PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達作用研究

馮天斌　李延儉　冼志榮　楊家誠　陶珊花　羅儉權

【摘要】 目的：探究PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達情況及臨床意義。方法：從筆者所在醫院甲狀腺癌標本庫中選取2013-2017年經手術后的組織標本，其中甲狀腺乳頭狀癌（PTC）60例，甲狀腺非惡性病例30例。采用免疫組化的方法對PAK4在甲狀腺非惡性病例與甲狀腺乳頭狀癌中的表達水平進行檢測。結果：在60例PTC中PAK4陽性表達為27例（45.00%），其中強陽性表達12例（20.00%），中等陽性表達15例（25.00%）。PTC中PAK4的陽性表達率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織中的6.67%，差異有統計學意義（P<0.05）。PAK4在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達和正常表達的性別、年齡、腫瘤大小、是否單發、是否單側比較，差異無統計學意義（P>0.05）;兩者腺體外浸潤、臨床分期、淋巴結轉移比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率較高，可能預示存在腺體外浸潤、淋巴結轉移、疾?、蠡颌羝?，為本病的早期診治提供新的策略。

【關鍵詞】 PAK4 甲狀腺乳頭狀癌 免疫組化

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.060 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）21-0-03

Study on the Expression of PAK4 in Papillary Thyroid Carcinoma/FENG Tianbin， LI Yanjian， XIAN Zhirong， YANG Jiacheng， TAO Shanhua， LUO Jianquan. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）： -147

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of PAK4 in papillary thyroid carcinoma. Method： From 2013 to 2017， there were 60 cases of papillary thyroid cancer and 30 cases of non malignant thyroid cancer were selected. The expression of PAK4 in non malignant thyroid cases and papillary thyroid carcinoma were detected by immunohistochemistry. Result： A total of 60 PTC patients， the positive expression of PAK4 was 27 cases （45.00%）， strong positive expression was 12 cases （20.00%）， moderate positive expression was 15 cases （25.00%）. The positive expression rate of PAK4 in PTC was 45.00%， which was significantly higher than the non malignant thyroid cancer （6.67%）， the difference was statistically significant （P<0.05）， there were no significant differences in gender， age， tumor size， single lesion and unilateral expression between positive and normal expression of PAK4 （P>0.05）. There were significant differences in extraglandular infiltration， clinical stage and lymph node metastasis between the two groups （P<0.05）. Conclusion： The positive expression of PAK4 in papillary thyroid carcinoma may indicate the presence of extraglandular infiltration and lymph node metastasis to Ⅲ or Ⅳ of the disease， providing a new strategy for the early diagnosis and treatment of the disease.

[Key words] PAK4 Papillary thyroid carcinoma Immunohistochemistry

First-authors address： Sihui Peoples Hospital， Sihui 526200， China

甲狀腺癌惡性程度不高，因此臨床不被重視，且其相關診斷發現不了較小的腫瘤。甲狀腺乳頭狀癌（PTC）占其病理類型的80%，為防止臨床癥狀被忽視所致PTC至疾病中晚期，死亡率增高，因此采取適宜的早期診斷尤為關鍵[1]。P21激活激酶4（PAK4）在當今已被證實，與食管癌、肝癌、胰腺癌、直腸癌及乳腺癌等腫瘤疾病的發生發展、侵襲轉移具有密切聯系[2]。PAK4是在RAS驅動腫瘤形成通路中具有關鍵作用的介導蛋白之一，能夠刺激MAPK通路[3]。曾有研究表明，PAK4與腫瘤惡性程度具有密切聯系，其表達水平提高，提示腫瘤預后不良[4]。因此，本研究就PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達情況進行研究，如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫院2013-2017年經手術切除手術后具有完整臨床資料及隨訪資料的甲狀腺乳頭狀癌60例及甲狀腺非惡性病例30例的組織標本。納入標準：參照文獻[5]《NCCN臨床實踐指南：甲狀腺癌》中甲狀腺乳頭狀癌的診斷。排除標準：既往存在手術病史或者甲狀腺癌復發;存在有神經源性疾病;合并心肝腎等功能不全;未超過18歲，懷疑或確有藥物濫用病史;受試過程中病情改變顯著，不宜進一步接受試驗;臨床病理資料缺失。甲狀腺乳頭狀癌中男21例，女39例，年齡25～67歲，平均（33.35±4.66）歲;甲狀腺非惡性病例中男8例，女22例，年齡25～66歲，平均（33.88±4.69）歲，正常甲狀腺6例，結節性甲狀腺腫9例，橋本甲狀腺炎7例，亞急性甲狀腺炎5例，甲狀腺腺瘤3例。

1.2 方法

1.2.1 試劑 鼠抗人BRAFV600E單克隆抗體（克隆VE1），武漢華美生物工程有限公司CUSABIO?;PAK4多克隆抗體-PAK4 polyclonal antibody，上海群己生物科技有限公司;PAK4 ELISA KIT/人PAK4 ELISA試劑盒，武漢菲恩生物科技有限公司;顯色劑及其他相關試劑，北京冬歌博業生物科技有限公司。

1.2.2 檢測方法 采用免疫組化的方法對PAK4在甲狀腺乳頭狀癌表達水平進行檢測，并在光學顯微鏡下閱片，采取雙盲法，其中陽性染色可見黃色或棕黃色顆粒。根據染色程度進行評分：其中0分為與背景無顯著顏色差別為陰性;1分為背景顏色存在輕微差別，染色呈淡黃色為弱陽性;2分為背景差別較為明顯，染色深黃色或淺棕色，為中度陽性;3分為染色中等棕色甚至更深，為強陽性。根據高倍鏡顯示細胞著色百分比計分：0分為總著色細胞數量所占總計細胞數量比例未超過5%;1分為百分比超過5%，未超過25%;2分為超過25%，百分比未超過50%;3分為超過50%，百分比未超過75%;4分為超過75%?？偡稚鲜鰞煞N計分方法的乘積。其中分數0分為陰性，以“-”表示為低表達;≤3分為弱陽性，以“+”表示為正常表達;4分≤總分≤6分者為中等陽性，以“++”表示為高表達;≥7分者為強陽性，以“+++”表示為過表達。其中“-”和“+”視為低表達或正常表達?！?+”和“+++”視為陽性表達。其中總分未超過4分及以下者為PAK4正常表達。

1.3 統計學處理

本研究數據采用SPSS 22.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗及Fisher確切概率檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PAK4表達情況

60例PTC中存在PAK4陽性表達27例（45.00%），其中強陽性表達及中等陽性表達分別為12例（20.00%）及15例（25.00%）。正常甲狀腺組織中未存在陽性表達，其中亞急性甲狀腺炎及甲狀腺濾泡性腺瘤中均存在1例高表達，其余未存在陽性表達。PAK4陽性表達和陰性表達見圖1。PTC中PAK4的陽性表達率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織中的6.67%，差異有統計學意義（字2=13.457，P=0.000）。

注：左圖PAK4蛋白強陽性表達;右圖PAK4蛋白陰性表達。

2.2 PAK4的表達與臨床病理特征關系

PAK4在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達和正常表達的性別、年齡、腫瘤大小、是否單發、是否單側比較，差異無統計學意義（P>0.05）;兩者腺體外浸潤、臨床分期、淋巴結轉移比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

PTC發病過程較為隱匿，因此其早期診斷尤為關鍵，本病的發病機制較為復雜[6-7]。PAK4是1994年在進行RAS相關蛋白研究中發現的一種下游分子蛋白，參與經典MAPK信號通路[8]。曾有研究表明，PAK4能不經過RAF及MEK等激酶，通過其他途徑激活ERK以調節PTC細胞的轉移[9-11]。筆者研究表明，PTC中PAK4的陽性達率為45.00%，顯著高于甲狀腺良性組織的6.67%，與PTC臨床病理參數相關性的研究中發現，臨床分期越高，PAK4表達率越高，這與胃癌、卵巢癌及乳腺癌的研究基本一致。PAK4在有腺體外浸潤及淋巴結轉移中呈高表達，這與金成玲[12]在結腸癌及胃癌的研究中存在相似結論。此外在性別、年齡、腫瘤大小、單發與否及單側與否等相關因素中差異無統計學意義。黃凱等[13]通過對膀胱癌進行研究發現，腫瘤較大PAK4表達較高，與本實驗研究存在差異，這可能與實驗樣本較小有關。此外年齡也是甲狀腺癌的一項危險因素，可能也與樣本數量存在關系，因此進一步擴大樣本對本實驗研究具有重要意義。

綜上，PAK4在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率較高，可能作為預測是否存在腺體外浸潤、癌癥分期、淋巴結轉移的有效指標，為本病的早期診治提供新的策略。

參考文獻

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（收稿日期：2020-02-28） （本文編輯：何玉勤）