妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2細胞及相關細胞因子表達水平變化的研究

何可人 王珊 于敬會 單莉莉 陳惠娜

【摘要】 目的：觀察妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2細胞及相關細胞因子表達水平的變化。方法：選擇在筆者所在醫院就診的50例妊娠期糖尿病患者為觀察組，50例健康妊娠的孕婦為對照組，收集觀察組和對照組產婦的外周血，通過流式細胞術分析Th1/Th2細胞比例，采用ELISA檢測白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-10（IL-10）、干擾素-γ（IFN-γ）的表達水平。結果：觀察組患者外周血中Th1/Th2細胞的比例高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;觀察組患者外周血中IL-2、IFN-γ的表達水平高于對照組，IL-4、IL-10的表達水平低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2細胞比例失衡，Th1細胞因子表達升高，Th2細胞因子表達降低，Th1/Th2免疫平衡的改變可能是妊娠期糖尿病免疫診斷和干預的新靶點，為妊娠期糖尿病的治療提供試驗依據。

【關鍵詞】 妊娠期糖尿病患者 Th1/Th2細胞 外周血 細胞因子 表達水平

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.19.026 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）19-00-03

Changes of Th1 / Th2 Cells and Related Cytokines Expression in Peripheral Blood of Gestational Diabetes Mellitus/HE Keren， WANG Shan， YU Jinghui， SHAN Lili， CHEN Huina. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（19）： -68

[Abstract] Objective： To observe the expression of Th1/Th2 cells and related cytokines in the peripheral blood of patients with gestational diabetes mellitus. Method： Totally 50 cases of gestational diabetes in our hospital were selected as the observation group and 50 cases of healthy pregnant women as the control group. The peripheral blood of the observation group and the control group were collected. The proportion of Th1/Th2 cells was analyzed by flow cytometry. The levels of IL-2， IL-4， IL-10， IFN-γ were detected by ELISA The level of expression. Result： The proportion of Th1/Th2 cells in the peripheral blood of the observation group was higher than that of the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression level of IL-2 and IFN-γ in the peripheral blood of the observation group were higher than those of the control group， and the expression level of IL-4 and IL-10 were lower than those of the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The imbalance of Th1/Th2 cell proportion， the increase of Th1 cytokine expression and the decrease of Th2 cytokine expression in the peripheral blood of patients with gestational diabetes mellitus may be the new target of immunodiagnosis and intervention of gestational diabetes mellitus， and provide experimental basis for the treatment of gestational diabetes mellitus.

[Key words] Gestational diabetes mellitus Th1/Th2 cells Peripheral blood Cytokines Expression level

First-authors address： Shenzhen Polytechnic， Shenzhen 518000， China

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是妊娠階段常見的并發癥之一，多發生于妊娠中晚期，表現為妊娠后首次發現葡萄糖耐量異常，容易引發患者出現產科并發癥，危及母體和胎兒的生命健康[1]。研究顯示，GDM的發生可能和遺傳因素、代謝紊亂、胰島素抵抗、妊娠激素和免疫反應等相關，探索其具體發病機制和治療策略仍是當前亟待解決的科學難題[2]。輔助性T細胞是機體免疫系統的重要組成成分，可分為Th1、Th2等多種亞群，對體液免疫和細胞免疫均有重要的調節作用[3]。呂芳等[4]研究發現GDM患者外周血中IL-6和TNF-α表達增多，其變化與胰島素抵抗呈正相關，提示免疫功能改變可能參與GDM病理過程。本研究對GDM患者外周血中的Th1/Th2細胞及相關細胞因子水平的變化進行研究，探討Th1/Th2細胞平衡在GDM中的作用及可能的機制，為GDM的防治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2018年1月-2020年1月在筆者所在醫院就診的GDM孕婦和正常妊娠產婦各50例為研究對象，納入標準：（1）單胎且足月妊娠;（2）GDM患者符合2015年10月國際婦產科聯盟發表的關于GDM的實用指南，即餐后2 h血糖值≥8.5 mmol/L或餐后1 h血糖值≥10.0 mmol/L或靜脈血空腹血糖值≥5.1 mmol/L;

（3）無妊娠合并癥和并發癥;（4）能夠配合完成研究。排除標準：（1）妊娠期高血壓或慢性高血壓患者;（2）存在反復流產病史患者;（3）存在免疫病史患者;（4）近3個月有急慢性感染情況;（5）存在內分泌疾病或使用類固醇皮質激素或免疫抑制劑治療的患者;（6）存在精神疾病或心腦血管疾病。GDM孕婦為觀察組，年齡22～45歲，平均（30.48±8.17）歲;分娩孕周37～42周，平均（38.97±1.94）周。正常妊娠產婦為對照組，年齡23～41歲，平均（29.75±8.13）歲;孕周38～41周，平均（39.83±1.97）周。兩組患者的年齡和孕周等一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。研究經醫院倫理委員會批準，且所有研究對象知情同意并簽署協議書。

1.2 方法

于分娩前抽取各研究對象空腹時的靜脈血6 ml。

取3 ml外周血置于EDTA處理過的抗凝管中，加入淋巴細胞分離液，2 000轉20 min離心，吸取中間淋巴細胞層，獲得外周血單個核細胞懸液，調整細胞濃度至1×107/ml，加入至細胞培養板中，加入250×PMA/lonomycin和250×Monensin/BFA，混合均勻后于細胞培養箱中37 ℃ 5%CO2培養5～6 h，加入anti-CD3 FITC（eBiosciences公司）和anti-CD4 PERCP（eBiosciences公司）對細胞表面抗原進行染色，使用FIX&PERM Reagent A進行細胞破膜，使用anti-IFN-γ APC（Miltenyi公司）和anti-IL-4 PE（eBiosciences公司）進行細胞內細胞因子染色，以同型IgG抗體（eBiosciences公司）作為對照，應用BD FACS流式細胞儀檢測Th1和Th2細胞，Th1為INF-γ+的CD4+細胞，Th2細胞為IL-4+的CD4+細胞。取3 ml外周血置于促凝管中，3 000轉10 min離心，將上清分離至無菌EP管中，使用IL-2、IL-4、IL-40和IFN-γ的ELISA試劑盒（均購于聯科生物技術有限公司）檢測各細胞因子的外周血表達水平，具體步驟按照說明書進行。

1.3 統計學處理

本研究數據采用SPSS 20.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用Students t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者外周血中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ表達水平的變化

觀察組患者外周血中IL-2和IFN-γ的水平高于對照組，組間差異有統計學意義（P<0.05）;觀察組患者外周血中IL-4和IL-10的水平低于對照組，組間差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組患者外周血中Th1/Th2細胞比例變化

觀察組患者外周血中Th1細胞數量多于對照組，Th2細胞數量少于對照組，Th1/Th2細胞比例高于對照組，組間比較差異均有統計學意義（P<0.05），見圖1、表2。

3 討論

GDM患者更容易引發產婦或胎兒出現先兆子癇、早產、低體重兒等嚴重情況，逐漸成為當前關注的焦點問題之一。流行病學數據顯示，亞洲女性GDM的發生風險明顯高于其他種族女性，且發病率呈現逐年增長的趨勢[5-6]。研究表明，GDM的發病機制與胰島素抵抗、機體免疫反應等因素密切相關[7]。T淋巴細胞是機體重要的免疫細胞，根據細胞表面特異性抗原的不同分為不同的亞群，CD4+T淋巴細胞也被稱為輔助性T淋巴細胞，根據其功能和細胞表面標志物的差異分為Th1、Th2、Treg等細胞亞群，對于機體的特異和非特異、體液免疫和細胞免疫有重要的調節功能[8]。

Th1和Th2細胞在正常免疫系統和疾病過程中有重要的作用，Th1細胞可介導細胞免疫，分泌IL-1、IL-2、IFN-γ、TNF-α等細胞因子，產生免疫功能;Th2細胞分泌IL-4、IL-6、IL-10和GM-CSF等細胞因子，介導體液免疫[9]。曹向可等[10]發現GDM患者體內的C-RP、TNF-α和IL-6的水平高于健康孕婦組，提示GDM病理過程中存在炎癥反應和免疫功能異常。本試驗通過ELISA檢測GDM患者和正常孕婦的外周血中細胞因子水平發現，GDM患者外周血中Th1細胞因子IL-2和IFN-γ的水平升高，Th2細胞因子IL-4和IL-10水平降低，和上述實驗結果一致，提示GDM病理過程中的炎癥反應。李曉雅等[11]提出對促炎因子和抗炎因子的檢測可能會為GDM的早起診斷和干預提供重要依據。

對外周血中的Th1和Th2細胞進行流式細胞術檢測，結果顯示GDM患者外周血中Th1細胞增多，Th2細胞減少，Th1/Th2細胞比例升高，提示GDM患者外周血中存在Th1/Th2免疫失衡。王芬等[12]發現2型糖尿病患者外周血中Treg細胞的抑制功能減弱，使得體內Th1、Th2、Th17等效應細胞功能增強，參與糖尿病的病理過程。在對GDM孕婦外周血中的淋巴細胞分析發現CD3+CD4+ICOS+細胞比例升高，說明GDM患者存在免疫功能紊亂，和本文研究結果一致，提示Th1/Th2細胞的改變可能會成為GDM患者的治療靶點之一。胰島素抵抗是糖尿病重要的發病原因，Th1/Th2細胞及細胞因子的改變與胰島素抵抗的關系值得進一步探索。

綜上所述，Th1/Th2細胞及相關細胞因子水平與GDM患者的炎癥反應和免疫調節密切相關，GDM患者外周血中IL-2和IFN-γ的水平升高，IL-4和IL-10的水平下降，Th1/Th2細胞平衡紊亂，為GDM的診斷和治療提供理論依據。

參考文獻

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[12]王芬，朱紅霞，高玉斌.2型糖尿病患者調節性T細胞的抑制功能[J].中國老年學雜志，2018，38（2）：291-292.

（收稿日期：2020-03-06） （本文編輯：郎序瑩）