喉癌患者術后復發與COX-2 表達的關系研究

代文意，魏鑫鑫

（南陽市中心醫院，河南 南陽473009）

喉癌時咽喉部常見的惡性腫瘤,雖然目前喉癌的根治性手術切除率及綜合治療措施有明顯的進步,但是術后腫瘤的復發仍然是影響患者生存期的最主要的原因[1]。與喉癌復發轉移的相關因素較多,在具有相關臨床高危因素的患者中,喉癌術后復發導致的患者病情進展的風險更高,而且復發后腫瘤進展的更快[2]。 通過對相關的高位因素的分析，進而對喉癌術后復發進行預測,能夠為喉癌的臨床治療提供參考。 喉癌復發轉移與腫瘤細胞增殖、轉移相關的細胞因子關系極為密切,環氧化酶-2（COX-2）是前列腺素合成過程中的限速酶，在正常狀態處于低表達狀態，而生長因子、炎癥介質及促癌基因等能夠誘導COX-2 的表達，COX-2 能夠誘導氧化應激反應,加劇游離自由基對于癌細胞核基因的整合,提高上皮細胞核DNA 的分裂速度[3,4]。 COX-2能夠提高癌細胞粘附能力,促進癌細胞對于基底膜組織的浸潤,最終影響到喉癌的復發轉移[5]。為了揭示COX-2 蛋白的表達與喉癌患者的病情關系，從而為臨床上喉癌的診療提供參考,本次研究選取2 013 年1 月-2015 年8 月我院實施手術治療的喉癌患者81 例,探討了COX-2 蛋白的表達及其與喉癌患者的病情關系,分析了喉癌術后復發的高危因素，報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象選取 2013 年1 月-2015 年8 月我院實施手術治療的喉癌患者81 例，對患者進行3 年隨訪，根據是否發生局部復發分為復發組27 例和未復發組54 例。 復發組，患者年齡42~71 歲，平均56.1±10.4 歲；性別構成：男17 例、女10 例。未復發組，患者年齡38~75 歲，平均58.0±11.5 歲；性別構成：男38 例、女16 例。 兩組患者的年齡、性別情況比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 相關標準 診斷標準：喉癌患者的診斷參考中華醫學會制定的標準[6]；納入標準：⑴經病理學檢查證實；⑵在我院接受手術治療；⑶術前無放化療史；⑷均為原發性喉癌；⑸本研究符合《赫爾辛基宣言》相關醫學倫理規定。 排除標準：⑴合并其他部位的惡性腫瘤；⑵病理診斷不明確；⑶伴有免疫系統疾病；⑷未能參與術后隨訪；⑸因其他疾病導致死亡。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色技術 采用石蠟切片, 脫水操作后采用3%H2O2室溫條件下孵育20min， 磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5min，倒去血清后不清洗，加入一抗(購自賽默飛世爾中國1:1000)5ml,37℃孵育2h，或者放置4℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3 次,每次5min,加入生物素熒光標記的二抗（購自賽默飛世爾中國1:2000）3ml,37℃孵育20~30 min,磷酸鹽緩沖液清洗3 次,每次5min,加入Streptavidin/HRP 辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃孵育20~30min，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5min，增強型HRP-DAB 底物顯色試劑盒(PA110)顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3.2 免疫組化讀片 免疫組化結果判定：COX-2蛋白的陽性著色表達于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例： 陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細胞數51%～75%為3 分、陽性細胞數所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3 分為陽性；總分<3 分, “-”表達；為3～5 分，“+”表達；為6～9 分，“++”表達；>9 分，“+++”表達。

1.4 統計分析 本研究中所有數據的分析均采用SPSS21.0 版本，年齡采用x±s 表示，組間比較采用t檢驗；COX-2 蛋白陽性表達率組間比較采用秩和檢驗或χ2檢驗；多因素分析采用Logistic 回歸分析法；P<0.05 為有統計學意義。

2 結果

2.1 復發組和未復發組患者的COX-2 蛋白表達對比 經秩和檢驗分析，復發組患者手術后喉癌組織中的COX-2 蛋白表達強度顯著高于未復發組患者，差異具有統計學意義（P<0.05）；見表1。

表1 復發組和未復發組患者的COX-2 蛋白表達對比[n（%）]

2.2 復發組和未復發組患者的病理學特征對比復發組患者的低分化占比、發生淋巴結轉移率均高于未復發組的患者,差異具有統計學意義(P<0.05)；復發組和未復發組患者的TNM 分期、腫瘤位置分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)；見表2。

表2 復發組和未復發組患者的病理學特征對比

2.3 影響喉癌患者術后復發的多因素分析 采用Logistic 回歸分析，以術后是否復發作為因變量，結果2.1 及2.2 中具有統計學意義的分化程度、淋巴結轉移、COX-2 表達情況作為自變量，結果顯示分化程度越低、發生淋巴結轉移、COX-2 陽性表達是喉癌患者術后復發的獨立危險因素(P<0.05);見表3。

表3 影響喉癌患者術后復發的多因素分析

3 討論

喉癌術后復發與多種因素有關,其中腫瘤的惡性生物學行為與術后復發轉移的發生關系最為密切[7]。 有研究顯示[8]，在具有組織分級惡化或者增殖指數KI-67 明顯上升的喉癌患者中，其3 內或者5內的復發風險可超過15%以上。 臨床上復發的喉癌患者,其無瘤生存時間及無進展生存期均明顯的縮短,腫瘤惡病質或者多發遠處轉移的風險也明顯上升[9]。 因此較早的對喉癌復發轉移風險進行評估并加以干預, 對于改善患者的預后具有積極的作用。 鱗狀上皮細胞抗原對喉癌的復發具有一定的預測價值, 但其預測的漏診或者假陽性率仍然較高,預測的可參考性并不高。 COX-2 蛋白是與腫瘤惡性生物學行為密切相關的細胞因子,其與腫瘤的增殖及侵襲能力密切相關。 COX-2 蛋白對于腫瘤細胞膜穩定性的破壞作用,能夠提高腫瘤細胞結構蛋白的翻譯合成速度, 影響到癌細胞的擴增風險[10,11]。有研究者探討了COX-2 蛋白在喉癌患者中的表達情況，發現在喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達陽性率可超過30%以上[12],但缺乏對于C OX-2 的表達與喉癌術后復發的關系研究。 本次研究通過對喉癌術后復發患者病灶組織中COX-2蛋白的表達分析,能夠在部分揭露喉癌復發機制的同時，為臨床上喉癌的復發提供高危預測性指標。

本次研究重點探討了COX-2 蛋白在喉癌患者中的表達情況,發現在復發的喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達陽性率水平明顯上升，高于未復發的喉癌患者，統計學差異顯著，表明COX-2蛋白的高表達能夠影響到喉癌的術后復發過程。COX-2 蛋白的高表達對于喉癌復發影響的機制，主要在于COX-2 蛋白能夠通過影響到殘留癌細胞染色體末端結構的穩定性,提高氧化應激環境中癌細胞基因突變的風險,最終促進殘留癌細胞的異常增殖和異常分化過程。 有其他研究者也認為，在喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達陽性率水平可隨著患者臨床預后的惡化而明顯上升，特別是在合并有遠期復發或者遠處轉移的患者中，COX-2 蛋白的高表達態勢更為明顯[13]。 對于復發及未復發喉癌患者進行臨床病理特征的對比，發現在復發組喉癌患者中,其癌細胞分化程度往往較低，同時癌細胞低分化的占比更高，提示了癌細胞分化程度及淋巴結轉移對于喉癌術后復發的影響。分析其原因,考慮由于低分化的癌細胞，其生物學行為的惡化較為明顯，浸潤及轉移的風險較高，從而增加了喉癌復發的可能； 而淋巴結轉移的患者,其癌細胞播散的風險也往往較高，癌細胞的過度播散影響到了手術根治性切除的效果,導致喉癌術后復發的發生[14,15]。 但本次研究并未發現喉癌臨床分期或者喉癌位置對于喉癌復發的影響,提示臨床分期的改變并不會影響到殘留癌細胞的復發風險。 危險因素分析可見，分化程度越低、發生淋巴結轉移、COX-2 陽性表達是喉癌患者術后復發的獨立危險因素,提示臨床上對于相關高危因素的患者，應采用綜合性的治療措施，進而改善喉癌患者的臨床結局。 術后復發的喉癌患者生存期降低的重要原因,但臨床并無有效的喉癌術后復發預測指標。 而本組研究通過檢測研究發現，術后復發的喉癌患者中，COX-2 蛋白的表達陽性率較高, 同時COX-2 高表達、癌細胞低分化或者淋巴結轉移，是影響喉癌復發的獨立風險因素，COX-2 等指標或可能成為喉癌術后復發預測指標。

綜上所述, 本次研究對于喉癌患者中COX-2蛋白的表達分析,能夠為臨床上喉癌的治療提供高危預測性指標。