Angpt2/Angpt1比值與腦梗死病人神經功能缺損程度及預后的關系探討

廖健妮，羅 薇，嚴文靜

腦梗死又稱為缺血性腦卒中，是由于局部腦組織缺血出現缺氧、組織壞死等，且急性腦梗死發病率及致殘率逐年升高，嚴重影響病人生活及工作[1]。既往研究表明，腦梗死病人腦缺血引發氧化應激反應，導致自由基生成量增加進而引起腦損害[2]，故應及早治療腦梗死并降低致殘率以改善病人預后。有研究表明，血管生成素1(angiopoietin-1，Angpt1)屬于血管生成素家族，主要作用是維持血管穩定性[3]。血管生成素2(angiopoietin-2，Angpt2)是Angpt1的酪氨酸激酶受體2(Tie2)受體拮抗劑，有研究表明Angpt2參與感染性休克、心臟血管疾病及急性心肌梗死等多種病理生理過程并發揮促炎作用[4]。相關研究表明，心血管疾病病人新血管生成過程中Angpt1與Angpt2均發揮重要作用，Angpt1/Angpt2比值可反映病人體內血管穩定性[5]。關于Angpt1/Angpt2比值與腦梗死病人的相關性研究較少，因此本研究探討Angpt1/Angpt2比值與腦梗死病人神經功能缺損程度及預后的關系，為提高臨床療效及改善預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年7月—2018年7月我院收治的108例急性腦梗死病人為腦梗死組，所有病人均符合急性腦梗死診斷標準[6]，且均經頭顱CT或磁共振成像確診。根據美國國立衛生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS)評估腦梗死組神經功能缺損程度，NIHSS評分1～15分為輕度組(33例)，NIHSS評分16～30分為中度組(40例)，NIHSS評分31～45分為重度組(35例)[7]。同時以我院門診健康體檢者78名為對照組。本研究經醫院倫理委員會批準，所有受試者或家屬均知情且簽署同意書。納入標準：急性腦梗死病人均為首次發病；所有病人均于發病48 h內入院；病人未接受抗血小板、抗凝、溶栓等治療；對照組體檢報告顯示正常。排除標準：外傷導致的腦梗死病人；心、肝、腎等功能嚴重損傷；伴有凝血功能障礙；存在顱內腦出血或存在占位性疾病；精神疾病病人。

1.2 研究方法

1.2.1 逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測血清Angpt1、Angpt2表達水平 所有研究對象均于入組后抽取空腹靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用SV Total RNA Isolation System Kit試劑盒(美國Promega公司)提取總RNA，應用紫外分光光度計檢測提取RNA的濃度及純度。根據RR036A Takara PrimeScriptTMRT Master Mix (Perfect Real Time)試劑盒(北京麥瑞博生物科技有限公司)將RNA反轉錄為cDNA。通過Primer軟件設計Angpt1、Angpt2引物，Angpt1正向引物序列為5′-TGCACTAA AGAAGGTGTTTTGCT-3′，反向引物序列為5′-CCGGTGTTGTATTACTGTCCAA-3′；Angpt2正向引物序列為5′-CCTCGACTACGACGACTCAGT-3′，反向引物序列為5′-TCTGCACCAC ATTCTGTTGGA-3′；β-actin正向引物序列為5′-TGCCATCCTAAAAGCCAC-3′，反向引物序列為5′-TCAACTGGTCTCAAGTCAGTG-3′，引物均由上海生工生物技術服務有限公司合成。按照SYBR Green PCR試劑盒(德國QIAGEN公司)進行RT-PCR反應，體系20 μL：SYBR Premix Ex Taq TM混合液10 μL，cDNA模板(稀釋20倍) 2 μL，正反向游引物各1 μL，ddH2O 6 μL。反應條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共42個循環。采用2-ΔΔCt相對定量法計算Angpt1、Angpt2 mRNA的相對表達量并計算Angpt2/Angpt1比值。其中7500型ABI實時熒光定量PCR儀購自美國ABI公司；SMA2000超微量紫外分光光度計購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.2.2 腦梗死病人預后評估 所有急性腦梗死病人出院3個月后均采用改良Rankin量表(Modified Rankin Scale，mRS)評定預后情況，mRS評分為≤2分為預后良好，>2分為預后不良[8]。本研究中急性腦梗死病人中預后良好86例(預后不良組)和預后不良22例(預后良好組)。

1.2.3 觀察指標 所有研究對象均于入組后抽取空腹靜脈血5 mL，應用日立7170A型全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)，并記錄急性腦梗死病人NIHSS評分。

2 結 果

2.1 兩組臨床資料比較(見表1)

表1 兩組臨床資料比較

2.2 不同組別Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評分比較 與對照組比較，腦梗死組及不同神經功能缺損程度病人血清Angpt2表達水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評分均升高(P<0.05)，且重度組與中度組高于輕度組(P<0.05)，重度組高于中度組(P<0.05)。與對照組比較，腦梗死組病人及不同神經功能缺損程度病人血清Angpt1水平降低(P<0.05)，且重度組與中度組低于輕度組(P<0.05)，重度組低于中度組(P<0.05)。詳見表2。

表2 不同組別Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評分比較(±s)

2.3 腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評分的相關性分析 Pearson相關性分析結果顯示：Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評分呈正相關(r=0.463，P=0.000)，詳見圖1。

圖1 腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS 評分相關性分析的散點圖

2.4 影響腦梗死病人預后的單因素分析 根據mRS評分將腦梗死病人預后分為預后良好組(86例)與預后不良組(22例)，其中預后良好組mRS評分為(1.26±0.41)分，預后不良組為(4.85±1.55)分，兩組比較差異有統計學意義(t=-19.227，P=0.000)。將影響腦梗死病人預后的因素進行單因素分析，結果顯示：預后不良組年齡、收縮壓、NIHSS評分、Angpt2/Angpt1比值均高于預后良好組(P<0.05)。詳見表3。

表3 影響腦梗死病人預后的單因素分析

2.5 影響腦梗死病人預后的多因素Logistic回歸分析 Logistic多元回歸分析結果顯示：年齡、NIHSS評分、Angpt2/Angpt1比值均為影響腦梗死病人預后的獨立危險因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 影響腦梗死病人預后的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

腦梗死病人腦細胞釋放腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-8(IL-8)等炎性因子并引發有害的神經毒性反應。有研究顯示，機體炎癥反應和腦梗死發生及發展過程與神經功能缺損程度密切相關[9]。炎性因子釋放進一步加重病體內炎癥反應，增加血管通透性，導致神經功能惡化[10]。早期采取干預措施可有效改善腦梗死病人預后，因此，尋找簡便有效的監測指標對提高療效及改善病人預后具有重要意義。

血管生成素作用于血管內皮細胞且具有特異性，其中Angpt1可維持并保護血管內皮穩定，而Angpt2破壞血管穩定并促進內皮細胞增殖，與Angpt1之間存在拮抗作用[11]。Angpt1通過分泌糖蛋白促使內皮細胞酪氨酸磷酸化在血管發育及生成過程中發揮重要作用；Angpt2屬于分泌型細胞因子并特異性作用于Tie-2，可抑制Angpt1對血管的保護作用，并促使血管結構松解進而促進血管形成，增加內皮細胞對血管內皮生長因子(VEGF)敏感性，促進血管新生[12-13]。有研究表明，VEGF可上調Angpt2表達進而促進血管增生[14-15]。相關研究表明，Angpt2具有促血管生成與致炎雙重作用，并可作為判斷疾病進展及預后的新型標志物[16]。有研究顯示，黃體血管結構變化與Angpt2/Angpt1比值有關，早期與發展期黃體血管新生Angpt2/Angpt1比值升高，中、晚期血管內皮細胞退化Angpt2/Angpt1比值降低[17]。

本研究按照神經功能缺損程度將腦梗死病人分為輕度組、中度組與重度組，結果顯示腦梗死組病人及不同神經功能缺損程度病人血清Angpt2表達水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS評分均高于對照組，且重度組高于輕度組、中度組；血清Angpt1水平降低，重度組低于輕度組、中度組，說明Angpt1、Angpt2參與腦梗死發生過程，Angpt2/Angpt1比值隨著腦梗死病人神經功能缺損程度加重明顯升高。進一步分析腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評分關系，結果顯示Angpt2/Angpt1比值與NIHSS評分呈正相關，提示Angpt2/Angpt1比值可反映腦梗死病人神經功能缺損程度。

腦梗死病人血壓升高損害血管內皮功能并加重血管炎癥反應及氧化應激反應，導致病人預后差[18]。高NIHSS評分是腦梗死病人預后不良的危險因素，病人神經功能缺損程度升高可增加預后不良風險[19]。本研究根據mRS評分將腦梗死病人分為預后良好組與預后不良組，分析影響腦梗死病人預后的相關因素，結果顯示預后不良組mRS評分高于預后良好組；隨著腦梗死病人年齡增加、收縮壓、NIHSS評分及Angpt2/Angpt1比值升高病人預后越差。本研究采用Logistic多因素回歸分析腦梗死病人預后的影響因素，結果顯示年齡、NIHSS評分、Angpt2/Angpt1比值均為影響腦梗死病人預后的獨立危險因素，提示年齡、NIHSS評分、Angpt2/Angpt1比值與腦梗死病人預后有關，可用于判斷病人預后。

綜上所述，腦梗死病人Angpt2/Angpt1比值升高，且與神經功能缺損程度有關，Angpt2/Angpt1比值越高病人預后越差，監測Angpt2/Angpt1比值變化有助于判斷腦梗死病人病情進展及預后。本研究存在不足：關于Angpt2與Angpt1及Angpt2/Angpt1比值在腦梗死疾病進展及神經功能缺損中的具體調控作用機制有待深入研究。