重組人Ⅲ型膠原蛋白的分離純化

梁鑫，張仁懷，呂自力，艾華偉，劉冬，梁波，單旭東，陳浩然

1(成都中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，附屬生殖婦幼醫(yī)院，四川 成都，610041)2(四川省人口和計劃生育科學(xué)研究所，四川 成都，610041)3(成都遠睿生物技術(shù)有限公司，四川 成都，610000)4(河南多美康生物藥業(yè)有限公司，河南 鄭州，450000)

膠原蛋白是脊椎動物的主要結(jié)構(gòu)蛋白，廣泛分布于動物結(jié)締組織、韌帶、跟腱等，約占生物體自身總蛋白含量的30%，皮膚干重的3/4[1]。同時，參與細胞的增殖、分化與遷移，使骨、腱、軟骨和皮膚具有一定機械強度[2]。因具有其他合成材料無法比擬的生物相容性、可生物降解性以及可大規(guī)模生產(chǎn)的可行性等優(yōu)點，膠原蛋白廣泛應(yīng)用于健康食品、化妝品、生物材料和醫(yī)藥工業(yè)[3-5]。

目前，膠原蛋白的生產(chǎn)方法主要有：傳統(tǒng)提取法、化學(xué)合成法、現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)法[6-7]。傳統(tǒng)提取法和化學(xué)合成法所獲得的膠原蛋白活性較低，且?guī)в邪踩[患[8-9]。與動物來源的膠原蛋白相比，重組膠原蛋白具有更強的生物學(xué)活性、安全性、親水性、可加工性和低免疫原性的特點[10-13]。已有多種通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)重組人源性膠原蛋白的研究，涉及大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞、轉(zhuǎn)基因作物、轉(zhuǎn)基因小鼠等不同表達體系。因哺乳動物細胞、昆蟲細胞、轉(zhuǎn)基因小鼠等表達體系成本高、周期長，難以滿足產(chǎn)業(yè)化需求，相比之下酵母和大腸桿菌表達系統(tǒng)具有成本低、速度快、技術(shù)相對簡單、可進行高密度發(fā)酵等優(yōu)點，是工業(yè)化生產(chǎn)的首選方式。

本研究利用酵母分泌表達獲得重組人Ⅲ型膠原蛋白發(fā)酵液，以鹽析沉淀和陽離子柱層析結(jié)合的方法，純化出高純度的重組人Ⅲ型膠原蛋白。……