乳及乳制品中抗生素殘留檢測(cè)研究進(jìn)展

馬維

【摘 ?要】牛奶營(yíng)養(yǎng)豐富，能提高人體免疫力，增強(qiáng)體質(zhì)。它是對(duì)人類最有益和健康的食物之一。隨著乳及乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素被廣泛應(yīng)用。畜牧業(yè)雖然取得了增產(chǎn)的效果，但不可避免地會(huì)造成抗生素殘留。因此，尋找一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的抗生素檢測(cè)方法，以解決當(dāng)前我國(guó)乳制品行業(yè)面臨的問(wèn)題，已成為一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。

【關(guān)鍵詞】乳及乳制品;抗生素殘留;檢測(cè)研究

引言

牛奶因其營(yíng)養(yǎng)豐富，易于消化，便于食用，而成為人類理想的天然食品。常喝牛奶有助于身體的發(fā)育，補(bǔ)足鈣質(zhì)需求量，減少骨骼萎縮，降低骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生概率。然而，隨著乳及乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，抗生素被大量應(yīng)用于畜牧業(yè)中，其根本目的是為了保障動(dòng)物的健康以及畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，但也不可避免地造成了乳制品中抗生素的殘留。乳與乳制品中抗生素的種類主要包括：四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類以及氨基糖苷類等，因其可以有效預(yù)防和治療人類和動(dòng)物的傳染病，而在人類醫(yī)學(xué)和畜牧業(yè)中受到極大關(guān)注，被廣泛用作食品添加劑以及治療畜牧業(yè)中的細(xì)菌感染性疾病。牛奶中的抗生素殘留是全世界奶牛業(yè)普遍存在的問(wèn)題，這是因?yàn)槟膛?chǎng)均用抗生素類藥物治療奶牛疾病，如奶牛的乳腺炎、子宮內(nèi)膜炎或其他炎癥性疾病。據(jù)調(diào)查，在我國(guó)臨床型奶牛乳腺炎發(fā)病率占牛乳腺炎總發(fā)病率的21%～23%。

1乳制品中抗生素殘留現(xiàn)狀

自2001年10月起，中國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《無(wú)公害食品生鮮牛乳行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，明確了生鮮乳中“不得檢出抗生素”的衛(wèi)生指標(biāo)。但該標(biāo)準(zhǔn)在國(guó)內(nèi)并未得到嚴(yán)格執(zhí)行，因此一直未能解決我國(guó)乳制品中抗生素殘留問(wèn)題，引發(fā)人們對(duì)牛奶安全性的擔(dān)憂，成為人們?nèi)找骊P(guān)注的熱點(diǎn)。2009年，劉衛(wèi)華等[3]在寧夏共檢出原料奶363批次，檢出β-內(nèi)酰胺酶112批次，抗生素總殘留145批次，發(fā)現(xiàn)存在違規(guī)添加和違反停藥期抗生素超標(biāo)的情況。2012年對(duì)鎮(zhèn)江市奶牛場(chǎng)包裝好的純牛奶和鮮奶進(jìn)行隨機(jī)抽樣檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)存在一定量的抗生素殘留。從這個(gè)角度來(lái)看，我國(guó)乳制品行業(yè)將長(zhǎng)期存在牛奶中的抗生素殘留。

2乳及乳制品中殘留的抗生素

幾十年來(lái)，抗生素藥物特別是四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類抗生素是乳與乳制品中抗生素殘留的主要類別。四環(huán)素類藥物屬于一個(gè)抗生素大家族，它的首批成員來(lái)自放線菌的鏈霉菌屬。1944年從金色鏈霉菌中分離出金霉素，幾年后，分別從龜裂鏈霉菌和金霉素鏈霉菌中分離出土霉素和地美環(huán)素，金霉素氫解后生成四環(huán)素。20世紀(jì)60年代初，人們開(kāi)發(fā)出了多西環(huán)素，它是土霉素的半合成衍生物，2005年又合成出替加環(huán)素。這一類廣譜抗生素，能抑制蛋白質(zhì)合成，使藥物可逆地與敏感菌的核糖體30S亞基結(jié)合，阻礙氨基酰tRNA與mRNA-核糖體復(fù)合體上的受體結(jié)合，阻止氨基酸增加到肽鏈上，且對(duì)四環(huán)素類呈抑菌活性，但是對(duì)敏感菌具有殺滅作用。β-內(nèi)酰胺類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，這類藥物都具有殺菌活性，主要通過(guò)干擾細(xì)菌繁殖過(guò)程中肽聚糖的合成來(lái)發(fā)揮效果。β-內(nèi)酰胺類抗生素主要通過(guò)共價(jià)鍵與細(xì)菌細(xì)胞壁上的青霉素結(jié)合成蛋白（PBP），PBP是一種胞壁粘肽合成酶，可以使肽聚糖分子的N-乙酰胞壁酸-N-乙酰葡糖胺骨干上肽鏈之間交叉連接。當(dāng)抗生素與PBP結(jié)合后，細(xì)菌細(xì)胞壁合成因缺乏交叉連接，細(xì)胞壁形成受阻，從而導(dǎo)致生長(zhǎng)細(xì)胞裂解。

3微生物檢測(cè)法

3.1紙片法

常用紙張方法：蘇云金芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌。這兩種方法的檢測(cè)過(guò)程基本相同，不同的菌株用于檢測(cè)奶牛奶中的青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）。將菌株（蘇云金芽孢桿菌或蘇云金芽孢桿菌）接種到培養(yǎng)基上，放在一張裝滿經(jīng)檢驗(yàn)?zāi)讨破返膱A濾紙上，然后放在一張控制圓紙上，這是一張含有標(biāo)準(zhǔn)抗生素的陽(yáng)性紙。奶牛奶中若無(wú)抗生素，微生物繁殖生長(zhǎng)，濾紙不形成抗菌圈，則為陰性。另一方面，牛奶中有抗生素或抑制劑，紙張上形成了抗菌圈。為了確定陽(yáng)性和陰性結(jié)果是否為青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）、加熱奶制品和添加青霉素酶測(cè)定，奶制品中沒(méi)有表明青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）存在的抗菌圈。如果抗菌圈仍然存在，這意味著其他化合物對(duì)抗菌作用負(fù)有責(zé)任。但是，當(dāng)抗菌戒指較小且沒(méi)有完全消失時(shí)，牛奶中存在不止一種抗菌化合物。此檢測(cè)方法的檢測(cè)限制為0.01IU/mL。

3.2理化檢驗(yàn)法

理化學(xué)檢測(cè)方法是一種利用基于抗生素分子性質(zhì)的測(cè)試儀器進(jìn)行分離和檢測(cè)的方法。分離試驗(yàn)使用的試驗(yàn)技術(shù)包括色譜和電泳、紫外線、熒光、質(zhì)譜等。由于檢測(cè)的敏感性和結(jié)果的準(zhǔn)確穩(wěn)定性，物理化學(xué)檢測(cè)方法是準(zhǔn)確檢測(cè)抗生素殘留的一種方法。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)中國(guó)銷(xiāo)售的50種奶制品進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)出樣品中的氯霉素含量為0.48微克/千克。這些樣品的檢測(cè)限制不能令人滿意，這違反了禁止我國(guó)食用食品組織檢測(cè)氯霉素的條例。結(jié)合超聲波輔助提取和固相柱提取，優(yōu)化了HPLC色譜分析條件，建立了HPLC色譜綜合分析方法，檢測(cè)牛奶中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留。這些方法的優(yōu)點(diǎn)是質(zhì)量和數(shù)量上更精確，但檢測(cè)儀器的成本更高，程序更復(fù)雜，有機(jī)溶劑的使用量也更大，對(duì)人類和環(huán)境構(gòu)成了一定的風(fēng)險(xiǎn)。

結(jié)束語(yǔ)

乳及乳制品中抗生素殘留問(wèn)題是涉及人類健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題，目前我國(guó)為了解決這個(gè)問(wèn)題已經(jīng)在不斷完善乳及乳制品中抗生素殘留的限定標(biāo)準(zhǔn)，科研工作者也一直在尋求簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確和靈敏度高的檢測(cè)方法，使得乳及乳制品中抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)的研究得到了很好的發(fā)展。微生物檢測(cè)法由于其檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度差以及易產(chǎn)生誤差而很少被應(yīng)用于抗生素殘留的檢測(cè)。理化檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)室常用的操作方法，其高效靈敏、應(yīng)用范圍廣，但常須要專門(mén)的人員進(jìn)行操作，因此不適用于乳品企業(yè)的在線監(jiān)測(cè)。

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