.92%及5.69%，各組數據數值雖有一定差距，但主要是由于患者人數的差異，統計學分析發現，各組數據之間并無顯著差異(P>0.05)，表明精子形態異常對體外受精移植周期助孕結局無明顯影響，詳見表2。

表2 正常形態精子百分率對輔助助孕結局的影響n(%)

2.3正常形態精子百分率對新生兒出生安全性的影響:對已成功分娩患者進行隨訪，并結合治療前檢測數據分析發現，精子形態異常患者的精液濃度及前向運動精子率具有顯著性差異。三組患者的妊娠期分別為38.30±1.89、38.10±2.04及38.14±2.20，并無顯著性差異(P>0.05)，早產率與精子形態異常無顯著相關性，單胎的早產率均在10%左右，而雙胎的早產率高達50%左右，表明體外受精移植周期助孕的早產率同樣與單胎或雙胎相關，而與患者的正常形態精子百分率無明顯相關性。同樣的，三組患者所分娩的低體重嬰兒百分率、單胎嬰兒體重及雙胎嬰兒體重均無顯著性差異(P>0.05)，精子形態異常對新生兒的畸形率亦無明顯影響(P>0.05)，詳見表3。

表3 正常形態精子百分率對新生兒安全性的影響

3 討 論

與大多數其他哺乳動物的精子相比，人類精子的大小和形狀差異很大，不僅在頭部和頂體的大小和形狀上，而且在核空泡，中段和尾部異常方面也是如此。研究表明，精子形態異常(畸形精子癥)與較低的受精能力和潛在的DNA異常有關，特別是在單純形態畸形精子癥中[5]，精子形態對IUI結局有重大影響，正常形態精子率低于4%的患者應考慮體外受精方式[6]。多種因素對體外受精移植周期助孕結局有一定影響，包括男女方年齡、不孕年數及體重指數等[7]，本研究在排除上述其他原因后，著重探討精子形態異常對體外受精移植周期助孕結局及新生兒的影響。

國內外報道關于精子形態異常對體外受精移植周期結局影響尚無定論。Park等通過系統回顧分析發現，單獨的畸形精子癥對體外受精輔助生育妊娠結局無顯著影響[8]；劉闖等研究發現通過精液優化處理后，精子形態異常對體外受精移植周期中的胚胎質量、臨床妊娠、抱嬰率及致畸率等均無顯著的預測意義[9]。然而，也有研究表明精子形態與輔助助孕的受精率直接相關，畸形精子的頂體功能異常可直接導致體外受精失敗或影響受精率[10]。本研究通過回顧性分析在本生殖醫學中心首次行體外受精助孕的1820例精子形態異常患者，發現精子形態異常對體外受精移植周期助孕的臨床妊娠率、抱嬰率及自然流產率等結局無明顯影響，不同正常形態精子百分率亦不影響懷孕后先天性異常的發生率或自然流產率。

調查分析發現，造成上述現象的可能原因有：各個生殖中心采用的試驗方法不同，對精子形態的分類標準存在差異；不同的技術操作人員的水平及評判標準存在差異；納入病例數不一致；體外受精過程有差異等。而本研究中納入足夠的樣本量，并均為本生殖醫學中心的病例，避免了上述因素可能導致的結果不一致，所得結論具有一定的可信度。

綜上所述，本研究發現精子形態異常對及新生兒安全性等無顯著影響，孤立的精子形態異常不應作為體外受精移植周期助孕結局的預測指標，為體外受精輔助生殖的安全性提供一定的參考價值。